赵巧香
- 作品数：14 被引量：20H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金黑龙江省自然科学基金大庆高新区创新基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 密码子优化的人成纤维细胞生长因子-21在毕赤酵母中的表达被引量：6
- 2010年
- 目的在毕赤酵母中表达密码子优化的人成纤维细胞生长因子-21(hFGF-21),为探讨hFGF-21在糖尿病治疗方面的作用奠定基础。方法经密码子优化合成hFGF-21基因,构建表达载体pPICZαA-hFGF-21,电转化毕赤酵母GS115,斑点免疫印迹法筛选工程菌株,甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物,并对诱导条件进行优化。结果重组表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确。筛选出5株阳性菌株,诱导上清经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约为25000的目的蛋白条带,目的蛋白的表达量约为6μg/L。Westernblot显示该蛋白具有良好的反应原性。诱导96h和培养液pH值为4.0时,目的蛋白的表达量最高,甲醇浓度对表达量无影响。结论已成功构建了密码子优化的hFGF-21真核表达载体,并在毕赤酵母GS115中分泌表达了hFGF-21。
- 马忠辉赵巧香高新王诗鸿宋海峰杨焕民
- 关键词：毕赤酵母电转化
- 重组BALB/C鼠冷诱导RNA结合蛋白CIRP多克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
- 2009年
- 冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)是第一种在哺乳动物细胞中被发现的冷休克蛋白,伴随着细胞冷应激过程过量表达.为进一步研究冷诱导RNA结合蛋白CIRP的生物学功能,构建重组BALB/C鼠CIRP的原核表达载体,重组BALB/C鼠CIRP蛋白经NI-NTA亲和树脂纯化后免疫獭兔制备抗CIRP多克隆抗体,以间接ELISA和Western blot检测抗体效价和抗原特异性.本实验成功构建了CIRP的原核表达载体,在E. coli XL-1-blue得到了高效表达,利用原核表达包涵体蛋白免疫獭兔获得了高效价的CIRP多克隆抗体,该抗体能识别肝脏和睾丸中天然的CIRP蛋白.
- 赵巧香张秀玲纪丽丽金福厚计红杨焕民李士泽
- 关键词：多克隆抗体基因重组
- 冷诱导RNA结合蛋白的生物学功能研究进展被引量：6
- 2009年
- 冷诱导RNA结合蛋白(cold inducible RNA-binding protein,CIRP)是在哺乳动物细胞中发现的首种冷应激或冷休克蛋白,伴随冷应激过程过量表达。研究证明,CIRP无论是在核酸结构上,还是在氨基酸结构上都是高度保守的,具有较高的同源性,其细胞定位和生理功能可能具有组织特异性;CIRP不仅具有介导冷诱导的细胞生长抑制作用,而且可能参与人和动物渗透应激、紫外线照射应激、缺氧应激、生殖、神经发育与调节、胚胎发育、肿瘤发生,以及动物冬眠等多种生理过程。因此,深入开展CIRP的功能性研究和应用性研究具有重要的基础研究价值和临床医学应用前景。
- 李士泽金福厚赵巧香尹位杨焕民
- 关键词：生物学功能冷应激
- 日粮中添加抗氧化剂对冷暴露肉仔鸡的保护作用研究
- 氧自由基可引发生物膜多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应,损伤生物膜结构及功能。抗氧化剂抑制畜禽体内有害自由基的过量产生,有效地缓解应激对畜禽的损伤。谷氨酰胺和 L-肉碱都具有抗氧化功能。本试验旨在研究谷氨酰胺和 L-肉碱对...
- 申凤华李士泽高福久贾海燕金福厚赵巧香尹位
- 文献传递
- 谷氨酰胺与L-肉碱对低温下肉仔鸡血清FT3、FT4及皮质醇含量的影响
- 动物在应激过程中分解自身组织生成能量,并定向地用于特定组织,同时减少对其它组织的能量供应。这个能量产生、分配和利用的过程受激素的调控。本试验通过检测仔鸡血清 FT、FT及皮质醇(Cor.)含量的变化,研究谷氨酰胺与 L-...
- 申凤华李士泽高福久贾海燕金福厚赵巧香尹位
- 文献传递
- BALB/C鼠睾丸组织中冷诱导RNA结合蛋白的cDNA克隆与序列分析(英文)被引量：3
- 2009年
- 冷诱导RNA结合蛋白(Cold inducible RNA-binding protein,CIRP)在多种冷应激细胞(包括重组中国仓鼠卵巢细胞)中被发现.迄今为止,冷应激对活体生物基因表达的影响还未见报道.和细胞相比,生物体具有更加复杂的冷应激调节机制.本研究以冷处理的BALB/C鼠为实验动物,从其睾丸组织中克隆出了CIRP的cDNA.结果表明,CIRP在生物体中能够被低温诱导,可能防止生物体遭受冷损伤.根据克隆的cDNA所推测的氨基酸序列与GenBank上公布的小鼠、大鼠、人类、牛蛙、美西螈、非洲爪蟾胚胎细胞和卵母细胞的CIRP氨基酸序列同源性分别为100%、99.4%、95.5%、67.4%、58.4%、76.9%和79.1%.这表明CIRP在生物进化过程中是高度保守的,可能具有多种生理功能.因此,这一研究将为探索人类和动物冷应激分子机制创立系统试验模型和奠定新的实践基础.
- 金福厚庞岩李士泽杨焕民计红赵巧香尹位
- 关键词：CDNA冷应激
- 牛胎儿成纤维细胞的培养及性别鉴定被引量：5
- 2009年
- 为了探索和建立牛胎儿成纤维细胞体外分离培养及性别鉴定的技术方法，试验取自怀孕40d的奶牛胎儿耳组织用组织块贴附法进行原代培养和传代培养，用倒置相差显微镜观察成纤维细胞形态；根据牛Y染色体上的性别决定区域（SRY）基因序列设计合成1对PCR引物作为性别鉴定引物，同时根据牛403bp的β-珠蛋白基因序列设计1对引物作为内参照引物，建立PCR反应体系进行性别鉴定。结果表明：分离的成纤维细胞可在体外快速贴壁生长、增殖；阳性对照和第1牛胎儿成纤维细胞系PCR鉴定扩增得到255bp的片段和403bp的β-珠蛋白基因片段，第2，3牛胎儿成纤维细胞系和母牛血液PCR扩增只得到403bp的β-珠蛋白基因片段，通过电泳证明PCR产物255bp的片段为SRY基因片段，说明有255bp扩增带的细胞系为雄性；无255bp扩增带的细胞系为雌性。结果说明该方法所获得的牛胎儿成纤维细胞可在体外稳定培养，利用PCR鉴定牛胎儿性别具有简单、快速、准确的特点，可应用于基因克隆动物研究中体细胞系的早期性别鉴定。
- 马忠辉赵巧香杨焕民
- 关键词：成纤维细胞细胞分离培养性别鉴定
- 重组小鼠冷诱导RNA结合蛋白单克隆抗体的制备
- 冷诱导RNA结合蛋白(Cold inducible RNA-binding Protein,CIRP)是第一种在哺乳动物细胞中发现的冷休克蛋白。在许多进化过程中发挥重要的作用,如神经系统发育、胚胎发育等;此外,CIRP还...
- 赵巧香
- 关键词：冷应激单克隆抗体
- 文献传递
- BALB/C鼠冷诱导RNA结合蛋白的原核表达、纯化及其单克隆抗体的制备
- 2010年
- 为了获得冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)的单克隆抗体,通过RT-PCR方法从冷处理BALB/C小鼠睾丸的总RNA中扩增获得CIRP基因序列,克隆至pGEM-T载体,获得重组质粒pGEM-CIRP,并进行序列测定。将测序正确的CIRP序列插入质粒pQE-30-Xa,构建表达载体pQE-30-CIRP并转化E.coliM15,IPTG诱导后SDS-PAGE分析表明CIRP基因在大肠杆菌中获得高效表达,可溶性分析表明CIRP融合蛋白以包涵体形式表达。采用Ni-NTA亲和层析、电洗脱纯化融合蛋白CIRP,将纯化的蛋白免疫BALB/C小鼠,三次免疫后,间接ELISA测定小鼠效价,效价为1:105,采用杂交瘤技术融合,用间接ELISA法、有限稀释法筛选阳性杂交瘤细胞,通过Western blot对McAb特异性进行鉴定,利用间接ELISA方法对McAb的Ig亚类(型)、杂交瘤细胞上清、腹水效价进行测定。结果获得了1A6、2D3、3C5及4C44株稳定分泌CIRPMcAb的杂交瘤细胞株,1A6、3C5、4C4产生的单克隆抗体亚类均为IgG2b,2D3产生的单抗亚类为IgG3,轻链均属κ链。4株单克隆细胞上清效价均在1:103以上,腹水效价均达1:107以上。Westernblot分析4株单抗均能与重组蛋白CIRP特异性结合,与空载体对照没有反应。以3C5细胞株的腹水为一抗,检测冷应激小鼠多种组织中天然CIRP蛋白表达,结果显示3C5细胞腹水能识别心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸等多种组织中天然CIRP,并与能之与结合。这证明该抗体具有良好特异性和结合活性,制备的单克隆抗体可以用于深入开展CIRP的功能性和应用性研究。
- 李士泽赵巧香辛九庆赵雅楠尹位杨焕民计红
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 谷氨酰胺与L-肉碱对低温下肉仔鸡生长性能及部分血液生化指标的影响
- 温度是当前养禽业的重要限制因素,特别是在高纬度地区的冬季进行育雏,往往育雏温度达不到适宜温度,雏鸡常常受到冷应激的刺激,从而导致成活率低,生长速度慢,影响生产性能,而提高温度需耗较多能源。本研究旨在从生长性能、血液生化指...
- 申凤华李士泽贾海燕金福厚高福久赵巧香尹位
- 文献传递
