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农杆菌介导大豆子叶节遗传转化体系的优化被引量：8: 2015年; 利用农杆菌菌株EHAl05，对17个栽培大豆品种的大豆子叶节进行了侵染，从大豆基因型、氯气灭菌时间、外植体状态、菌株活力、侵染浓度、侵染时间、共培养时间等方面进行了优化。结果表明：氯气灭菌14～18h，可在不影响大豆种子活力的同时最大限度的减少污染；暗处理1d的外植体活力高于光照处理5～7d的外植体；菌液浓度（OD600nm）在0．8～1．0且侵染浓度OD600nm）为0．6～0．8时GUS瞬时表达率最高；适宜的侵染时间和共培养天数分圳为30min和4d。在上述优化研究基础上，形成一套综合的转基因体系，该体系的最高转化率可达3．33％。不同处理下的GUS瞬时表达率以及17个大豆品种的丛生芽诱导率综合评价显示，适宜转化的基因型为TL-1、HC-3、HC-6、Wil-liams82。; 翟锐高乐丁雪妮廖文林郑明洁陆智文智海剑; 关键词：大豆子叶节

大豆花叶病毒HC-Pro基因保守序列克隆及其RNAi载体的构建被引量：2: 2013年; 大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)病是全球最主要的大豆病害之一,严重危害大豆的产量和品质。RNA干扰(RNA interference,RNAi)能够在mRNA水平特异性沉默同源靶基因,为抗病毒作物的培育提供了新的途径。本研究对国内外11个不同SMV流行株系的HC-Pro基因进行了核苷酸序列比对,并以SC3株系的cDNA为模板克隆出高度保守的268 bp的基因片段,进而利用GATEWAY技术构建了适合农杆菌介导大豆转化的RNAi表达载体pB7GWIWG2(II)-HC-Proi。并对BP反应和LR反应的纯化产物进行了测序鉴定,测得序列在NCBI上进行比对,匹配度为100%;以35S启动子和终止子设计引物,扩增得到464和478 bp两个片段,说明HC-Proi基因与pB7GWIWG2(II)重组形成反向重复结构,载体构建成功。结果为利用RNA干扰技术改良大豆对大豆花叶病毒的抗性奠定了基础。; 高乐宋英培李凯章红运沈颖超翟锐智海剑; 关键词：大豆花叶病毒克隆 RNAI GATEWAY技术

大豆翻译起始因子4E 干扰片段克隆及其 RNAi载体构建被引量：2: 2014年; 应用基于RNA干扰（ RNA interference，RNAi）原理的大豆转基因技术，能够在转录水平沉默同源靶基因，这为转基因抗病毒作物的培育提供了新的策略。通过比对已报道的能与病毒VPg发生互作的10种植物的eIF4E氨基酸序列，确定出大豆eIF4E的保守区间为62～237位氨基酸序列，克隆出406 bp的干扰片段eIF4Ei（含58 bp特异性重组序列attB），进而采用GATEWAY技术构建了干扰表达载体pB7GWIWG2（Ⅱ）-eIF4Ei。之后通过测序证实干扰片段eIF4Ei在载体构建过程中没有发生变异；酶切试验证实终端质粒的2个ccdB位点均被eIF4Ei置换；用启动子和终止子设计的引物对含有重组质粒的菌液进行PCR扩增，证实2个干扰片段以相反的方向插入到终端质粒中。从而证明反向重复的干扰表达载体构建成功，为应用基于RNAi原理的大豆转基因技术培育对大豆花叶病毒具有抗性的大豆新种质提供了基础材料。; 高乐翟锐丁雪妮李凯章红运王涛智海剑; 关键词：大豆花叶病毒 RNA干扰 GATEWAY技术

一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法: 本发明公开了一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法。该方法是通过基因工程的手段沉默大豆中的eIF4E基因获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆；优选通过构建SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干扰片...; 智海剑高乐落金艳丁雪妮李凯王涛翟锐

大豆花叶病毒CP基因RNAi载体的构建及大豆遗传转化被引量：5: 2014年; 为获得含有大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)CP基因干扰片段的转基因大豆新材料,对11个SMV流行株系的CP基因进行了核苷酸序列比对,采用GATEWAY技术构建了RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体pB7GWIWG2(Ⅱ)-CPi,对重组载体测序比对,通过酶切以及PCR方法鉴定载体,并利用农杆菌介导的转基因体系进行大豆遗传转化。克隆出264 bp高度保守的CPi干扰片段,通过测序证实其与目标序列的匹配度达到100%;重组质粒经过XbaⅠ单酶切后出现783 bp和10818bp两条带,经过EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后出现2256bp和9346bp两条带,说明2个ccdB结合位点均被CPi取代;PCR反应得到474 bp和460 bp两条带,说明CPi以反向重复形式与pB7GWIWG2(Ⅱ)组合。共获得10棵T0代转基因幼苗,经除草剂涂抹、PCR、PAT/bar转基因检测试纸检测后,6株为阳性,表明该方法可筛选出对大豆花叶病毒具有抗性的转基因大豆新种质,为SMV抗病育种工程提供良好的亲本材料。; 高乐翟锐丁雪妮李凯廖文林智海剑; 关键词：大豆花叶病毒 CP基因 RNAI GATEWAY技术

一种感染烟草的大豆花叶病毒的获得方法及其应用: 本发明公开了一种感染烟草的大豆花叶病毒的获得方法及其应用。使用保藏号为CCTCC NO：V201349的大豆花叶病毒分离物侵染本氏烟草获得感染烟草的大豆花叶病毒。按照本发明所述的方法获得感染烟草的大豆花叶病毒在验证抗大豆...; 智海剑高乐李凯任锐仲勇坤翟锐; 文献传递

大豆花叶病毒CP基因RNAi载体的构建及大豆遗传转化: 大豆花叶病毒病(Soybean Mosaic Virus,SMV)是一种世界性大豆病毒病害,SMV侵染大豆以后,叶片呈花叶状,影响其光合作用,严重时会造成顶枯和坏死而导致整株植株死亡。每年,SMV会造成我国大豆减产15-...; 翟锐; 关键词：大豆子叶节农杆菌介导 CP基因; 文献传递

一种感染烟草的大豆花叶病毒的获得方法及其应用: 本发明公开了一种感染烟草的大豆花叶病毒的获得方法及其应用。使用保藏号为CCTCC NO：V201349的大豆花叶病毒分离物侵染本氏烟草获得感染烟草的大豆花叶病毒。按照本发明所述的方法获得感染烟草的大豆花叶病毒在验证抗大豆...; 智海剑高乐李凯任锐仲勇坤翟锐; 文献传递

一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法: 本发明公开了一种培育具有马铃薯Y病毒属广谱病毒抗性的转基因大豆的方法。该方法是通过基因工程的手段沉默大豆中的eIF4E基因获得具有广谱病毒抗性的转基因大豆；优选通过构建SEQ ID NO.1所示的大豆eIF4E基因干扰片...; 智海剑高乐落金艳丁雪妮李凯王涛翟锐

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翟锐