王清明
- 作品数：81 被引量：319H指数：10
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 人肝再生增强因子促肝增殖及其抗肝损伤作用被引量：27
- 1998年
- 在克隆、表达人肝再生增强因子 (ALR)的基础上 ,对重组人ALR促肝细胞增殖及其抗肝损伤作用进行了研究 ,结果表明重组ALR不仅在体内外均可促进肝细胞增殖 ,而且在肝损伤修复过程中可能有重要作用 ,是一种重要的肝再生调控因子 .
- 杨晓明王爱民周平王清明吴祖泽贺福初
- 关键词：肝再生增强因子抗肝损伤肝疾病
- 抗人HPPCn单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的：制备高灵敏度的抗人HPPCn单克隆抗体（mAb），以用于HPPCn的功能研究及其疾病相关性研究。方法：用重组蛋白免疫雌性BALB／c小鼠，采用常规杂交瘤技术进行细胞融合，经ELISA法进行阳性克隆筛选、通过有限稀释法进行亚克隆，获得稳定分泌抗人HPPCnmAb的细胞株。采用间接ELISA、Western blot、Ig亚类快速定性试纸分析法等鉴定抗体的生物学特性；通过细胞免疫荧光实验观察了HPPCn蛋白的细胞定位。通过噬菌体肽库技术分析抗体所识别的抗原表位。结果：得到了1株稳定分泌抗人HPPCn抗体的杂交瘤细胞株，命名为W2-D5。经Ig亚类分析确定，该细胞株分泌的抗体属于IgG1亚类。间接ELISA检测表明，该抗体检测HPPCn的极限为0．1μg／L；Western blot结果显示，该抗体能特异性识别HPPCn。细胞免疫荧光实验，证实了HPPCn蛋白定位在细胞核。通过肽库筛选及表位分析认为，该抗体识别的表位可能为HPPCn7-13（IHLELRN）。结论：成功地获得了抗人HPPCn的特异性mAb。
- 霍景瑞姚西宁刘英富刘保才吴峰范国才王清明
- 关键词：单克隆抗体效价噬菌体肽库
- 从随机肽库中筛选血管内皮生长因子的抑制剂被引量：1
- 2002年
- 目的 从随机噬菌体肽库中筛选血管内皮生长因子 (VEGF1 6 5)的抑制剂 ,研究治疗实体瘤生长的小分子药物。方法 以VEGF1 6 5分子的受体KDR为靶分子 ,筛选随机噬菌体环 7肽库 ,通过竞争性洗脱得到能特异结合KDR的阳性噬菌体 ,以ELISA、细胞免疫组化、细胞ELISA、鸡胚绒毛膜尿囊膜实验和MTT法 ,鉴定其结合活性和抑制活性。结果 得到 5个能特异结合靶分子的阳性噬菌体克隆 ,它们均可以与表面有KDR表达的细胞结合 ,其中噬菌体克隆 3和 13还能抑制VEGF1 6 5诱导鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成的活性。但MTT法结果显示 ,这两种噬菌体小肽对高表达KDR的阳性细胞生长没有明显的抑制活性。结论 从随机噬菌体肽库筛选到了能抑制VEGF1 6 5生物活性的克隆 ,为进一步研究小分子抑瘤药物提供了一定基础。
- 武婕张宏斌王捷杨太成冼江杨传红郑文岭陈惠鹏王清明
- 关键词：血管内皮生长因子肽库血管内皮生长因子抑制剂实体瘤肿瘤治疗
- 基于抗原表位制备抗人GP73单克隆抗体
- 2010年
- 目的：制备抗GP73蛋白的单克隆抗体（mAb）。方法：将GW／3蛋白N末端的肽段（AAAERGAVELK）展示于T7噬菌体表面，扩增重组噬菌体作为抗原免疫小鼠，制备抗体。通过ELISA法检测小鼠血清抗体的效价，筛选分泌抗GP73蛋白抗体的杂交瘤细胞株；通过ELISA、Western blot等方法检测mAb的特异性。结果：利用表面展示GP73抗原表位的重组噬菌体为抗原免疫小鼠，通过细胞融合和筛选得到了能识别GP73蛋白的mAb，且特异性较好。结论：将蛋白质抗原的合适抗原表位展示在T7噬菌体表面，用这种重组噬菌体作为替代抗原可以制备识别全蛋白的mAb。
- 姚西宁霍景瑞刘英富刘保才吴峰范国才王清明
- 关键词：噬菌体展示GP73抗原表位
- 一种蛋白质B细胞表位展示系统的构建及验证
- 2012年
- 目的:建立一种能够有效展示蛋白质B细胞表位的载体系统,以用于表位特异性抗体的制备和表位疫苗的设计。方法:选用抗体的可变区作为蛋白质B细胞表位展示的骨架蛋白,B细胞表位的展示部位为CDR3区。全基因合成骨架蛋白基因,通过重叠PCR将B细胞表位编码序列插入到骨架蛋白基因中,原核表达目的蛋白,利用Sephacryl S-100层析柱进行蛋白纯化,用纯化的蛋白按常规方法免疫小鼠,采用ELISA法检测免疫血清的滴度及特异性,通过Western blot和间接免疫荧光技术进一步验证免疫血清对目的蛋白的识别。结果:成功构建了3种表位展示蛋白,均表现出了很好的抗原性,表位展示蛋白免疫血清具有较好的特异性,能够特异识别所展示的B细胞表位。结论:抗体可变区作为骨架蛋白能够很好地展示B细胞表位,免疫小鼠后获得的免疫血清表现出了较好的特异性。
- 刘英富霍景瑞范国才孙志贤王清明
- 关键词：B细胞表位骨架蛋白抗血清
- 重组人肝细胞生成素的生产方法及其治疗严重肝病的用途
- 本发明为重组人肝细胞生成素(rHPO)的生产方法及其治疗严重肝病的用途;属生物产品生产方法及用途领域。在获取hHPOcDNA并成功构建高效表达菌株的基础上,建立了一整套工程菌诱导表达、包涵体的分离和裂解、蛋白质纯化和复性...
- 贺福初杨晓明何浩王清明魏汉东李志红陈惠鹏吴祖泽
- 文献传递
- 细胞因子在肝纤维化基因治疗中的研究进展被引量：5
- 2007年
- 肝纤维化是慢性肝损伤的修复反应过程,其形成机制较为复杂,各种细胞因子彼此相互作用,形成细胞因子网络,共同调控肝纤维化的发生、发展。因此,肝纤维化的治疗也应采取综合措施。本文就几种重要的细胞因子,如转化生长因子β、肝细胞生长因子、γ-干扰素、白细胞介素-10、基质金属蛋白酶及其抑制剂和肝再生增强因子等治疗肝纤维化的研究进展作一简要概述。
- 周淑萍王清明吴祖泽
- 关键词：肝纤维化基因治疗细胞因子
- 大容量人天然抗体库的构建、鉴定及初步应用被引量：7
- 2005年
- 从未经主动免疫的健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,得到了6种VH家族基因,11种VL家族基因,这些抗体基因家族覆盖了人抗体基因多样性的95%以上。采用改进的SOEPCR法将VH基因和VL基因连接成人单链抗体(scFv)基因,并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,将连接产物电转化大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7超感染,构建了库容为5.58×109的噬菌体单链抗体库。采用BstNI酶切法证明,构建的噬菌体单链抗体库具有良好的多样性。以TNF-α为靶,从该抗体库中筛选到了抗TNF-α抗体,这说明该抗体库可用于人源抗体的筛选。
- 唐晓明王清明杨俊涛陈吉中范国才汪思应
- 关键词：主动免疫外周血淋巴细胞噬菌体抗体药物生物技术
- 新式SOE PCR高效组装人单链抗体在高容量人天然噬菌体抗体库中的应用被引量：3
- 2006年
- 目的探讨新式SOEPCR高效组装人单链抗体在高容量人天然噬菌体抗体库中的应用。方法通过引物设计的改变,将6种人VH基因和11种人VL基因利用两步法直接互相两两连接为人scFv基因,并且与传统的SOE法进行对比。scFv基因用于构建噬菌体单链抗体库。结果新式SOEPCR法成功的将6种人VH基因和11种人VL基因连接成66种不同的人scFv基因,与传统的SOEPCR法相比,效率高且方法简便,经过约130次电转化后,抗体库的总库容为5·58×109。结论成功地改进了传统的SOEPCR方法,高效组装了66种不同的人scFv基因,提高了抗体库的多样性。
- 唐晓明杨俊涛王清明汪思应
- 关键词：抗体细菌免疫球蛋白类重链
- B细胞表位的计算机预测被引量：4
- 2008年
- B细胞表位预测对于多种免疫学研究是必不可少的重要工具。本文概括了计算机预测B细胞表位的现状,汇总了多种表位预测工具及其原理和应用,介绍了一些用于建立与评价预测工具的数据库和数据集,对各类预测工具和数据库的特点和网址进行整理列表。另外,还分析了B细胞表位预测领域存在的问题,并对其未来发展提出了建议。
- 周游王清明
- 关键词：B细胞表位表位预测
