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原核表达人41型腺病毒(Ad41)蛋白V及其抗血清的制备: 2009年; 【目的】人肠腺病毒Ad41被称为难养腺病毒,其难以培养的特性可能与次要核心蛋白V(Ad41proteinV,pV)表达不充分有关。本研究拟表达纯化Ad41pV抗原,免疫动物制备抗血清,为研究Ad41难养性机理打下基础。【方法】以野生型Ad41基因组DNA为模板,PCR扩增pV,克隆到原核表达载体pET30a(+),测序后,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,固化金属亲和层析(IMAC)方法纯化,免疫BALB/c小鼠制备抗血清,将获得的抗血清用于Western blot检测Ad41感染各细胞系后pV的表达。【结果】克隆得到包括完全编码区的pV基因,表达质粒转化BL21(DE3)菌株,使用1mmol/LIPTG37℃诱导4h,pV以包涵体形式表达,或使用0.5mmol/LIPTG25℃诱导8h获得可溶性表达。利用皮下多点注射包涵体的方法免疫小鼠,得到抗pV抗血清;使用纯化的可溶性pV作为抗原对抗血清进行了鉴定,表明该抗血清可用于Western blot检测。等量野生型Ad41感染293或293E12细胞(一株稳定表达Ad41E1B55K基因的293细胞)后,pV在293E12细胞的表达明显高于293细胞。【结论】成功克隆了Ad41pV基因,表达纯化了重组蛋白,获得了可用于Western blot检测的抗血清,为进一步研究Ad41难养性机理打下了基础。; 董流昕邹小辉宋敬东屈建国鲁茁壮洪涛; 关键词：PROTEIN V 抗血清

提高Ad41 E1B55K表达水平促进重组Ad41在293细胞的复制: 人腺病毒F组含有2个成员,Ad40和Ad41,二者均能够引起婴幼儿腹泻。由于它们是天然的肠道病原,因此有改造为肠道靶向基因转移载体的潜力。但是Ad40和Ad41在体外难以培养,被称为难养腺病毒（fastidious ad...; 董流昕; 文献传递

人腺病毒41型（Ad41）难养研究进展: 2010年; 人肠腺病毒41（Human Adenovirus Type 41，Ad41）属于人腺病毒F组，是引起胃肠炎的病原之一，因而被称为肠腺病毒。由于在体外难于培养，又被称为难养性腺病毒。6％～8％的4岁以下婴幼儿腹泻由该病毒引起。Flewett等首次在电镜下观察得到Ad41，De Jung首次成功分离Ad41的病毒株，并将其命名为Tak株。; 董流昕; 关键词：人腺病毒婴幼儿腹泻镜下观察胃肠炎病毒株

人细小病毒B19病毒样颗粒的制备被引量：3: 2009年; 采用昆虫杆状病毒表达系统,制备人细小病毒B19病毒样颗粒(VLPs)。先通过PCR方法合成细小病毒B19衣壳蛋白基因VP2,将其克隆到pFastBac1质粒,然后转化含杆状病毒穿梭载体Bacmid的E.coliDH10Bac感受态细胞,获得重组杆状病毒表达质粒Bacmid-VP2。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,包装重组杆状病毒rBac-VP2。利用rBac-VP2感染Sf9细胞表达B19VP2蛋白,通过间接免疫荧光、Western blotting等方法鉴定目的蛋白表达。采用两次超速离心的方法对表达产物进行纯化,纯化产物在透射电镜下可见直径约22nm的VLPs。本研究成功制备了人细小病毒B19的VLPs,为B19感染血清学检测方法的建立提供了参考。; 邹小辉董流昕宋敬东屈建国于修平鲁茁壮洪涛; 关键词：细小病毒 B19 VP2 杆状病毒病毒样颗粒

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董流昕

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