李玲玲
- 作品数：9 被引量：18H指数：3
- 供职机构：温州医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金温州市科技局资助项目浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合DNA诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫的研究
- 2010年
- 目的 探讨人乳头瘤病毒（HPV）6b结构蛋白L1和沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）多表位嵌合DNA（HPV6b L1/Ct MOMP）诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫效应,及HPV6b L1对Ct MOMP多表位基因诱导细胞免疫的增强作用.方法 将Ct MOMP多表位基因连接在经真核密码子优化的HPV6b L1羧基端,构建嵌合重组质粒pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位,经酶切和测序证实后,转染COS-7细胞,间接免疫荧光鉴定其在真核细胞中的表达;将纯化后的嵌合重组质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,并设置pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒、pcD-NA3.1（＋）和PBS三组对照.采用0、2、4周免疫程序,DNA剂量为每只150μg/次.于末次免疫后2周,分别用乳酸脱氢酶（LDH）释放法和细胞内细胞因子染色-流式细胞术（ICS-FAGS）检测小鼠脾细胞对Ct MOMP多表位蛋白和HPV6b L1蛋白的特异性CTL活性,胞内细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10产生水平等细胞免疫应答指标.结果免疫后,在效靶比（E∶T）分别为40∶1、20∶1时,pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合重组质粒免疫组小鼠产生了针对Ct MOMP多表位蛋白特异性CTL杀伤活性（44.56%±4.02%,35.35%±2.89%）和HPV6b L1蛋白特异性CTL杀伤活性（27.08%±2.04%,21.68%±4.06%）,与各对照组比较差异有统计学意义（F=72.87,F=114.55,P＜0.05;F=30.04,F=10.47,P＜0.05）,且显著高于pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组（35.50%±2.68%,30.24%±1.75%;12.27%±3.36%,9.32%±3.07%;P＜0.05）;而pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组小鼠仅显示了Ct MOMP多表位特异性的CTL杀伤活性,与对照组比较差异也有统计学意义（F=58.85,F=120.21;P＜0.05）.胞内细胞因子IFN-γ的产生水平,pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合质粒组（4.34%±0.06%）高于pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组（3.14%±0.18%）,与对照组比较差异有统计学意义（F=473.83,P＜0.05）,而重组质粒组较空载体组和PBS对
- 石朝辉朱珊丽许文陆丽君李玲玲张丽芳
- 关键词：主要外膜蛋白细胞毒T细胞
- 人乳头瘤病毒16型次要结构蛋白家兔免疫血清的制备及其特性研究被引量：3
- 2010年
- 目的制备高效价人乳头瘤病毒(HPV)16型次要结构蛋白(L2)特异性兔血清抗体,并对其效价及其与HPV16 L2蛋白结合的特异性进行鉴定。方法将重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2转化至E.coliBL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定融合蛋白的抗原性;经镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)纯化HPV16 L2全长融合蛋白,纯化蛋白用佐剂乳化后经日本大耳白家兔背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共2次,并分别于免疫前和每次免疫后1周取血,采用Western blot检测血清抗体的特异性,采用ELISA法检测血清抗体水平及变化趋势。结果家兔用HPV16 L2融合蛋白全程免疫后均产生了抗HPV16 L2抗体,ELISA法检测最高滴度达1∶256 000;Western blot检测显示,该抗体能识别HPV16 L2蛋白。结论用原核HPV16 L2全长蛋白免疫家兔,可获得高效价的血清抗体,该抗体具有与HPV L2蛋白结合的特异性。
- 李玲玲周珠哈朱珊丽薛向阳张丽芳
- 关键词：人乳头瘤病毒16型抗体
- 人乳头瘤病毒L2氨基端蛋白的同源性及其交叉反应特性研究
- 2010年
- 目的 研究人乳头瘤病毒（HPV）次要衣壳蛋白（L2）在临床常见HPV感染型别中的同源性及其交叉反应特性.方法 采用生物信息学方法对临床常见HPV感染型别中的L2氨基酸序列进行比对,发现其氨基端1～200序列具有高度同源性.采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2（1～200）肽段的碱基序列,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1得到重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2（1～200）.将测序鉴定正确的重组质粒转入E.coli BL21（DF3）中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定;进一步通过Western blot检测HPV16L2（1～200）融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性临床患者血清的特异性结合能力;以镍螯合亲和层析柱（Ni-NTA Agarose）纯化的HPV16 L2（1～200）融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法对98例尖锐湿疣患者、135例宫颈癌患者及96例健康对照者血清进行特异性血清IgG抗体检测.结果 在HPV6、11、18、35等14个临床常见型别中,与HPV16 L2的1～200间的氨基酸序列比较,同源性达到52.7%～74.3%;成功构建了含有HPV16 L2（1～200）的重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2（1～200）,含有HPV16 L2（1～200）的融合蛋白在原核表达体系中呈高效表达,表达量占总蛋白的22.6%;表达产物的相对分子质量（Mr）约49×103,与预期Mr相符;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗进行Western blot分析,结果显示,在Mr约49×103处出现特异性条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组患者血清及健康对照者血清抗体均值分别为0.753±0.262、0.756±0.274和0.178±0.157,阳性率分别为89.8%、88.9%和9.4%.三组间血清抗体均值及阳性率比较差异均具有统计学意义（P均＜0.001）,而尖锐湿疣组和宫颈癌组间的血清抗体均值比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 HPV L2 N端1～200氨基酸序列具有高度同源性,并在HPV6、11、16和18型别间具有交�
- 李玲玲赵朋云王佳周珠哈朱珊丽薛向阳张丽芳
- 关键词：人乳头瘤病毒同源性
- 我院2008-2010年门诊抗菌药物的使用分析
- 2013年
- 目的了解温岭市第一人民医院抗菌药物的使用情况及变化趋势,为抗菌药物的合理应用和科学管理提供依据。方法回顾研究温岭市第一人民医院2008-2010年门诊抗菌药物使用资料,并对门诊抗菌药物的使用情况进行归类、统计,以限定日剂量(DDD)、用药频度(DDDS)及各类抗菌药物占门诊3年所用抗菌药物总量的百分比调查门诊抗菌药物的使用情况。结果 3年来,我院抗菌药的使用以青霉素类、头孢菌素类、林可霉素类、氨基苷类及喹诺酮类为主。结论我院抗菌药物的应用基本合理,但仍存在不足之处,应进一步加强学习《抗菌药物临床应用指导原则》和严格抗菌药物合理应用管理等。
- 王玮玲李玲玲
- 关键词：门诊抗菌药物限定日剂量用药频度
- EB病毒潜伏膜蛋白2多表位的原核表达及其抗原特性分析被引量：1
- 2010年
- 目的 对EB病毒（EBV）潜伏膜蛋白2（LMP2）中富含T、B细胞多表位肽段基因进行原核表达,并分析该多表位蛋白的抗原特性.方法 利用计算机在线软件预测EBV LMP2蛋白的CTL表位、Th表位.选取富含CTL表位和Th表位的肽段,兼顾其上下游已预测的B细胞表位,组成含多个T、B细胞表位的EBV LMP2多表位,该多表位基因序列经原核密码子优化后全序列合成,并克隆入原核表达载体pET32a（＋）得到pET32a（＋）/EBV-LMP2多表位重组质粒,经IPTG诱导在E.coli BL21（DE3）表达并纯化,经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定;采用EBV膜蛋白家兔免疫血清和鼻咽癌患者血清进行Western blot分析其抗原特性;并利用EBV-LMP2多表位蛋白免疫BALB/c小鼠,分别采用LDH和ELISA方法检测小鼠脾细胞特异性CTL杀伤效应及血清特异性抗体IgG水平,以分析该表位蛋白的免疫原性.结果 LMP2（aa195-232）和LMP2（aa419-436）肽段富含CTL、Th和B细胞表位,将其串联后作为EBV LMP2多表位,该多表位基因在大肠杆菌中获得了表达.表达产物的相对分子质量（Mr）约27×103,与预期Mr相符;经Western blot证实EBV-LMP2多表位具有抗原特异性,可被EBV膜蛋白家兔免疫血清和鼻咽癌患者血清特异性抗体识别;小鼠免疫结果显示EBVLMP2多表位可诱导机体产生特异性的CTL杀伤效应,随着效靶比（1：5,1：10,1：25）增加,CTL杀伤活性逐渐增强（12.52%±2.59%,21.80%±1.08%,23.68%±3.74%）,同时产生了特异性血清IgG抗体反应（A490=0.258±0.040）,与对照组比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 本研究设计的EBV-LMP2多表位具有良好的抗原性和一定的免疫原性.
- 陆丽君李玲玲刘建晓王佳朱珊丽陈筱菲张丽芳
- 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白表位
- miR-221和miR-222在子宫颈鳞癌组织中的表达及与其p27蛋白表达的关系
- 2010年
- 近年来新发现的一类内源性微小RNA（microRNA,miRNA）,长度只有22个核苷酸左右,不编码蛋白质,通过碱基配对决定mRNA的翻译和稳定性,沉默编码基因的表达,从而调控细胞的分化、生长、发育、增殖、代谢、凋亡等功能[1-2].
- 胡芝李玲玲吕杰强张丽芳薛向阳柯晓慧王弋
- 关键词：P27蛋白表达鳞癌组织子宫颈碱基配对
- HPV 16型L2全长原核融合蛋白的交叉反应特性研究
- 2010年
- 目的 研究HPV 16型L2全长蛋白在HPV6、11、16和18型别间的交叉反应特性.方法 收集108例尖锐湿疣患者、156例宫颈癌患者和100名健康对照者的血清标本,采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2全长基因,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,将鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和WB鉴定;进一步通过WB检测HPV16 L2全长融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性的患者血清的特异性结合能力.以镍螯合亲和层析柱（Nj-NTA Agarose）纯化HPV16 L2融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法检测3组标本中的HPV血清特异性IgG抗体.结果 成功构建了重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2,含有HPV16 L2的融合蛋白在原核表达体系中呈较高效表达,表达量为27.2%;SDS-PAGE和WB检测结果显示在约相对分子质量82 000处可见特异性阳性信号条带;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗的WB结果显示,HPV16 L2全长融合蛋白在相对分子质量82 000处均出现特异性阳性信号条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组和健康对照组血清抗体A值分别为0.825±0.409、0.808±0.376、0.128±0.15,阳性率分别为92.6%、92.3%和6.0%.3组间血清抗体A值及阳性率差异均具有统计学意义（H=207.292,x2=251.846,P均＜0.01）,而尖锐湿疣组与宫颈癌组之间的血清抗体均值（0.825和0.808）差异无统计学意义（H=0,P＞0.05）.结论 HPV16 L2全长原核融合蛋白具有较强的抗原性,与HPV6、11、16和18型别间具有交叉反应,可进一步用于HPV感染及其相关肿瘤ELISA血清学检测试剂的通用型靶抗原研究.
- 李玲玲刘建晓朱珊丽薛向阳陈俊张丽芳
- 关键词：人乳头瘤病毒
- miR-143在胃癌中的表达及其临床病理意义被引量：11
- 2010年
- 目的:分析miR-143在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:分别取胃癌手术标本32例及其癌旁组织,提取总RNA,采用茎环逆转录实时定量PCR方法检测miR-143在胃癌及其癌旁正常组织中的表达量,并分析其与临床病理特征关系。结果:与癌旁组织比较,miR-143在胃癌组织中表达显著下调(P<0.05);miR-143的表达与细胞分化程度(P<0.05)及淋巴结转移(P<0.05)相关,与性别、年龄、血型、肿块位置、肿块大小、肿块侵润深度及肿瘤淋巴结转移分期无关。低分化胃癌组织的miR-143表达明显低于中高分化的标本(P<0.05);有淋巴结转移胃癌组织的miR-143表达明显低于无淋巴结转移的胃癌组织(P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-143评价胃癌细胞分化程度的特异性和敏感性可达75.0%和79.2%。结论:miR-143表达下调可能与胃癌的发生发展有关,miR-143可作为评价低分化胃癌的辅助指标。
- 林巧爱李玲玲巩文辞武文一沈贤张丽芳薛向阳
- 关键词：MICRORNA胃肿瘤细胞分化
- EB病毒核蛋白-1 B细胞表位的预测及其同源性分析被引量：3
- 2011年
- 预测EB病毒核蛋白1(EBNA-1)的B细胞优势表位,并与人体组织抗原序列比对,以分析两者匹配情况。以EBV-1型NA-1的氨基酸序列为基础,采用SOPMA、GOR和HNN方法,结合跨膜区域、亲水性等参数综合预测EBNA-1的B细胞优势表位;进一步采用blastp方法,比对分析预测的EBNA-1 B细胞表位与相关的人体组织抗原序列的匹配情况。结果提示:B细胞优势表位可能位于其N端16-23、35-78、332-337、340-357、398-404、419-432、620-637区域;其中部分表位的不同区域分别与小核糖核蛋白SmB、SmD,核蛋白SSA,不均一核糖核蛋白hnRNPA1、hnRNP G具有较高的匹配率。结果表明,用多参数预测可获得EBNA-1的B细胞优势表位,并可进一步分析其与人体组织抗原的相同或相似序列,为自身免疫性疾病的发病机制研究提供理论依据。
- 李玲玲朱珊丽李文姝薛向阳张丽芳
- 关键词：EB病毒B细胞表位自身免疫性疾病
