李保卫
- 作品数：23 被引量：41H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种可同时表达多种shRNA的载体pCSH1－n及其构建方法
- 本发明涉及一种可同时表达多种shRNA的载体pCSH1－n，可在一个载体上同时实现对多个基因的干扰，所说载体pCSH1包含有基本质粒序列、shRNA转录单位和两组多克隆位点，插入针对靶基因的shRNA模板后，转染细胞或动...
- 邵荣光何红伟刘铁刚张敏李保卫边春景刘霞封云
- 文献传递
- 人乳头瘤病毒（HPV）L2肽免疫小鼠诱导的抗体水平与保护作用的关系研究被引量：2
- 2010年
- 目的 检测HPV-58 L2 11～200 AA肽在动物体内对HPV的保护效果,并分析疫苗诱导的抗体滴度或中和抗体滴度与疫苗保护作用之间的对应关系.方法 利用大肠杆菌表达HPV-58L2 11～200 AA肽,纯化目的 蛋白并与铝佐剂吸附后免疫小鼠,利用小鼠HPV-58假病毒感染模型检测不同剂量的免疫原对小鼠的保护作用.通过ELISA和假病毒中和抗体检测方法 检测免疫血清中的总抗体水平和中和抗体水平,分析具有保护作用的抗体或中和抗体滴度.结果 当蛋白免疫剂量为8μg时,能够完全保护小鼠不受HPV假病毒的感染.小鼠免疫血清中的中和抗体水平较低,利用已建立的假病毒中和试验方法 检测不到血清中的中和抗体.而利用ELISA检测血清中的总抗体水平结果 显示,免疫血清中的总抗体水平与疫苗的保护效果之间存在对应关系,当抗体滴度大于等于1：25 000时,小鼠体内检测不到荧光信号,能够保护机体不受假病毒的感染.结论 HPV-58 L2 11～200 AA肽能够保护小鼠不受假病毒的感染,L2 11～200 AA肽具有较好的疫苗发展前景,其引发的总抗体水平可以作为评价保护效果的间接指标.
- 吴雪伶崔俊生孟淑芳李保卫张春涛樊金萍邵荣光王佑春
- 关键词：人乳头瘤病毒假病毒中和抗体
- 大鼠脑胶质瘤荧光素酶动物模型建模细胞株C6-Luc的构建被引量：3
- 2011年
- 目的构建稳定表达萤火虫荧光素酶的大鼠脑胶质瘤细胞株C6-Luc。方法通过浓度梯度法测定C6大鼠脑胶质瘤细胞的潮霉素最佳筛选浓度。使用FuGENEHD转染试剂将表达荧光素酶的真核质粒pGL4.50转染至C6细胞,应用潮霉素筛选多克隆细胞株,进一步采用有限稀释法筛选单克隆细胞株。采用报告基因分析对单克隆细胞株进行阳性鉴定,并考察荧光素酶在阳性克隆中表达的稳定性。对阳性克隆进行体外生物发光检测,确定最小细胞检测量,并采用线性回归分析生物发光强度与细胞数量的相关性。将阳性克隆细胞种植于Wistar大鼠脑部,应用生物发光成像检测系统对肿瘤细胞在脑部的生长进行体内监测。结果 C6细胞的潮霉素最佳筛选浓度为250μg/ml。质粒pGL4.50成功转染至C6细胞,通过潮霉素抗性筛选得到12个单克隆细胞株。通过荧光素酶报告基因分析,成功鉴定了荧光素酶表达活性最高的阳性克隆,命名为C6-Luc,连续培养3代后C6-Luc细胞表达荧光素酶的活性无显著差异。体外生物发光检测结果显示C6-Luc细胞的最小检测数量为78个,细胞发光强度(y)与细胞数量(x)呈良好的线性关系,回归方程为y=81.348x-2143.1,相关系数r=0.997。体内生物发光检测结果显示,Wistar大鼠脑部种植C6-Luc细胞后,随肿瘤体积增大,大鼠脑部的发光强度逐渐增强。结论成功构建了稳定表达荧光素酶的大鼠脑胶质瘤细胞株C6-Luc。
- 黄伟吕明李保卫王玉丽邵荣光高钟镐
- 关键词：荧光素酶类生物发光成像动物
- 不同力达霉素与抗VI型胶原酶单抗偶联物的抗肿瘤作用被引量：8
- 2007年
- 研究不同偶联方法制备的力达霉素(LDM)与抗IV型胶原酶单抗3G11免疫偶联物的选择性抗肿瘤作用。采用SPDP和SMBS作为偶联剂,将LDM辅基蛋白69位赖氨酸与2-亚氨基四氢噻吩修饰的单抗3G11连接,制备免疫偶联物;ELISA法测定偶联物的免疫活性,克隆形成法及人HT-1080细胞免疫缺陷小鼠移植模型观察两种偶联物的抗肿瘤作用。偶联物保留了单抗3G11对IV型胶原酶的免疫活性,3G11-SMBS-LDM对体外培养的HT-1080细胞的杀伤作用强于LDM和3G11-SPDP-LDM。动物实验显示,LDM在等摩尔剂量条件下3G11-SMBS-LDM的抑瘤率为86.1%,游离的LDM组为71.2%,3G11-SPDP-LDM组为77.1%,3G11-SMBS-LDM的抑制作用显著增强。3G11-SMBS-LDM组动物的平均生存时间延长为163.7%,3G11-SPDP-LDM组为125.3%,LDM组为71.9%,3G11-SMBS-LDM能显著延长荷瘤鼠的生存期,两个偶联物之间有显著性差异。3G11-SMBS-LDM偶联物更具有选择性抗肿瘤作用,疗效显著提高,荷瘤动物生存期延长,毒性明显降低,可能成为新的肿瘤治疗药物。
- 封云甄永苏戴垚尚伯杨张敏何红伟李保卫邵荣光
- 关键词：免疫偶联物力达霉素单克隆抗体靶向治疗
- 抗Ⅳ型胶原酶抗体Fab'片段力达霉素偶联物的抗肿瘤侵袭转移作用被引量：6
- 2011年
- 本研究拟阐明力达霉素(LDM)与抗Ⅳ型胶原酶单抗小型化免疫偶联物Fab'-LDM的抗肿瘤侵袭转移作用。采用Boyden小室体外侵袭实验,检测Fab'-LDM免疫偶联物对人纤维肉瘤HT-1080细胞侵袭能力的影响;进一步采用明胶酶谱实验研究其对MMP-2和MMP-9分泌的影响,以及RT-PCR法检测其对TIMP-1 mRNA表达水平的影响;应用裸鼠体内移植人纤维肉瘤HT-1080模型,探讨Fab'-LDM对肿瘤的生长抑制作用。Boyden小室体外侵袭结果表明,Fab'-LDM对HT-1080侵袭转移存在剂量依赖性抑制作用:Fab'-LDM(5和10 nmol.L-1)的侵袭抑制作用分别达到(60±12)%和(79±11)%。明胶酶谱实验证实,Fab'-LDM偶联物(5和10 nmol.L-1)对MMP-2和MMP-9型明胶酶分泌的抑制作用达到(42±8)%、(54±6)%和(57±3)%、(87±1)%。同时RT-PCR检测显示,10 nmol.L-1 Fab'-LDM显著提高TIMP-1 mRNA表达水平。体内实验显示,与对照相比,Fab'片段组、LDM组和Fab'-LDM组的肿瘤生长抑制率分别为:(30±13)%、(74±22)%和(86±26)%,对HT-1080移植瘤的生长均具有显著抑制作用;其中,Fab'-LDM偶联物的抑瘤率最高,与LDM组相比有显著差异(P=0.045)。Fab'-LDM偶联物在体内和体外均对肿瘤侵袭转移有抑制作用,有望成为新型抗肿瘤侵袭转移的生物治疗剂。
- 封云何红伟李保卫张征仙陈曦李晓芳
- 关键词：力达霉素免疫偶联物
- shRNA双表达载体pCSH1的构建及抗肿瘤活性研究
- 2010年
- 目的构建一种可同时表达靶向两种基因shRNA的瞬时表达载体,以提高RNA干扰效率和降低载体的非特异毒性。方法载体采用pUC19的质粒基本序列,RNA聚合酶III识别的H1启动子,并利用同尾酶的特性设计两个多克隆位点,用DNA重组技术构建了载体pCSH1;以pCSH1为基础,构建靶向N-Ras或c-Myc的单干扰载体,以及靶向N-Ras和c-Myc的双干扰载体,并验证其干扰效率;并用克隆形成法验证了载体的抗肿瘤活性;此外还将靶向N-Ras两个shRNA转录单位串联到一个载体中,检测该连接方式的优势。结果成功设计并构建了可同时表达双基因shRNA的瞬时表达载体pCSH1。对该载体的验证结果表明,靶向N-Ras的单干扰shRNA表达载体pCSH1-shNR或靶向c-Myc的单干扰shRNA表达载体pCSH1-shMyc对靶基因mRNA和蛋白具有明显的干扰作用;双干扰载体pCSH1-shNM也能同时抑制N-Ras和c-Myc的mRNA和蛋白表达水平,且对细胞克隆形成的抑制率最高。细胞生长曲线法检测两个N-Ras-shRNA表达单位串联的载体pCSH1-2shNR对细胞生长的抑制作用,结果显示在质粒质量相同条件下,双表达载体pCSH1-2shNR对细胞的生长抑制作用显著强于单N-Ras-shRNA表达载体pCSH1-shNR,而相同质量的对照质粒pCSH1-2shMock、pCSH1-shMock对细胞生长的抑制没有明显差异。结论利用同尾酶原理构建了一个可同时表达双shRNA的瞬时表达载体pCSH1,该载体可实现双基因同时干扰;pCSH1还具有分子量小、shRNA表达单位可以串联和串联后RNA干扰活性增强的优点。该载体通过同时抑制两个靶基因或增加对单个靶基因的shRNA表达单位可以取得更好的抗肿瘤活性。
- 何红伟李保卫任开环邵荣光
- 关键词：RNA干扰
- 利用活体成像技术对5型腺病毒在小鼠体内生物分布和表达的研究被引量：2
- 2012年
- 目的研究5型腺病毒（Ad5）不同途径感染小鼠后体内代谢和组织分布特点，为Ad5载体疫苗的应用和改造提供参考。方法构建携带萤火虫荧光素酶基因的Ad5-Fluc病毒并利用活体成像技术分析其感染BALB／c小鼠后的蛋白表达和组织分布特点，以及与裸鼠的感染特点进行比较。结果Ad5-Fluc肌肉途径感染BALB／c小鼠后出现肝脾转移表达的特点，且肌肉途径表达周期最长（〉60d），表达水平最高（P〈0.01）。病毒感染裸鼠后分布特点与BALB／c小鼠一致但表达周期明显延长。另外，用Ad35的纤突蛋白替代Ad5的纤突蛋白后的5型腺病毒载体（Ad5F35）在保持相似表达效率的同时消除了肝嗜性的特点。结论肌肉途径可能为5型腺病毒载体疫苗理想的免疫方式，同时Ad5F35病毒是一种理想的替代性腺病毒疫苗载体。
- 刘强黄维金聂建辉赵晨燕孟淑芳李保卫邵荣光王佑春
- 关键词：腺病毒活体成像BALBC小鼠
- 一种新型siRNA化学修饰单体及其制备方法和用途
- 本发明涉及一种新型siRNA化学修饰单体，以及所述单体在制备肿瘤基因治疗药物中的应用；实验研究证明，化学修饰siRNAs对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制活性及核酸酶稳定性均有明显提高，有望开发成为临床有效的肿瘤基因治疗药物...
- 王玉成李祎亮邵荣光任开环何红伟王菊仙白晓光许乐幸吴香玫李保卫
- 文献传递
- 基于减毒沙门氏菌的shRNA表达载体靶向释放系统的建立及鉴定
- 目的限制RNA干扰剂临床应用的一个主要障碍是没有合适的体内靶向释放系统。为解决这个问题,我们构建Luciferase-shRNA的原核和真核表达载体,建立基于减毒沙门氏菌的RNA干扰质粒释放系统,并对其可行性及干扰效率进...
- 李娜仁李保卫何红伟邵荣光
- 多靶点RNA干扰介导的肿瘤增殖抑制的效果和机理研究
- ＜正＞目的:癌基因在肿瘤的发生发展过程中发挥重要的作用,但抑制单个癌基因不足以逆转肿瘤细胞的恶化。探讨有效的多靶点癌基因抑制方案可以更有效地抑制肿瘤发生和发展。方法:N-Ras在人肝癌HepG2细胞中被siRNA敲低后,...
- 何红伟赵萌李保卫赵午莉邵荣光
- 文献传递
