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昆虫激素体外调节家蚕滞育激素受体基因的表达被引量：2: 2013年; 为了深入研究家蚕滞育的分子机理,从家蚕基因组中扩增了1395 bp和972 bp 2个不同长度的滞育激素受体基因Bmdhr启动子片段,以pGL3.0 Basic为载体,分别构建荧光素酶报告质粒,利用家蚕细胞瞬时表达系统分析其转录活性以及昆虫保幼激素类似物(JHA)、蜕皮激素(20-OH-ecdysone)和滞育激素(DH)对其活性的影响.结果表明:1395 bp的Bmdhr启动子活性显著低于972bp的Bmdhr启动子,这说明Bmdhr启动子在-941^-1364nt区间存在负调控元件.JHA浓度为2,4,6μg/mL时,极显著地增强启动子活性;浓度为1μg/mL时活性显著减弱,而为8μg/mL时则活性极显著减弱.20-OHecdysone对Bmdhr启动子活性的影响具有剂量效应,低浓度(1,2μg/mL)时显著增强启动子活性;浓度为4μg/mL时,启动子的活性显著减弱;但当浓度继续升高时,启动子活性又极显著增强.DH对Bmdhr启动子活性的影响同样具有剂量效应,其浓度为10~40 nM时,显著增强启动子活性;而当其浓度达到60 nM时,启动子活性变化不显著.; 王力刚朱娟王猛唐顺明沈兴家; 关键词：昆虫激素家蚕启动子基因表达调控

催青温度对家蚕二化性品种丙酮酸脱氢酶激酶基因(BmPDK)表达的影响: 2011年; 丙酮酸脱氢酶激酶(PDK)在生物体的新陈代谢中具有重要的生理功能。为了探讨家蚕(Bombyx mori)PDK基因的表达特性,用蛾区半分法将二化性家蚕品种的活化越年卵(丙2期)分别以常温(25℃)光照和低温(15℃)黑暗催青,通过实时荧光定量PCR技术检测分析2种温度催青处理后家蚕不同发育阶段和不同组织的BmPDK表达水平。常温光照催青区BmP-DK的表达水平表现出发育时期和组织差异:胚胎发育阶段BmPDK在己4期的表达水平最高,其次是戊2、己3和己5期;幼虫发育阶段BmPDK的表达水平在蚁蚕期极显著高于其它龄期,5龄期在卵巢和精巢的表达水平高于其它组织;蛹期BmPDK的表达水平比其它发育时期低;成虫期的表达水平与胚胎发育末期相当,其中雌蛾的脂肪体和卵巢中BmPDK的表达水平较高。推测BmPDK在家蚕胚胎发育末期及产卵过程中有重要作用。催青温度影响BmPDK在家蚕各发育时期及卵巢组织中的表达水平:胚胎发育阶段戊2期BmPDK的表达水平为常温催青区显著高于低温催青区,己3～己5期常温催青区BmPDK的表达呈低-高-低的趋势,而低温催青区则呈上升趋势;蚁蚕期BmPDK表达水平为低温催青区极显著低于常温催青区;蛹期和成虫期卵巢中,常温催青区BmPDK的表达水平极显著高于低温催青区。催青温度对二化性家蚕BmPDK的表达的影响主要出现在胚胎戊2期、胚胎己3期～蚁蚕期、蛹期、成虫期。; 宋海韬王力刚黄勇赵巧玲沈兴家; 关键词：家蚕催青温度荧光实时定量PCR

家蚕丙酮酸脱氢酶激酶基因的克隆与原核表达被引量：1: 2011年; 丙酮酸脱氢酶激酶(PDK)在糖代谢的调控中具有重要的作用,为了研究家蚕PDK(BmPDK)的功能,以蚁蚕总RNA为模板,应用RT-PCR技术扩增了BmPDK的cDNA,构建原核表达载体pET-28a-BmPDK进行表达和纯化。结果显示,克隆的BmPDK全长cDNA与NCBI公布的序列一致;Western bloting检测表明BmPDK蛋白得到了表达,且主要以包涵体形式存在;IPTG最佳诱导浓度为0.8 mmol/L、最佳诱导时间为8 h;2,6-二氯吲哚酚法间接测定结果表明,纯化的BmPDK蛋白具有酶活性。; 宋海韬王力刚沈兴家黄勇赵巧玲; 关键词：家蚕原核表达酶活性

催青温度对家蚕二化性品种丙酮酸脱氢酶激酶基因表达的影响: 家蚕二化性品种蚕卵高温光照催青产滞育卵，低温黑暗催青产非滞育卵。有研究表明，不同催青条件下蚕卵的丙酮酸脱氢酶激酶（PDK）在蛋白质水平上有表达差异。本实验采用蛾区半分法将蚕卵分成2 组，分别用高温(25 ) ℃光照和...; 宋海韬王力刚黄勇赵巧玲沈兴家; 关键词：家蚕催青条件基因表达荧光实时定量PCR

催青温度对家蚕二化性品种滞育激素受体基因表达的影响及基因的结构特征被引量：12: 2011年; 家蚕二化性品种的卵滞育与否受上代环境影响,25℃高温明催青将产滞育卵,而15℃低温暗催青将产非滞育卵。为探究催青温度调控二化性家蚕滞育的分子机制,对从家蚕卵巢细胞中克隆的家蚕滞育激素受体基因(Bmdhr)的5种cDNA进行生物信息学分析,结果表明Bmdhr基因的5种cDNA由相同的mRNA转录本通过不同的剪接方式而来,其中Bmdhr mR-NA-1与Bmdhr mRNA-2编码的氨基酸序列相同,Bmdhr mRNA-4编码的氨基酸序列与家蚕滞育激素BmDHR-1的序列相似度达99.2%。将家蚕二化性品种秋丰的蚕卵用蛾区半分法分成2组,分别以15℃暗催青和25℃明催青,利用实时荧光定量PCR分析催青温度对家蚕不同发育时期及蚕体组织中Bmdhr基因mRNA转录的影响。结果显示:Bmdhr mRNA-1主要在蛹期卵巢中表达,在对滞育激素最敏感的化蛹后4 d时,其转录水平急速上升至峰值,并且高温催青的转录水平高于低温催青;Bm-dhr mRNA-4主要在各发育时期的蚕体血液中表达,特别是在高温明催青条件下,其在蛹期血液中的转录水平是低温暗催青的7.7倍,说明BmDHR-4可能是决定家蚕二化性品种卵滞育与否的关键因子之一;Bmdhr mRNA-5在化蛹后2～3 d的卵巢中转录水平高,且低温催青的转录水平高于高温催青,化蛹后3 d其转录水平开始下降,至化蛹后4～5 d 2种催青处理间的转录水平无显著差异。研究结果为阐明家蚕滞育的分子机制积累了实验数据。; 王力刚宋海韬黄勇汪生鹏唐顺明赵巧玲沈兴家; 关键词：家蚕序列同源性催青温度基因表达

催青温度对家蚕二化性品种滞育激素受体基因表达的影响及基因的结构特征: 家蚕二化性品种的卵滞育与否受上代环境影响，25 ℃高温明催青将产滞育卵，而15 ℃低温暗催青将产非滞育卵。为探究催青温度调控二化性家蚕滞育的分子机制，对从家蚕卵巢细胞中克隆的家蚕滞育激素受体基因（Bmdhr）的5 种...; 王力刚宋海韬黄勇汪生鹏唐顺明赵巧玲沈兴家; 关键词：家蚕序列同源性催青温度基因表达

家蚕滞育激素受体体外上调下游海藻糖酶基因的表达被引量：5: 2014年; 家蚕滞育激素(Bombyx mori diapause hormone,BmDH)与滞育激素受体(BmDH receptor,BmDHR)结合,调控其信号通路中的下游基因的表达.在二化性家蚕中,受滞育信号的影响,蛹体卵巢膜上海藻糖酶的活性增强.为了证实BmDHR对家蚕海藻糖酶基因(Bmtre)表达的调控作用,以pcDNA3.1为载体,构建了4种由ie-1启动子驱动的不同Bmdhr的表达质粒pcDNA-ie1-Bmdhr1、pcDNA-ie1-Bmdhr3、pcDNA-ie1-Bmdhr4、pcDNA-ie1-Bmdhr5和(Bmtre启动子驱动的萤火虫荧光素酶基因(luciferase,luc)报告质粒p3Z-Bmtre-luc;用脂质体(Lipofectin)包埋1种Bmdhr表达质粒或不同摩尔比的pcDNA-ie1-Bmdhr1/pcDNA-ie1-Bmdhr5以及报告质粒后,分别共转染源于卵巢的家蚕细胞BmN,在DH作用下体外检测BmDHRs对海藻糖酶基因启动子活性的影响.结果表明,4种滞育激素受体BmDHR-1、BmDHR-3、BmDHR-4和BmDHR-5分别表达时,均能上调海藻糖酶基因启动子的活性;不同摩尔比(1∶3,1∶1,3∶1)的BmDHR-1/BmDHR-5也均能上调海藻糖酶基因启动子的活性,由此证明BmDHR能上调其信号通路中下游基因Bmtre的表达.; 沈兴家王力刚韦博尤朱娟唐顺明赵巧玲; 关键词：家蚕海藻糖酶基因表达调控

家蚕滞育激素受体基因的结构和表达特性及功能分析: 家蚕(Bombyx mori)是一种重要的经济昆虫和模式生物,研究家蚕滞育的分子机理具有重要的理论和实践意义。家蚕在长期的进化过程中形成了卵滞育的特性,其滞育性由遗传性和环境条件支配。根据家蚕的滞育性可将其分为一化性、二...; 王力刚; 关键词：家蚕催青温度基因表达分析实时荧光定量PCR 启动子昆虫激素; 文献传递

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王力刚

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