王瑧瑧
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- PML-NBs蛋白细胞内防御机制研究和克隆一种新的Bax异构体
- 本论文首先探讨了PML-NBs作为细胞内防御系统在对抗外界干扰如整合酶以及病毒感染过程中发挥的作用，并选择了噬菌体整合酶ΦBT1和腺病毒分别作为抗整合和抗病毒研究的对象。 噬菌体整合酶ΦBT1因其具有可介导转基因位点特...
- 王瑧瑧
- 关键词：异构体噬菌体
- 一种新的Bax异构体Baxθ促进细胞凋亡(英文)
- 2014年
- Bcl-2蛋白家族由一类含有特征性的Bcl-2同源结构BH、且主要调控细胞死亡的蛋白组成．Bax是一个含有多个特征性BH结构域、促进凋亡的蛋白．克隆了一个全新的Bax异构体Baxθ其eDNA由外显子1，4，5，6组成．MTC表达谱分析显示Baxθ在人体各组织中广泛且不同强度的表达．将Baxθ ORF插入pEGFP-N1载体，转染HEK293细胞，观察到一个15ku的融合蛋白，提示Baxθ编码的蛋白是与Baxβ共用同一个C端，且使用一个全新的翻译起始位点．尽管Baxθ缺乏BH3结构域，但它在HEK293细胞中过表达时能促进细胞凋亡．截断体实验分析发现Baxθ第43～69位氨基酸残基可能与其促进细胞凋亡的活性有关．BH3结构域可能不是Bel-2蛋白家族诱导细胞凋亡的唯一功能区域．
- 许正新王瑧瑧王然谢林俊薛京伦陈金中
- 关键词：BAX异构体细胞凋亡
- 一个phiC31相互作用的蛋白:人锌指蛋白403功能分析被引量：2
- 2009年
- 背景:phiC31是重要的基因治疗工具酶,其与细胞内蛋白的相互作用可能影响细胞内各种通路,从而关系到基因治疗的安全性。目的:构建锌指蛋白403基因原核表达载体,观察其在真核细胞的表达情况。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-10/2008-12在复旦大学遗传工程国家重点实验室完成。材料:大肠杆菌DH5α菌株及大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株均为实验室保存。方法:用pLexA-phiC31作为"诱饵",对人胎脑cDNA文库通过酵母双杂交进行筛查,分离阳性克隆。对锌指蛋白403基因构建原核表达载体并纯化鉴定。脂质体介导真核细胞进行转染并细胞定位观察。主要观察指标:锌指蛋白403的原核表达载体的构建、纯化及在真核细胞细胞质中定位的结果。结果:酵母双杂交进行筛查后分离61个阳性克隆中,有1个包含17号染色体17q12上的基因序列,其具有一个锌指结构,故名锌指蛋白403。成功构建了锌指蛋白403的原核表达载体,并纯化组氨酸标记的锌指蛋白403。在真核细胞中,构建了绿荧光融合载体,证明了此蛋白在细胞质中的定位。结论:实验结果发现了一个新的phiC31整合酶相互作用蛋白,成功构建了znf403基因的原核表达载体,znf403蛋白主要在细胞质中聚集和分布。
- 张健琦李文娟王瑧瑧田聆薛京伦陈金中
- 关键词：基因治疗蛋白表达
- Bim蛋白促凋亡活性必需核心元件的识别与研究(英文)
- 2012年
- 在之前的研究中,我们寻找并克隆到了一个新的Bim异构体Bimβ5,其转录从开放阅读框的第2个ATG起始,并编码一个包含BH3结构域的36个氨基酸的蛋白质.BH3结构域被认为是Bim蛋白及其他Bcl-2家族蛋白发挥作用的充分必要条件,因此有必要探寻其序列中对Bim蛋白功能起决定作用的核心区域.通过设计并构建基于Bimβ5的开放阅读框的一系列截断体,检测不同截断体的促凋亡能力,最终得到了Bim蛋白发挥功能所需的最短保守序列,即包含17个氨基酸的序列QELRRIGDEFNAYYARR,并将其命名为Bim核心元件.此外,通过对只包含Bim核心元件的截断体Bimβ5A3进行计算机分子建模,进一步揭示了Bim核心元件促凋亡的作用机理.Bim核心元件在介导Bak/Bax形成同源或异源二聚体时发挥着重要作用.
- 夏鹏王瑧瑧刘凌峰黄强陈金中
- 关键词：凋亡
- Daxx与ΦBT1相互作用并抑制其重组活性(英文)
- 2013年
- 噬菌体整合酶ΦBT1因其具有可介导转基因位点特异性整合的能力而成为了基因治疗中一种有效的工具,它丰富了转基因载体的选择,并使得多位点特异性整合成为可能.为了能够更加安全有效地利用ΦBT1整合酶作为基因治疗载体,有必要了解ΦBT1整合酶与宿主细胞内蛋白质相互作用的情况.酵母配对实验与免疫共沉淀实验揭示了ΦBT1整合酶中4个氨基酸433RFAL436对整合酶与PML-NBs蛋白Daxx的结合起到了关键作用.通过进一步构建并利用ΦBT1整合酶哺乳动物细胞报告系统,证实过表达Daxx会抑制ΦBT1整合酶在293T细胞中的重组效率.以上结果表明,细胞内的蛋白质可以与ΦBT1整合酶发生相互作用并抑制其重组活性,对于改善ΦBT1整合酶介导的转基因操作以及选择ΦBT1整合酶靶细胞方面具有重要的参考意义.
- 王瑧瑧王然李文娟薛京伦陈金中
- 关键词：DAXX
