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Tudor-SN蛋白作为mTOR通路下游靶分子,通过促进心肌细胞增殖提高心脏功能: 成熟的心肌细胞脱离细胞周期,进入终末分化状态,虽然研究发现心肌细胞具有再增殖的潜能,但相对其他组织或细胞,心肌细胞的再生能力处于很低的水平,使的损伤一旦发生很难修复。成熟心肌退出细胞周期伴随大量周期调控蛋白的表达下调,通...; 甘世虎马锦征刘明霞苏超杨洁; 关键词：MTOR

SND1蛋白与HuR蛋白相互结合作用: 2014年; 人源SND1（staphylococcal nuclease domain containing 1）蛋白由N端的SN（staphylococcal nucleases）结构域和C端的TSN（Tudor-SN5）结构域组成,其中SN结构域又包含SN1~SN4四个重复的功能片段.本课题组前期研究结果表明,SND1蛋白可以通过SN结构域与G3BP（Ras-GAP SH3 domain-binding protein）蛋白相互结合,共同参与细胞应激颗粒（stress granules,SGs）的形成.SGs是真核细胞在受到氧化应激、病毒感染等外界刺激时在胞浆内形成的与RNA代谢相关的颗粒状结构.对于SGs的成分鉴定及相互作用的分析一直是学者们研究的热点.本研究中,免疫共沉淀实验结果表明,以抗SND1抗体可以共沉淀出HeLa细胞内另一个重要的应激相关人类抗原R（human antigen R,HuR）蛋白.另外,利用脂质体转染法将pcDNA3-FLAG-HuR重组质粒瞬时转染入HeLa细胞,成功过表达外源性的FLAG-HuR融合蛋白,再以抗FLAG标签抗体又可以反向共沉淀出内源性SND1蛋白,证明SND1与HuR之间存在蛋白质间的相互结合作用.细胞免疫荧光实验结果表明,当给予HeLa细胞0.5 mmol/L亚砷酸钠氧化应激时,SND1与HuR蛋白共同定位于胞浆中的SGs结构中.GST-pulldown实验结果进一步表明截短的SN结构域可以结合HuR蛋白,其中以SN1功能片段的结合能力最强,表明SND1蛋白是通过SN结构域与HuR蛋白形成应激复合物,参与SGs的胞浆组装.并不定位于SGs的TSN结构域亦可结合HuR蛋白,提示SND1-HuR的蛋白相互作用可能并不局限于SGs,具有其它方面的功能意义.; 高星杰张毅宋娟付雪苏超张桂敏张春燕于林姚智杨洁; 关键词：免疫共沉淀结构域

针对人Tudor-SN蛋白T103位点的应激磷酸化抗体制备及分析被引量：1: 2014年; 目的:针对人Tudor-SN蛋白T103位点(103位苏氨酸,Thr103)制备兔源多克隆磷酸化抗体,并进行应激磷酸化的时相分析。方法:首先人工合成含磷酸化T103(pT103)位点的多肽,4次免疫新西兰大白兔后获取抗血清;然后以AKTA蛋白纯化系统进行纯化,并利用Western blotting和细胞免疫荧光实验对纯化后的抗pT103抗体进行鉴定;最后以In-cell Western法进行Tudor-SN蛋白的应激磷酸化/去磷酸化时相性分析。结果:(1)确定并合成磷酸化多肽"TIENKpTPQGRC",收集约75 ml兔源抗血清,纯化后获取2.08 mg/ml抗pT103抗体;(2)当HeLa细胞受到氧化应激时,以pT103抗体检测的磷酸化信号增强,可在胞浆中检测到颗粒状信号,与内源性Tudor-SN应激颗粒存在共定位关系;(3)在氧化应激及应激去除后恢复过程中,T103位点的磷酸化水平呈现一定的波动性时相。结论:成功制备针对Tudor-SN蛋白T103位点的兔源多克隆抗pT103抗体,有助于从磷酸化修饰角度进行Tudor-SN在细胞应激方面的机制探讨。; 高星杰张毅苏超付雪史雪彬尹洁何津岩王鑫廷姚智杨洁; 关键词：磷酸化抗体

pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒的构建及鉴定: 2016年; 目的构建并鉴定pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒,为深入研究Argonaute1蛋白在细胞应激及相关疾病的生物学作用奠定基础。方法提取He La细胞总RNA,反转录出含Argonaute1的c DNA;以Argonaute1 c DNA为模板,采用PCR法扩增出带有EcoRⅠ和Bam HⅠ双酶切的目的基因;采用双酶切法将目的片段连接到pmCherry-C1载体上;将构建成功的pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒转染入He La细胞内,以Western blotting法检测Argonaute1与樱桃红(Cherry)蛋白的融合表达情况;以激光共聚焦显微镜观察细胞内Argonaute1蛋白与细胞应激颗粒的标记蛋白(G3BP)及加工体的标记蛋白(DCP1α)的应激共定位关系。结果以EcoRⅠ、Bam HⅠ单、双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒无误;融合蛋白表达阳性;当细胞受到应激时,Argonaute1蛋白与G3BP、DCP1α蛋白共定位。结论本研究成功构建重组pmCherry-C1-Argonaute1质粒。该质粒可有效表达Cherry标记的Argonaute1融合蛋白,有助于深入研究Argonaute1蛋白在细胞应激及相关疾病领域的生物学作用。; 崔晓腾高星杰张春燕付雪苏超任媛媛杨洁; 关键词：重组质粒融合蛋白

重组原核质粒GST-hTudor-SN-SN（1～4）的构建及表达: 2010年; 目的将人类Tudor-SN（tudor staphylococcal nuelease）蛋白SN（1～4）基因片段分别定向连入pGEX-4T-1质粒,使Tudor-SN蛋白sN各功能片段与（;＂蛋白在大肠埃希菌BL21细胞内融合表达.方法以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切法将目的片段连接纠pGEX-4T-1载体卜,再将构建成功的GST-hTudor-SN-SN（1～4）重组质粒转化人大肠埃希菌BL-21内,IPTG诱导表达后再以考马斯亮蓝染色法检测GST融合蛋白的表达.结果以单/双酶切和基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,考马斯亮监染色法观察到GST融合蛋白的正确表达.结论重组原核GST.hTudor-SN-SN（1-4）质粒成功构建和表达.; 苏超朱梦瑜高星杰王鑫廷张桂敏付晓葛林杨洁; 关键词：PGEX-4T-1 重组质粒融合蛋白

Tudor-SN蛋白参与细胞周期及细胞增殖调控的机制研究: 研究目的：细胞周期，是一个细胞从上一次分裂发生，到下一次分裂形成两个子细胞的过程，它是生命不断延续并更新的基础。细胞通过每个周期的完成，来实现遗传物质的复制以及平均分配。细胞周期与细胞增殖、细胞分化之间存在着密切的联系，...; 苏超; 关键词：细胞周期增殖调控

生物化学与分子生物学教学和科研实验室安全管理实践被引量：3: 2021年; 高校实验室是培养学生创新实践能力与综合素质的主要场所,根据用途不同,一般分为教学实验室和科研实验室,两种类型实验室运行特点不同,安全管理模式也有差异。通过分析天津医科大学生物化学与分子生物学系教学和科研实验室在实际运行中存在的安全隐患,根据实验室的特点,分别阐述了两种实验室安全管理的实践探索,形成了符合学科特点的教学、科研实验室安全管理模式,期望为其它高校同类实验室安全管理提供借鉴。; 孙亚楠任媛媛田姗姗刘灵苏超孙晓明刘欣张纬; 关键词：生物化学与分子生物学教学实验室安全管理

Tudor-SN蛋白与乳腺癌细胞生物学行为的关系研究: 目的乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其复发和转移严重威胁患者的生命.在恶性肿瘤发生转移的过程中,肿瘤的高侵袭性和迁移能力的提高是重要的前提条件.Tudor-SN蛋白(又称p100,SND1蛋白)是一种高度同源性的,且...; 刘欣王保亚苏超高星杰朱梦瑜段中潮钱宝鑫付晓杨洁; 关键词：TGF-Β信号通路 SMAD蛋白乳腺癌

利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统构建HeLa细胞SND1基因敲除稳定株被引量：2: 2015年; 目的:利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除He La细胞中SND1基因,构建He La细胞SND1基因敲除稳定株。方法:设计一对特异性识别SND1基因第二个启动子的上下游sg RNA,以PX462质粒为载体,构建出一对重组真核表达质粒。酶切和测序鉴定后,将一对重组质粒共同转染进入He La细胞中,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,挑取单克隆细胞进行培养。最后用Western Blot鉴定敲除效果。结果:sg RNA正确插入到PX462质粒载体中,转染并筛选单克隆后的细胞中没有SND1蛋白的表达。结论:成功构建出He La细胞SND1基因敲除稳定株。; 刘郁莹崔晓腾高星杰赵秀娟付雪葛林苏超杨洁; 关键词：基因敲除 HELA细胞

活细胞内人AGTR1-3′UTR的荧光标记及应激定位分析: 2014年; 利用噬菌体衣壳蛋白MS2和带有序列特异性茎环结构(含有MS2蛋白结合位点)的RNA之间的高度亲和力,对外源性人血管紧张素1型受体(angiotensin II receptor type 1,AGTR1)mRNA 3′端非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)片段进行红色荧光标记,进而在活细胞(HeLa)内研究该mRNA片段的应激生物学行为。通过在pSG5空载体质粒上先后插入两个双链DNA目的片段AGTR1-3′UTR和24×MS2,构建重组质粒pSG5/AGTR1-3′UTR/24×MS2,并将该质粒与重组质粒pERFP/MS2和pEGFP/C1-G3BP共转染入Hela细胞。荧光显微成像结果显示,AGTR1-3′UTR-24×MS2 mRNA片段能够携带具有入核信号的MS2-RFP融合蛋白离开胞核进入胞浆,而且在亚砷酸盐刺激下,红色荧光标记的AGTR1-3′UTR-24×MS2 mRNA片段可在胞浆中形成与应激蛋白G3BP-GFP共定位的颗粒。该结果表明,针对AGTR1-3′UTR片段的MS2-RFP荧光标记系统构建成功,该荧光标记系统能有效避免假阳性的荧光信号。在细胞受到氧化应激时,AGTR1-3′UTR会被招募至胞浆中的应激颗粒结构中,启示了AGTR1-3′UTR区域对于调控AGTR1 mRNA在细胞内的应激定位具有重要作用。; 张毅高星杰付雪苏超史雪彬段中潮付晓何津岩杨洁; 关键词：重组质粒荧光标记

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苏超

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