李妍妍
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 供职机构：汕头大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- GST-FHL2融合蛋白的表达及纯化被引量：2
- 2008年
- 目的高效表达和纯化可溶性GST-FHL2融合蛋白。方法(1)PCR法扩增FHL2 (Four and a half LIM domains 2)基因的编码片段,分别在5'端和3'端加上EcoR I和Xho l酶切位点,并克隆进入原核表达载体pGEX-4T-1;(2)利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX-4T-1-FHL2在大肠杆菌B121(DE3)中表达同时带有谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签的融合蛋白;(3)超声法裂解大肠杆菌,应用谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化可溶的GST-FHL2融合蛋白;(4)通过SDS-PAGE和Western blot验证GST-FHL2的表达。结果(1)成功构建pGEX-4T-1-FHL2重组质粒,测序结果证明FHL2与载体的GST在同一读框;(2)0.1 mmol/L的IPTG在23℃的条件下能诱导可溶性GST-FHL2融合蛋白高效表达;(3)在Western blot分析中,GST-FHL2能被鼠抗GST单克隆抗体特异性识别,条带所在位置和GST-FHL2的分子量相符。结论正确构建pGEX-4T-1-FHL2重组质粒,在大肠杆菌BL21中高效表达GST-FHL2融合蛋白,经谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化得到高纯度的可溶性GST-FHL2融合蛋白。
- 沈秀张林吉进武君黄瑞燕刘树楷李妍妍
- 关键词：FHL2谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白原核表达纯化
- FHL2蛋白及其参与心脏离子通道电流调控的研究进展
- 2011年
- FHL蛋白是仅由4个半LIM结构域和位于N末端的一个锌指结构组成的一类蛋白。由于这一类蛋白缺少其他功能性或结构性的结构域,因而被归为LIM-only蛋白家族。FHL2属于FHL家族。人类的FHL家族包括FHL1、FHL2、FHL3、FHT4和ACT。FHL2参与了多种蛋白质的相互作用,同时也参与了多种骨架蛋白、酶、转录因子等的调控作用。新近的研究发现,FHL2与一些心脏离子通道存在相互作用并对这些通道进行功能调控。本文就FHL2及其对离子通道的调控作用研究进展做一综述。
- 李妍妍刘树楷林吉进
- 关键词：离子通道LIM结构域
- 蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12与心脏HERG钾通道相互作用被引量：3
- 2010年
- 目的鉴定HERG钾通道的相互作用蛋白,并进一步研究该相互作用蛋白对HERG钾通道的功能调控。方法 (1)应用酵母双杂交技术,构建含有HERG氨基末端的诱饵载体,将转染有诱饵载体的酵母菌AH109与预转染有人类cDNA文库的Y187酵母菌进行双杂交,初步筛选出HERG的相互作用蛋白;(2)应用免疫共沉淀技术进一步验证酵母双杂交所筛选蛋白与HERG之间的相互作用;(3)GSTpull-down分析:应用GST-HERGT-NT融合蛋白和谷光苷肽-琼脂糖4B小球从大鼠心肌裂解物中沉淀蛋白质,应用抗PTPN12抗体对沉淀物进行WesternBlot分析;(4)免疫荧光组织化学分析:应用抗PTPN12和抗HERG的抗体和荧光标记二抗显示PTPN12及HERG的亚细胞定位,应用激光共聚焦显微镜观察。结果 (1)酵母双杂交筛选发现蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型12(Proteintyrosinephosphatasenonreceptortype12,PTPN12)与HERG氨基末端存在相互作用;(2)免疫共沉淀分析发现抗HERG的抗体能够沉淀HERG和PTPN12复合物;(3)GSTpull-down分析发现GST-HERG-NT能够将PTPN12沉淀,而GST蛋白则不能沉淀PTPN12;(4)免疫荧光组织化学分析发现PTPN12和HERG两个蛋白共定位的地方主要出现在细胞膜。结论 PTPN12与HERG氨基末端相互作用,这一发现将有助于更加透彻地理解HERG通道特性多样性的分子基础和LQTS的发病机理。
- 林吉进刘树楷武君李妍妍
- 关键词：HERG钾通道12蛋白质相互作用酵母双杂交
- 基质金属蛋白酶13在主动脉夹层患者表达水平的研究被引量：5
- 2010年
- 目的探讨主动脉夹层患者血清基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinases,MMP13)表达水平的改变。方法采集经主动脉计算机断层扫描血管造影(CTA)及主动脉造影确诊主动脉夹层患者60例的血液标本,利用酶联免疫吸附测定方法(ELISA)测定血清MMP13浓度;同时测定30例年龄、性别相匹配健康者的血清MMP13浓度。结果主动脉夹层患者的血清MMP13浓度较正常对照组升高,差异有统计学意义[(41.94±4.34)ng/mLvs.(20.20±1.86)ng/mL,P<0.01]。血压控制理想组和血压控制不理想组的血清MMP13浓度略高于血压正常组,但差异无统计学意义(P>0.05)。血压控制理想组的血清MMP13浓度反而略高于血压控制不理想组,而差异无统计学意义(P>0.05)。另外,原发性高血压(高血压)病程大于5年组的血清MMP13浓度虽然略高于病程小于5年组,但是差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论血清MMP13浓度升高可能为主动脉夹层发病的原因之一,且与高血压病程及血压控制情况无关。
- 林吉进罗建方黄文晖刘媛王慧勇刘树楷李妍妍
- 关键词：主动脉夹层高血压
- HERG基因突变致第二型长QT综合征机制的研究进展被引量：2
- 2010年
- HERG基因编码快速激活延迟整流钾通道的α亚单位,快速激活延迟整流钾电流在心脏复极过程中起着极其重要的作用,HERG基因的突变导致快速激活延迟整流钾电流的异常,并进一步引起第二型遗传性长QT综合征(LQT2)。随着研究方法的不断发展,人类对HERG基因突变引起LQT2的机制的了解越来越深刻,作者就此作一综述。
- 刘树楷李妍妍林吉进
- 关键词：HERG基因基因突变长QT综合征
- FHL2对心脏HERG钾离子通道表达的调控作用
- 研究背景:由人类果蝇相关基因――HERG(Humanether-a-go-go-relatedgene)编码的心脏HERG钾通道属于电压依赖性钾通道,介导快速激活延迟整流钾电流(rapidlyactivateddelay...
- 李妍妍
- 关键词：基因表达
