李海生
- 作品数：45 被引量：160H指数：6
- 供职机构：武警后勤学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 人ZNF580基因的原核表达及单克隆抗体的制备
- 2017年
- 【目的】原核表达纯化人锌指蛋白(zinc finger protein 580,ZNF580)并制备抗人ZNF580单克隆抗体。【方法】将构建的重组质粒pET30a-ZNF580转化大肠杆菌BL21(DE3),由异丙基-β-D-半乳糖苷(Isopropyl beta-D-galactosidase,IPTG)诱导表达并纯化目的蛋白。将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备针对ZNF580的特异性单克隆抗体并通过ELISA和Western blotting方法鉴定。【结果】含有该质粒的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达后,产物蛋白分子量约为19 kDa,通过将Sp2/0细胞与免疫鼠的脾细胞融合获得了1株能稳定表达ZNF580抗体的杂交瘤细胞株(H4E4C5),其分泌的单克隆抗体的IgG亚类IgG2b,ELISA检测腹水抗体效价为1:1.28×10~5,Western blotting结果显示抗ZNF580单克隆抗体具有良好的特异性。【结论】本实验成功表达并纯化了ZNF580蛋白并制备了抗ZNF580蛋白的单克隆抗体,为进一步研究锌指蛋白ZNF580的功能奠定了基础。
- 牟心红温晓昶李海生张文成
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 电刺激面神经核背内侧区和腹内测区对肾交感神经放电的影响被引量：2
- 1999年
- 实验在20只氨基酸乙酯麻醉的成年家兔上进行,观察电刺激面神经核背内侧区(DMNF)和腹内侧区(VMNF)对肾交感神经呼吸节律性放电的影响。结果表明:1.电刺激DMNF时膈肌肌电活动持续增强,出现长吸效应;肾交感神经呼吸节律性放电活动明显抑制。2 电刺激VMNF时膈肌肌电活动完全消失,出现长呼效应;肾交感神经呼吸节律性放电呈连续增频增幅反应。结果提示:DMNF和VMNF可能与延髓交感中枢之间存在某种神经联系,呼吸中枢活动的改变能对内脏活动产生影响。
- 李海生
- 关键词：电刺激
- 低氧对胚胎干细胞增殖的影响被引量：10
- 2004年
- 目的 :观察间歇性低氧和持续性低氧对体外培养的胚胎干细胞 (ES细胞 )增殖的影响。方法 :利用细胞记数法和BrdU (5 溴脱氧尿苷 )掺入的流式细胞分析检测细胞增殖 ,并用RT PCR的方法检测低氧诱导因子 (HIF 1a)的表达变化。结果 :①将ES细胞分别放在低氧 (3%～ 10 %O2 )和常氧 (2 0 %O2 )的环境中培养 2 4h后 ,在低氧环境中培养的ES细胞数较常氧组明显减少 ;②将ES细胞分别给予间歇性低氧刺激 (3%～ 10 %O2 ) ,每天 10min ,连续 4d后 ,发现 3%低氧组较常氧对照组的细胞增殖明显升高。③用RT PCR方法观察HIF 1a的表达与细胞增殖的关系 ,发现在常氧环境中培养的ES即有HIF 1a的表达 ,ES细胞在持续低氧 2 4h或间歇性低氧 (3%～ 10 %O2 )刺激 4d后对HIF 1a的表达均无明显影响。结论 :间歇性低氧 (3%O2 )可明显促进体外培养的ES细胞增殖 ,而持续性低氧抑制ES细胞增殖 ,间歇性低氧 (3%O2 )
- 赵惠卿朱玲玲赵彤吴丽颖李海生丁爱石范明
- 关键词：低氧胚胎干细胞增殖
- PBL在救援医学病理生理学实验教学中的实践被引量：2
- 2012年
- 采用综合的实验考核方法,对比分析PBL在救援医学病理生理学实验教学中的效果。结果:PBL教学班对理解与分析型实验试题的成绩提高显著(P<0.05)。在反馈意见调查中,70%以上的受试学生对PBL持肯定态度。结论:PBL在救援医学病理生理学实验教学中可行,对于提高实验教学效果和推动救援医学学科建设具有重要意义。
- 孟祥艳何瑞波李海生张文成
- 关键词：PBL实验教学病理生理学救援医学
- 低氧诱导因子-1结构、活化机制及其靶基因的研究进展
- 低氧诱导因子—1(hypoxia—inducible factor 1,HIF—1)是由低氧等诱导细胞产生的一种转录因子,通过调控近50种靶基因,引起细胞对低氧发生一系列适应性反应,以实现其主要调节O2稳态的功能,说明其...
- 李海生朱玲玲范明
- 关键词：低氧信号转导靶基因
- 文献传递
- CoCl2预处理对大鼠海马神经元急性缺氧后Na+、K+电流的影响
- 本研究着重观察了CoCl预处理对海马神经元急性缺氧后Na、K电流的影响,并对其机制进行分析。实验采用原代培养大鼠海马神经元,分为常氧组、急性缺氧组以及CoCl预处理组,并利用膜片钳全细胞记录技术,检测急性缺氧后海马神经元...
- 赵彤王福庄吴丽颖马子敏丁爱石朱玲玲吴燕李海生范明
- 文献传递
- 低氧诱导因子-1结构、活性调节及其靶基因的研究进展被引量：5
- 2004年
- 低氧诱导因子 1(hypoxia induciblefactor 1,HIF 1)是由低氧等诱导细胞产生的一种转录因子 ,通过调控近 5 0种靶基因 ,引起细胞对低氧发生一系列适应性反应 ,以实现其主要调节氧稳态的功能 ,说明其在低氧信号转导过程中起关键作用 ,具有重要的生理学和病理生理学意义。本文综述了HIF 1的结构。
- 李海生朱玲玲范明
- 关键词：低氧低氧诱导因子-1信号转导靶基因
- 骨髓间充质干细胞移植对老年性痴呆大鼠认知能力和海马超微结构的影响
- ：研究骨髓骨充质充细胞(BMSCs)移植对老年性痴呆(AD)大鼠认知能力和海马超微结构的影响。方法：选用24月龄健康雄性Wistar大鼠制备自然衰老痴呆模型，将模型大鼠随机分为3组，每组10只。AD模型组大鼠双侧海马注射...
- 李海生牟心红张岭张文成
- 关键词：骨髓间充质干细胞BMSCS移植老年性痴呆海马超微结构
- 大鼠锌指蛋白ZFP580的原核表达与分离纯化
- 2012年
- 【目的】构建ZFP580基因的原核表达质粒,转化大肠杆菌,诱导表达并分离纯化大鼠锌指蛋白ZFP580。【方法】根据ZFP580 cDNA序列的开放阅读框设计引物,利用PCR技术扩增ZFP580的开放阅读框cDNA序列,将PCR扩增的目的片段与载体pET30a分别双酶切、回收纯化后做定向连接,Nco I、Xho I双酶切电泳筛选、鉴定并测序。将构建的重组质粒pET30a-ZFP580转化大肠杆菌BL21(DE3),由异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化目的蛋白。【结果】成功扩增ZFP580基因并构建了表达质粒pET30a-ZFP580,测序结果表明与GeneBank公布的序列一致。含有该质粒的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达后,产物蛋白分子量约为19 kDa。【结论】成功表达并纯化了大鼠ZFP580蛋白,为进一步研究锌指蛋白ZFP580的功能奠定了基础。
- 牟心红李海生梁林张文成
- 关键词：原核表达
- 骨髓间充质干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠行为学的影响被引量：9
- 2009年
- 背景:目前研究表明,骨髓间充质干细胞作为包括阿尔茨海默病在内的神经退行性疾病的细胞替代治疗,可能是一种有应用前景的工程细胞,但其对阿尔茨海默病的治疗效果尚不明确。目的:观察定向诱导骨髓间充质干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠行为学的影响,试图发现有效治疗阿尔茨海默病的策略。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2009-03在武警医学院生理学与病理生理学教研室完成。材料:健康雄性Wistar大鼠40只,鼠龄24个月,体质量450g左右。方法:自然衰老痴呆模型大鼠是通过迷宫试验筛选,将大鼠随机数字表法分为4组,每组10只。对照组大鼠双侧海马注射生理盐水;骨髓间充质干细胞移植组大鼠注射骨髓间充质干细胞;常氧分化移植组大鼠注射常氧环境下向神经元样细胞诱导的骨髓间充质干细胞;低氧分化移植组大鼠注射低氧环境下向神经元样细诱导的骨髓间充质干细胞。主要观察指标:阿尔茨海默病大鼠的学习和记忆能力在移植前及实验后8周通过Y迷宫试验测定,记忆能力测定在学习能力测定48h后进行。结果:对照组阿尔茨海默病大鼠术后学习记忆成绩均下降,与术前相比,差异无显著性意义(P>0.05);骨髓间充质干细胞移植组大鼠学习记忆成绩提高,与移植前相比差异无显著性意义(P>0.05);常氧分化移植组和低氧分化移植组大鼠学习记忆成绩均较移植前提高;与对照组相比,其他3组大鼠学习记忆成绩均提高(P<0.01)。结论:骨髓间充质干细胞移植可以改善阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力,提示骨髓间充质干细胞移植对痴呆大鼠的认知功能障碍有治疗作用,且定向诱导分化的骨髓间充质干细胞移植治疗优于未分化的骨髓间充质干细胞,低氧诱导分化的骨髓间充质干细胞移植治疗效果最佳。
- 李海生陈振锋李海英
- 关键词：骨髓间充质干细胞行为学阿尔茨海默病
