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核糖核酸内切酶Ⅲ制备的HBV小干扰RNA(esiRNA)文库对乙肝病毒感染的基因治疗: 研究目的:建立HBV esiRNA文库制备技术;研究该文库对HepG2.215细胞内HBV表面抗原(HBsAg)表达的抑制效应。　　研究方法:　　 1.GST-大肠杆菌核糖核酸内切酶Ⅲ(GST-RNaseⅢ)融合蛋...; 田明忠; 关键词：乙肝病毒感染基因治疗

海水胁迫下水杨酸对绿豆种子萌发和幼苗生长的影响被引量：4: 2008年; [目的]探索海水胁迫下水杨酸对绿豆种子萌发和幼苗生长的影响。[方法]以4种海水胁迫、3种水杨酸浓度和自来水为对照,测定了绿豆幼苗的成活率、植株鲜重、根鲜重、根干重、株高、根数、叶片可溶性糖含量、茎脯氨酸含量指标的变化。[结果]海水胁迫程度、水杨酸浓度对绿豆种子萌发和幼苗生长有不同的影响。在海水胁迫较轻时(1/4海水),水杨酸处理可提高绿豆幼苗的成活率。从根干重来看,海水+水杨酸处理均使绿豆根生长旺盛。绿豆叶片中可溶性糖含量随海水胁迫程度呈波动的上升趋势。在海水条件下较高的水杨酸才能发挥出促进叶中合成可溶性糖的能力。海水胁迫下水杨酸对绿豆茎中脯氨酸含量的影响比对叶片中可溶性糖含量的影响明显,但变化也是呈波动形式。[结论]该研究为进一步研究海水胁迫下水杨酸的生理生化机理奠定了基础。; 关洪斌于卫霞田明忠张建肖王娟王晓兰; 关键词：水杨酸海水胁迫绿豆植物抗性

沉默驱动蛋白KIF4A的表达对卵巢癌细胞SKOV3迁移的影响被引量：5: 2010年; 目的研究沉默KIF4A基因对人卵巢癌SKOV3细胞迁移能力的影响。方法检索针对KIF4A基因的小干扰RNA(siRNA),构建shRNA表达质粒,转染人卵巢癌细胞SKOV3,通过G418筛选建立稳定低表达KIF4A的SKOV3细胞株。采用蛋白质免疫印记(Western blot)法检测shRNA对KIF4A蛋白分子的敲除效率。并通过细胞迁移实验评价低表达KIF4A对SKOV3细胞迁移能力的影响。结果成功筛选出稳定低表达KIF4A的细胞株,选择干扰效率较高的细胞株进行实验。Transwell细胞迁移实验显示,低表达KIF4A的细胞株的迁移率较阴性对照组增长近3倍(P<0.05)。结论 KIF4A低表达,可增强人卵巢癌细胞SKOV3的迁移能力。; 高杰王东秋田明忠朱长军; 关键词：驱动蛋白迁移

驱动蛋白分子Kif18A各功能域细胞定位的研究被引量：1: 2010年; 目的探讨人驱动蛋白分子Kif18A的各功能域在真核细胞中的定位。方法构建驱动蛋白分子Kif18A野生型及各功能域(马达区、杆状区、尾区和马达区含部分杆状区)的绿色荧光蛋白表达质粒,分别转染人乳腺癌细胞MCF7,运用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法验证各蛋白的表达,免疫荧光染色法分别对细胞进行微管蛋白和DNA染色,荧光显微镜下观察各绿色荧光融合蛋白的具体亚细胞定位。结果有丝分裂间期,Kif18A蛋白分子的马达区绿色荧光沿微管分布,尾区在细胞核和微管上均有分布,杆状区则散在分布在胞质中;有丝分裂末期,Kif18A的马达区仍沿微管分布,而马达区含部分杆状区主要集中在中体部位。结论 Kif18A蛋白分子的马达区和尾区与微管共定位;尾区含核定位序列;马达区和杆状区共同作用才能使该蛋白在有丝分裂末期定位于中体。; 王东秋高杰田明忠朱长军; 关键词：功能域细胞定位

糖核酸内切酶Ⅲ制备的小干扰RNA(esiRNA)文库对乙肝病毒感染的基因治疗被引量：1: 2010年; 目的建立HBV esiRNA文库并研究该文库对HepG2.215细胞内HBV表面抗原(HBsAg)表达的抑制效应。方法制备并纯化大肠杆菌核糖核酸内切酶ⅢGST融合蛋白(GST-RNaseⅢ);设计并制备HBV基因组序列1～540核苷酸(HBV-1)的双向转录模板(T7-HBV-1);体外转录该模板获得双链RNA(dsRNA),即T7-HBV-1 dsR-NA;用GST-RNaseⅢ酶切T7-HBV-1 dsRNA制备HBV小干扰RNA文库(esiRNA library);应用50、100和150 nmol/L纯化的esiRNA文库转染携带HBV病毒的HepG2.215细胞并应用实时定量PCR及ELISA检测HBsAg的转录和蛋白翻译表达水平。结果成功制备并纯化有活性的GST-RNaseⅢ;用该酶将体外制备的dsRNA酶切并纯化得到esiRNA文库;应用该文库成功抑制了HepG2.215细胞内的HBV HBsAg的表达,并且其抑制作用随esiRNA浓度升高而增强。结论用生物学方法制备的HBV esiRNA文库可以成功抑制HBV HBsAg在细胞内的表达,为预防治疗HBV感染开辟了新的思路。; 田明忠高杰王东秋朱长军; 关键词：文库

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田明忠