程茗
- 作品数：10 被引量：5H指数：2
- 供职机构：河南科技大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划河南教育厅自然科学研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 禽多杀性巴氏杆菌OmpA DNA疫苗免疫效果的研究被引量：3
- 2011年
- 目的：研究禽多杀性巴氏杆菌OmpA DNA疫苗在鸡体内诱导的免疫保护效果。方法：PCR扩增禽多杀性巴氏杆菌的ompa基因片段,克隆入pcDNA3.1（＋）上,构建重组质粒pOMPA,体外转染SP2/0细胞,RT-PCR和免疫荧光试验检测目的基因的转录及表达情况。动物免疫共分四组：pOMPA组、弱毒疫苗组、pCDNA3.1（＋）空载体组和PBS对照组,每组15只4周龄鸡,除弱毒疫苗组外其他三组均肌注免疫三次,每次间隔两周,弱毒疫苗组仅首免时肌注1羽份/每只鸡。间接ELISA检测免疫后血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫鸡外周血淋巴细胞增殖情况,双抗夹心ELISA检测IFN~γ分泌情况,强毒攻击,计算免疫鸡存活数目及保护率。结果：体外转染检测结果表明pOMPA可在体外培养的细胞中表达目的蛋白。动物免疫后,DNA疫苗组和弱毒疫苗组血清抗体水平持续上升,与两对照组相比差异极显著（P〈0.01）,且弱毒疫苗组血清抗体水平明显高于DNA疫苗组（P〈0.05）。经提取的外膜蛋白（Omps）诱生后,两疫苗组的SI值极显著高于pCDNA3.1（＋）组和PBS免疫组（P〈0.01）,两疫苗组之间则无差别。两疫苗组免疫鸡外周血淋巴细胞产生的IFNγ-极显著高于两对照组（P〈0.01）。强毒攻击后DNA疫苗组和弱毒疫苗组的保护率分别为60%和73.3%。结论：成功构建了禽多杀性巴氏杆菌OmpA DNA疫苗,该疫苗为动物提供一定的免疫保护力,但不够理想。
- 宫强王帅涛秦翠丽牛明福程茗侯玉泽张勇法孙晓菲
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌免疫应答
- 制备禽霍乱外膜蛋白H和A基因及融合DNA疫苗的方法
- 一种制备禽霍乱外膜蛋白H和A基因及融合DNA疫苗的方法包括利用聚合酶链式反应法获得禽霍乱外膜蛋白H和A基因、禽霍乱外膜蛋白H基因的酶切回收纯化、真核表达载体pcDNA3.1(+)的酶切回收纯化、纯化后的连接和转化、pcM...
- 宫强曲宁牛明福刘开永孙晓菲孙军杰王帅涛程茗李洋
- 文献传递
- 一种禽巴氏杆菌基因组疫苗的制备方法
- 一种禽巴氏杆菌基因组疫苗的制备方法，利用限制性内切酶Sau3AⅠ对目的基因进行酶切，利用限制性内切酶BamHI对真核表达载体pcDNA3.1(+)进行酶切，利用小牛小肠碱性磷酸酶对酶切后的真核表达载体pcDNA3.1(+...
- 宫强程茗牛明福孙晓菲张爱国孙军杰曲宁
- 文献传递
- 制备禽霍乱外膜蛋白H和A基因及融合DNA疫苗的方法
- 一种制备禽霍乱外膜蛋白H和A基因及融合DNA疫苗的方法包括利用聚合酶链式反应法获得禽霍乱外膜蛋白H和A基因、禽霍乱外膜蛋白H基因的酶切回收纯化、真核表达载体pcDNA3.1(+)的酶切回收纯化、纯化后的连接和转化、pcM...
- 宫强曲宁牛明福刘开永孙晓菲孙军杰王帅涛程茗李洋
- 一种禽巴氏杆菌基因组疫苗的制备方法
- 一种禽巴氏杆菌基因组疫苗的制备方法，利用限制性内切酶Sau3AⅠ对目的基因进行酶切，利用限制性内切酶BamHI对真核表达载体pcDNA3.1(+)进行酶切，利用小牛小肠碱性磷酸酶对酶切后的真核表达载体pcDNA3.1(+...
- 宫强程茗牛明福孙晓菲张爱国孙军杰曲宁
- 禽多杀性巴氏杆菌基因组表达文库的构建、免疫检测及ptfa基因的原核表达
- 禽多杀性巴氏杆菌病，又称禽出血性败血症或者禽霍乱(fowl cholera)，是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida，Pm)引起的一种接触性、败血性传染病，可感染鸡、鸭、鹅、鹌鹑和火鸡等禽类。该病...
- 程茗
- 关键词：巴氏杆菌免疫保护
- 文献传递
- 禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白和脂多糖的免疫保护效果被引量：2
- 2011年
- 为确定禽多杀性巴氏杆菌(P.multocida)的保护性抗原外膜蛋白(OMPs)和脂多糖(LPS)在抵抗感染中的作用,本研究提取了禽P.multocida CVCC 474的OMPs和LPS成分,将该两种成分分别与弗氏佐剂混合制备免疫原,进行动物免疫。小鼠分为4组:OMPs组、LPS组、禽P.multocida弱毒活疫苗组和PBS对照组,每组16只。各组均免疫3次,每次间隔两周。间接ELISA检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况。以禽P.multocida强毒株CVCC 474进行攻毒,计算小鼠死亡数及保护率。实验结果表明,动物免疫后,OMPs组与LPS组免疫小鼠特异性血清抗体水平持续升高,与弱毒活疫苗组水平相近,与PBS组相比差异极显著(p<0.01)。脾淋巴细胞增殖试验表明,OMPs组、LPS组和弱毒活疫苗组的SI值极显著高于PBS对照组(p<0.01),但3个免疫组之间则无明显差异(p>0.05)。攻毒保护试验结果显示,OMPs免疫组的保护率与弱毒活疫苗相当,为8/10,高于LPS免疫组的保护率(7/10),表明OMPs作为研制禽P.multocida亚单位疫苗具有良好的应用前景。
- 王帅涛宫强彭永刚程茗秦翠丽张敏牛明福
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白脂多糖疫苗免疫应答
- 禽霍乱外膜蛋白A基因疫苗的制备方法
- 一种禽多杀性巴氏杆菌病核酸疫苗的制备方法，以禽多杀性巴氏杆菌基因组序列设计引物，以禽多杀性巴氏杆菌CVCC474菌株基因组为模板通过PCR扩增出目的基因，利用限制性内切酶KpnⅠ和限制性内切酶EcoRⅠ对目的基因和真核表...
- 宫强曲宁孙晓菲牛明福张敏孙军杰程茗张勇法
- 禽多杀性巴氏杆菌基因组表达文库的构建及其免疫效果被引量：1
- 2013年
- 以限制性内切酶Sau3AⅠ酶切禽多杀性巴氏杆菌基因组DNA,回收500～3000bp的DNA片段,连接真核表达载体pcDNA3.1(+),电转化于大肠杆菌感受态细胞TG1中,构建禽多杀性巴氏杆菌的基因组表达文库。将文库随机分为5个子文库(子文库Ⅰ-子文库Ⅴ),分别提取各子文库重组质粒,以pcDNA3.1(+)和PBS为对照进行动物试验,每组16只BALB/c小鼠,各子文库组和pcDNA3.1(+)组以100μg/只的剂量肌注免疫,PBS组每只小鼠肌注100μL 1×PBS,各组均免疫3次,每次间隔2周。间接ELISA检测免疫小鼠的血清抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况,三免2周后检测脾淋巴细胞IFN-γ的分泌情况。强毒攻击,计算小鼠的相对保护率。结果显示,动物免疫后子文库Ⅰ组质粒免疫的小鼠血清抗体水平及淋巴细胞增殖水平和IFN-γ分泌水平均持续上升,明显高于其他各组(P<0.05)。动物攻毒试验表明,各子文库组的重组质粒均可为免疫小鼠提供一定的保护,其中第Ⅰ组的保护效果最好,说明子文库Ⅰ组中含有较好的保护性抗原基因,这为进一步筛选相关的免疫原基因和研制新型疫苗奠定了的基础。
- 宫强程茗牛明福秦翠丽孙晓菲
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌免疫效果
- 禽霍乱外膜蛋白A基因疫苗的制备方法
- 一种禽多杀性巴氏杆菌病核酸疫苗的制备方法，以禽多杀性巴氏杆菌基因组序列设计引物，以禽多杀性巴氏杆菌CVCC474菌株基因组为模板通过PCR扩增出目的基因，利用限制性内切酶KpnⅠ和限制性内切酶EcoRⅠ对目的基因和真核表...
- 宫强曲宁孙晓菲牛明福张敏孙军杰程茗张勇法
- 文献传递
