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原代培养的大鼠远端肺动脉平滑肌细胞的功能研究被引量：9: 2012年; 目的探索原代培养的大鼠远端肺动脉平滑肌细胞(PASMC)是否具有血管平滑肌的功能,为缺氧性肺动脉高压等肺血管疾病发病机制及药物干预研究打下基础。方法采用显微操作和胶原酶消化法分离、培养大鼠远端PASMC,对培养细胞进行形态学观察、平滑肌α-actin免疫荧光染色鉴定,并用荧光显微镜法观测高钾(60 mmol·L-1KCl)溶液对大鼠远端PASMC的细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响。结果培养的大鼠远端PASMC呈血管平滑肌细胞典型的"峰、谷"状生长,平滑肌α-actin免疫荧光染色呈阳性反应,60 mmol·L-1KCl溶液使PASMC的[Ca2+]i明显增高,5μmol·L-1硝苯地平能完全阻断PASMC的[Ca2+]i对KCl溶液的反应。结论原代培养的大鼠远端PASMC具有典型血管平滑肌细胞形态学、免疫学特征,具有功能正常的电压依赖性钙通道(VDCC),可广泛用于缺氧性肺动脉高压等肺血管疾病发病机制及药物干预的研究。; 彭公永周玉民胡国平蒋永亮胡锦兴; 关键词：肺动脉平滑肌细胞原代培养电压依赖性钙通道肺动脉高压

常压慢性持续缺氧大鼠肺动脉高压模型的建立被引量：12: 2011年; 目的探索大鼠肺动脉高压模型的建立方法,为慢性缺氧性肺动脉高压发病机制等方面研究提供实验动物模型。方法 Wistar大鼠常压持续缺氧3周,观测大鼠体重、平均肺动脉压(MPAP)、右心室收缩压(RVSP)、右心室肥大指数[RV/(LV+S)]、红细胞比容,并观测肺血管病理学改变及血管壁相对厚度指数(RTI)。结果缺氧组大鼠体重增长缓慢,MPAP、RVSP、RV/(LV+S)、红细胞比容明显高于对照组(P<0.05)。肺组织病理检查示缺氧组大鼠肺内血管管壁明显增厚,管腔狭窄,RTI较对照组显著增加(P<0.05)。结论常压慢性持续缺氧3周能形成较理想的大鼠肺动脉高压模型。; 彭公永胡国平周玉民洪城胡锦兴蒋永亮田佳; 关键词：缺氧肺动脉高压

急性缺氧对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度的影响被引量：1: 2013年; 目的：研究急性缺氧对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞（PVSMC）细胞内钙浓度（[Ca^2＋]i）的影响及L型电压依赖性钙通道（VDCC）阻断剂硝苯地平的作用，为缺氧性肺动脉高压发病机制的进一步研究提供理论依据。方法：胶原酶消化法培养大鼠远端PVSMC，利用荧光显微镜和细胞内钙浓度检测系统观测急性缺氧（4％O2）、高钾（60mmol／LKCl）溶液对PVSMC的[Ca^2＋]i影响及硝苯地平的干预作用。结果：对照组PVSMC的[Ca^2＋]i随时间变化维持基线水平；缺氧组PVSMC急性缺氧后，[Ca^2＋]i迅速升高并维持平台水平，△[Ca^2＋]i达82．83nmol／L＋23．03nmol／L；硝苯地平干预组PVSMC予急性缺氧和5μmol／L硝苯地平干预后，[Ca^2＋]i升高幅度较小；高钾溶液孵育PVSMC后，[Ca^2＋]i迅速增高，5μmol／L硝苯地平能完全阻断PVSMC的[Ca^2＋]i对高钾溶液的反应。结论：急性缺氧可使大鼠远端PVSMC的[Ca^2＋]i升高，其机制可能与激活PVSMC的VDCC和另外的非VDCC依赖的钙通道导致细胞外Ca^2＋内流有关。; 彭公永周玉民蒋永亮胡国平邹威凤; 关键词：急性缺氧细胞内钙浓度

环匹阿尼酸对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度的影响被引量：1: 2012年; 目的研究环匹阿尼酸(CPA)对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响及可能机制。方法原代培养大鼠远端PVSMC,并通过形态学和免疫荧光染色鉴定,利用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测高钾(60 mmol/L KCl)溶液及CPA对PVSMC的[Ca2+]i影响。结果原代培养的PVSMC表现出典型血管平滑肌细胞生长特征,并对平滑肌α-actin免疫荧光染色呈阳性反应;高钾溶液使PVSMC的[Ca2+]i显著升高,5μmol/L硝苯地平能完全阻断PVSMC的[Ca2+]i对高钾溶液的反应;10μmol/LCPA能使含5μmol/L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i短暂小幅升高,恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后,10μmol/L CPA能使含5μmol/L硝苯地平的Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i迅速升高。结论 CPA能够使大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高,其机制可能与Ca2+从肌浆网释放,并诱发细胞外Ca2+通过钙池操纵性钙通道(SOCC)内流有关。; 彭公永蒋永亮胡国平周玉民胡锦兴赵祝香邹威凤; 关键词：环匹阿尼酸

经典瞬时受体电位蛋白在大鼠远端肺静脉平滑肌细胞的表达被引量：2: 2011年; 目的：研究经典瞬时受体电位（TRPC）蛋白在大鼠远端肺静脉平滑肌细胞（PvSMC）的表达。方法：利用胶原酶消化法培养大鼠远端PVSMC，并通过形态学和免疫学鉴定PVSMC；采用Real—timePCR和免疫印迹法检测TRPC蛋白在大鼠远端PVSMC的表达。结果：原代培养的PVSMC呈长梭形，表现出典型的血管平滑肌细胞生长特点，并对平滑肌细胞ractin免疫荧光显色呈阳性反应；Real—timePCR显示，在已知的7个TRPC成员（TRPCI—7）中，大鼠远端PVSMC有TRPC-1、TRPC-2、TRPC-3、TRPC-4、和TRPC-6的mRNA表达，表达强弱顺序为：TRPC-6〉TRPC-1〉TRPC-4〉TRPC-3〉TRPC-2，不表达TRPC-5和TRPC-7；免疫印迹法进一步表明，在大鼠远端PVSMC有TRPC-1、TRPC-4和TRPC-6的蛋白表达，表达强弱顺序为TRPC-6〉TRPC-1〉TRPC-4。结论：大鼠远端PVSMC主要表达TRPC-1和TRPC-6，其可能与肺静脉平滑肌细胞内Ca^2＋浓度调节有关。; 彭公永蒋永亮胡锦兴洪城周玉民胡国平田佳

胶原酶消化法培养大鼠远端肺静脉平滑肌细胞: 2010年; 目的：探索大鼠发病机制远端肺静脉平滑肌细胞（PVSMC）的原代培养方法,为体外研究肺血管疾病提供实验材料.方法：采用显微操作和Ⅰ型胶原酶消化法原代培养大鼠远端PVSMC,对培养的细胞进行形态学观察、平滑肌α-actin免疫荧光染色鉴定,并用激光扫描共聚焦显微镜计算纯度.结果：镜下培养的细胞呈典型的＂峰-谷＂状生长,平滑肌细胞特异的平滑肌α-actin蛋白阳性表达,细胞纯度达98.5%.结论：用胶原酶消化法能够原代培养大鼠远端PVSMC,所获细胞数量多、纯度高.; 彭公永周玉民胡国平蒋永亮田佳; 关键词：平滑肌细胞原代培养肺静脉

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蒋永亮