蔡毅君
- 作品数：4 被引量：18H指数：3
- 供职机构：厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金教育部科学技术研究重大项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组慢病毒对不同哺乳动物细胞基因转移及表达效率的研究被引量：4
- 2008年
- 慢病毒是一种具有独特优点和巨大应用潜力的哺乳动物细胞基因转移载体,我们对慢病毒载体对不同哺乳动物细胞的基因转移及表达效率进行了平行比较研究.应用第三代重组慢病毒系统构建了携带CMV启动子-EGFP报告基因表达元件的重组慢病毒Lenti-EGFP,分别对多种不同哺乳动物细胞进行转导实验,在转导48 h后应用流式细胞仪检测报告基因在不同细胞株中的转移及表达效率.我们共使用了29种哺乳动物细胞株,包括14种人类组织细胞,5种猴组织细胞,9种鼠组织细胞,1种兔组织细胞.结果显示,重组慢病毒具有良好的基因转移能力,可有效进入多数哺乳动物细胞,对不同种属来源的细胞没有表现出特别的偏嗜性,但对贴壁培养细胞的基因转移效率明显高于对悬浮培养细胞.本研究为重组慢病毒系统的合理使用提供了基础.
- 张雅丽程通蔡毅君张涛魏丽华杨炳春郑舟张军夏宁邵
- 关键词：慢病毒绿色荧光蛋白哺乳动物细胞
- 靶向HIV-1 vif的高效人工miRNA的构建及慢病毒介导的体外抗病毒研究被引量：8
- 2010年
- RNAi在HIV-1的治疗研究中得到了广泛的应用,构建高效并且安全的RNAi抗病毒元件是开展相关研究的基础。vif37是以前的研究中筛选获得的靶向HIV-1 vif的高抑制效率兼具保守性的RNAi靶点。miRNA在抑制效率和启动子的选择上比常用的shRNA具有优势。本研究探索以人工miRNA结构引发vif37靶点对应的RNAi。本研究以天然的miR-155前体为骨架,采用步移的方式设计了3个靶向vif37的人工miRNA,以RNA聚合酶Ⅱ类启动子指导表达。miRNA表达质粒和HIV-1的感染性克隆pNL4-3共转染的结果显示,3个人工miR-NA中只有miR-vif37H具有抑制效果,效率与shRNA-vif37相当。与携带靶序列的荧光素酶报告质粒共转染实验证明miR-vif37H具有良好的抑制特异性。用表达miR-vif37H的重组慢病毒转导HIV-1的敏感细胞MT-4,克隆化后获得稳定表达miR-vif37H的细胞株MT-4-miR37H,该细胞可以有效抑制HIV-1的体外复制。实时RT-PCR检测结果显示,与shRNA-vif37相比,miR-vif37H的表达水平明显下降,安全性更好。进一步的实时RT-PCR检测结果还显示,miR-vif37H在细胞内的稳定表达不会影响内源代表性miRNA(miR-181和miR-16)的加工以及干扰素应答相关基因Stat1的mRNA水平。miR-vif37H是一个特异的高效RNAi元件,为vif37靶点的进一步应用研究奠定了基础。
- 张涛程通魏丽华张雅丽王颖彬蔡毅君张军夏宁邵
- 关键词：RNA干扰HIV-1VIF
- 靶向HIV-1 vif的高效siRNA的筛选及慢病毒介导的体外抗病毒研究被引量：5
- 2008年
- RNAi技术在艾滋病治疗研究中已展现出巨大的潜力,兼具高效抑制特性和保守性的siRNA靶位是其获得成功应用的重要基础。本研究选择以HIV-1 vif基因为靶区筛选高效保守的RNAi序列,共选择设计了30个识别不同位点的siRNA序列,以pSUPER为载体构建了相应的shRNA表达质粒。通过与pNL4-3质粒在293FT细胞中进行共转染抑制实验,以及对初筛获得的高效序列进行保守性分析显示siRNA-vif37序列具有高效抑制效率和较好的保守性特征。通过与pGL3-vif报告质粒的共转染实验证明siRNA-vif37具有vif基因抑制特异性。带有shRNA-vif37表达元件的重组慢病毒转导后的MT-4细胞在HIV-1NL4-3体外攻毒实验中可显示出较有效的抑制病毒复制的能力,本研究进一步对转导后细胞进行克隆化筛选,获得稳定整合shRNA-vif37表达元件的MT-4-vif37细胞克隆,该细胞具有显著的抑制病毒复制的能力,在高攻毒剂量下仍可获得良好的抑制效果。本研究为进一步应用RNAi技术进行新型艾滋病治疗方法研究提供了重要基础。
- 张涛程通张雅丽魏丽华蔡毅君张军朱桦韩家淮夏宁邵
- 关键词：HIV-1VIF重组慢病毒
- 肠道病毒分离鉴定及EV71快速高通量中和实验方法的建立
- 手足口病是儿童常见病,多种肠道病毒均可引起手足口病,其中以肠道病毒71型/(EV71/)为我国近几年手足口病的主要病原体。EV71导致的手足口病较常引起中枢神经系统损伤,重症患者比例以及病死率均明显高于其他肠道病毒,具有...
- 蔡毅君
- 关键词：人肠道病毒71型酶联免疫斑点法动物模型
- 文献传递
