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三例同核异质雄性不育小麦mtDNA差异片段的比较分析被引量：1: 2010年; 为了从分子水平鉴别三例同核异质小麦雄性不育材料,利用RAPD技术,对细胞核来自同一普通小麦(Triticum aestivum),细胞质分别来自粘果山羊草(Aegilops kotschyi)、二角山羊草(Ae.bicornis)和斯卑尔脱小麦变种(T.spelta)的三例同核异质小麦雄性不育系的线粒体DNA(mtDNA)进行差异片段的比较分析。结果表明:(1)三种不育系在mtDNA上呈现明显差异;(2)对三种不育系的mtDNA差异片段进行回收、克隆、测序和比对,结果片段OPY01-1517和OPP02-750均与普通小麦mtDNA具有较高的同源性,同源性分别为99%和98%。这为进一步从分子水平鉴别含有斯卑尔脱小麦和二角山羊草细胞质的小麦材料奠定了基础,也为区别不同细胞质雄性不育系提供了一定依据。; 兰红玉张改生刘红占高春宝张龙雨胡俊敏张明珠; 关键词：小麦 MTDNA RAPD 克隆测序

黏类小麦细胞质雄性不育系mtDNA消减文库的构建被引量：2: 2010年; 本研究利用抑制性消减杂交技术,构建了黏类小麦细胞质雄性不育线粒体DNA的消减文库。分别提取相同细胞质背景下的不育和可育等基因系线粒体基因组DNA(mtDNA),用RsaⅠ酶切成大小不等的片段,并各自与不同的接头连接,连续经过两次消减杂交和两次PCR扩增,将PCR产物与克隆载体连接,转化为大肠杆菌感受态细胞DH5α,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建差异DNA消减文库。在构建的不育mtDNA文库中,将SSH文库的全部扩增产物与SSH文库中的单条扩增条带分别进行胶回收和克隆转化,分别挑取54个和6个阳性克隆进行测序分析和相关功能初步比对。结果表明,不育mtDNA的SSH文库差减杂交效率较高,质量较好;回收单条扩增条带分别进行克隆测序的结果准确率较高;对测序序列进行BLASTx比对及功能注释分析发现,约90%的序列来源于线粒体基因nad1和nad5的非编码区。; 胡俊敏张龙雨袁正杰张改生韩艳芬李亚鑫盛英位芳王俊生牛娜马守才李红霞; 关键词：雄性不育系抑制性消减杂交

黏类小麦细胞质雄性不育线粒体atp6基因转录本编辑位点被引量：19: 2010年; 以黏类小麦细胞质雄性不育系ms(Kots)-90-110(A)及其近等可育基因系BC5F2为材料,采用克隆测序与PCR产物直接测序方法,对黏类小麦线粒体atp6基因在花药发育各阶段的RNA编辑进行了分析。结果表明,小麦atp6基因保守区DNA序列在供试材料不育系及其近等可育基因系中完全一致,且与普通小麦和提莫菲维小麦atp6基因序列同源性为99%。两种方法测序分析atp6基因转录本保守区RNA编辑的结果规律相似。atp6基因共有15个编辑位点,其中13个发生在密码子的第一和第二位点上,这些位点的编辑都使氨基酸种类发生了变化;有2个发生在密码子的第三位点上,不引起氨基酸种类的变化;其中第6和第7位点是共转录的。随着花药发育时期的推移,各位点的编辑频率逐渐增高。不育系与其近等可育基因系相比,在引入核恢复基因后,各位点的编辑频率明显提高。编辑不充分的转录产物可能会影响线粒体功能的正常发挥,表明黏类小麦细胞质雄性不育与线粒体atp6基因转录本保守区的编辑有一定的相关性。; 韩艳芬张龙雨胡俊敏张改生李亚鑫盛英位芳牛娜马守才; 关键词：小麦细胞质雄性不育 ATP6 RNA编辑

黏型小麦雄性不育系线粒体嵌合基因的克隆与表达及其mtDNA消减文库的构建: 黏类小麦不育系其线粒体基因组来自黏果山羊草（Ae.kotschyi）、易变山羊草（Ae.variabilis）、偏凸山羊草（Ae. ventricosa）和二角山羊草（Ae. bicornis）,在该类不育系中,由于育性...; 胡俊敏; 关键词：嵌合基因抑制性消减杂交; 文献传递

黏类小麦细胞质雄性不育线粒体atp6基因转录本编辑位点: 韩艳芬张龙雨胡俊敏张改生李亚鑫盛英位芳牛娜马守才; 关键词：CYTOPLASMIC MALE STERILITY ATP6

内参法在线粒体DNA纯度鉴定中的应用被引量：1: 2009年; 为了确定普通差速离心法提取的小麦线粒体DNA（mtDNA）的纯度，以小麦肌动蛋白β亚基（β-Ac～tin）、1，5-二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶大亚基（RabcL）和细胞色素C氧化酶第三亚基（COXⅢ）基因的片段作为内参标记，依靠聚合酶链式反应（PCR）及琼脂糖凝胶电泳技术，对提取的mtDNA进行了检测。结果表明，普通差速离心法提取的mtDNA中混杂有核DNA和叶绿体DNA（ctDNA）。对提取的mtDNA稀释后再进行内参法检测，结果发现，当mtDNA稀释到DNA原液的300～400倍时，混杂其中的核DNA已达不到PCR反应的敏感度，但mtDNA、ctDNA仍能满足作为PCR反应体系模板的要求。此时，提取到的mtDNA可视为无核DNA污染的细胞质基因组DNA。; 袁正杰张改生孙瑞胡俊敏位明明张龙雨李红霞陈蕊红牛娜马守才; 关键词：小麦线粒体DNA 纯度鉴定

杂交小麦强优势组合抗白粉病基因的定向导入与改良研究初报被引量：3: 2010年; 为创制杂交小麦白粉病抗性定向改良育种新体系,以白粉病抗源材料N95175、N9134为抗病种质,以强优势杂交小麦新品种"西杂一号"和"西杂五号"的亲本为受体,以陕西不同地区小麦白粉病流行混合菌种为菌源,对供试材料亲本、杂种F1代和回交后代材料进行了苗期和成株期抗性鉴定,并利用与抗白粉病基因Pm21共分离的SCAR标记、抗白粉病基因PmAS846紧密连锁的SSR标记作为抗病性定向选择分子标记进行了抗病性鉴定。结果表明,以N95175、N9134为亲本的杂种F1含有Pm21基因或PmAS846基因,苗期和成株期均表现为高抗,与抗病亲本的抗病性表现基本一致,符合杂种优势表现显性假说,其抗病性主要由显性单基因控制。研究同时表明,仅凭借表型鉴定结果盲目性较大,表型鉴定和分子标记鉴定相结合准确率较高。; 刘红占张改生兰红玉张明珠李莉高春保袁蕾胡俊敏位芳牛娜马守才李红霞; 关键词：杂交小麦白粉病抗病性

几类同核异质雄性不育小麦线粒体DNA的RAPD标记多态性被引量：3: 2011年; 为了明确不同细胞质来源的小麦不育系mtDNA的差异,对具有相同核背景而细胞质分别来源于偏凸山羊草(Ae.ventricosa)、易变山羊草(Ae.Variabilis)、提莫菲维小麦(T.timopheevi)的3种小麦细胞质雄性不育系,采用50条随机引物对其细胞质线粒体DNA(mtDNA)进行了RAPD多态性分析,筛选出3条特异性引物,其中引物S22在ms(Ae.ventricosa)-90-110中扩增出分子量约为1 500bp的特异带,引物OPAA16在ms(T.timopheevi)-90-110中扩增出分子量约为1 200bp的特异带,引物OPA05在ms(Ae.vari-abilis)-90-110中扩增出分子量约为670bp的特异条带。分析表明,3类不同细胞质的小麦不育系在线粒体DNA上表现出稳定的差异,为进一步在分子基础上鉴别这3类不育胞质源不育系奠定了基础。; 高春保张改生兰红玉刘红占胡俊敏张明珠张龙雨; 关键词：小麦细胞质雄性不育线粒体DNA RAPD分析

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胡俊敏