邓艳春
- 作品数：19 被引量：24H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学化学工程更多>>
- 重组生产甲状旁腺激素衍生物的方法及所用表达载体
- 本发明涉及一种高效重组生产甲状旁腺激素衍生物的方法及所用表达载体。更具体地，本发明涉及通过将人甲状旁腺激素(PTH)(1－34)与缩短型配体蛋白的融合基因进行表达而高效生产人PTH(1－34)的方法及所得产物，本发明还涉...
- 陈松森狄旭刘长征张艳丽邓艳春
- 文献传递
- 人甲状旁腺素(1-34)衍生物在大肠杆菌中表达、纯化及其生物学活性被引量：4
- 2005年
- 为研究Gly hPTH(1 34)衍生物的生物学活性 ,用重叠PCR方法合成编码hPTH(1 34)的DNA片段 ,克隆到融合表达载体pGEX 2T的缩短型谷胱甘肽转移酶基因GST6 9△的 3′末端 ,构建正确读码框架的融合基因 .在两个基因间引入蛋白质羟胺切割位点序列 ,转入E .coliJM10 9中 ,IPTG诱导表达 .该融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 2 0 %以上 ,主要以包涵体形式存在 ,盐酸羟胺切割表达产物 .分析表明 ,80 %左右的融合蛋白被裂解为GST6 9△和Gly hPTH(1 34) .经分子筛柱层析和反相层析分离纯化获得重组Gly hPTH(1 34)衍生物 ,纯度达 98%以上 ,回收率约为 10mg/升发酵液 ,分子量为 4 177,等电点 (pI)为 8 4 0 ,N端 16个氨基酸 ,除第一个为甘氨酸外 ,其余与天然hPTH(1 34)序列一致 .Western印迹结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物具有hPTH(1 34)的免疫学活性 .体外活性测定结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物能刺激人成骨细胞HOSTE85增殖、增加细胞内胶原合成、ALP活性增高和cAMP生成量增加 ,并呈量效关系 ,提示它具有与化学合成的hPTH(1 34)相同的生物学活性 ,N端多一个Gly对其活性无明显影响 .
- 狄旭刘长征陈松森张艳丽邓艳春孙兰杨京
- 关键词：纯化生物学活性
- 人造血增效因子C末端结构与其趋化活性的关系
- 2008年
- 目的研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系。方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在E.coliBL21(DE3)中进行表达。hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化,融合蛋白GST-hHSF1-5 3经亲和层析、肠激酶(EK)酶切和凝胶过滤法进行分离纯化。hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定,用飞行时间质谱法测定其相对分子质量,用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞(PMN)趋化活性。结果测序证实合成的hHSF 1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致,hHSF1-66/1-59表达量占菌体总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在。GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式存在。3种目的蛋白纯度均达95%左右,它们的相对分子质量分别为7206.0、6401.2和5697.3 D,均具有全长hHSF的免疫学活性。与全长hHSF相比,hHSF1-66(缺失3个氨基酸)对人PMN最大趋化活性(CI)(50 nmol/L)没有明显差异,hHSF1-59(缺失10个氨基酸)和hHSF1-53(缺失16个氨基酸,α螺旋完全缺失)最大趋化活性分别下降34.3%和70.5%。结论hHSF C末端结构,特别是α螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用。
- 罗丝杨克恭刘长征邓艳春苏林孔燕陈松森
- 关键词：趋化活性
- 人干细胞因子受体膜外区1～3免疫球蛋白样结构域的表达、纯化及活性被引量：2
- 2006年
- 目的 在原核和真核细胞中表达人干细胞因子受体（c-Kit）配体结合区膜外N端1～3免疫球蛋白样结构域（c-Kit/Ig1～3）,研究其配体结合活性.方法 采用重叠延伸PCR定点诱变法合成c-Kit/Ig1～3双突变片段（c-Kit/Ig1～3DM）,构建pET16b-c-Kit/Ig1～3DM表达质粒,转化E.coli BL21（DE3）诱导表达,稀释复性,镍柱纯化.将C端添加组氨酸标签的c-Kit/Ig1～3基因克隆入真核表达载体pEAK12中,转染HEK293 ET细胞构建c-kit/Ig1～3高效表达细胞株,从细胞培养上清中使用镍金属螯合柱收集纯化蛋白.His-tag pull-down和酶联免疫结合实验检测融合蛋白配体结合活性.结果 在大肠杆菌中c-Kit/Ig1～3^DM以包涵体形式表达,复性后配体结合活性很低.在HEK293 ET细胞中筛选到2个高效表达c-Kit/Ig1～3的细胞株,上清表达量为2μg/ml,融合蛋白相对分子质量为58 000;受体配体结合实验显示真核表达的c-Kit/Ig1～3有明显的干细胞因子特异结合活性,解离常数Kd值为9.39 nmol/L.结论获得了具有较高配体结合活性的c-Kit/Ig1～3融合蛋白.
- 苏林刘长征邓艳春杨克恭梁植权陈松森
- 关键词：HIS-TAG
- 用精子头部银染法观察几种雄性抗生育因子的作用被引量：2
- 1992年
- 用精子头部银染法,观察雷公藤多甙及其单体T4、T13、棉酚和微波透热睾丸等抗雄性生育因子,对精子头部异常发生率的影响,以评价其对精子头部异常发生率和对生殖细胞的可能作用。实验表明,雷公藤多甙,单体T13、微波透热睾丸可使精子头部异常发生率明显增加;而棉酚及雷公藤单体T4则无明显增加。对睾丸滴片及睾丸切片的观察也与上述结果相符,表明雷公藤多甙、雷公藤单体T13、微波透热睾丸可能导致生殖细胞产生遗传效应,不宜发展为男性抗生育因子。而棉酚、雷公藤单体T4(雷藤氯内酯醇)则无明显生殖细胞的遗传效应,值得深入研究。
- 叶惟三邓艳春黄玉芩韩玉华薛社普
- 关键词：诱变雷公藤多甙
- 将科研能力培养引入组织化学实验教学被引量：2
- 2017年
- 目的尝试将科研训练引入组织化学实验教学,培养研究生的科研能力。方法在注重训练学生基本实验操作的同时,大幅增加课前文献阅读、实验方案设计和课后总结、实验报告撰写等科研训练相关内容。2014—2016级共3个年级选课研究生参与教改;通过课堂作业、问卷调查、理论考试、实验操作考查等多种形式综合评估效果。结果评估结果显示学生对课程满意度很高、学习主动性有明显提高,分析解决问题、团队协作等多方面能力得到锻炼。结论从科研实际需求出发,将科研能力培养渗透到组织化学实验的各个环节,为学生未来科研工作打下良好基础,同时也提高了组织化学课程的教学质量。
- 仇文颖徐园园邓艳春陈咏梅钱晓菁
- 关键词：教学改革组织化学
- 一种人FL多核苷酸及其与人GM－CSF联合基因治疗恶性肿瘤的用途
- 本发明涉及生物医药领域。具体而言，本发明涉及编码受体蛋白flt3的配体(FL)的多核苷酸、其编码的蛋白、其生产方法及其用途。本发明还涉及人FL与人GM-CSF联合基因的联合表达及二者联合表达用于制备治疗恶性肿瘤的药物中的...
- 张艳丽陈松森杨克恭邓艳春王亚栋
- 文献传递
- 平滑肌细胞膜的钙激活Cl^-通道被引量：2
- 1999年
- 在多种平滑肌上都已发现Ｃａ２＋激活Ｃｌ－通道。胞内游离钙升高是钙激活氯通道的必要条件。多种刺激剂诱导胞内钙库释放钙而同时激活钾通道［ＩＫ（Ｃａ）］和氯通道［ＩＣｌ（Ｃａ）］。平滑肌细胞上激活ＩＣｌ（Ｃａ）的［Ｃａ２＋］ｉ阈值因动物种属和组织差异而不同。用荧光指示剂直接测定大鼠门静脉平滑肌细胞上的［Ｃａ２＋］ｉ得出激活ＩＫ（Ｃａ）的最小［Ｃａ２＋］ｉ应大于７０～８０μｍｏｌ·Ｌ－１，比激活ＩＣｌ（Ｃａ）的最低浓度１８０μｍｏｌ·Ｌ－１要小，因此认为ＩＫ（Ｃａ）要比ＩＣｌ（Ｃａ）对［Ｃａ２＋］ｉ更敏感。胞外钙通过电压依赖性钙通道进入胞内，［Ｃａ２＋］ｉ升高也能激活氯通道。Ｇ蛋白与某些受体偶联激活胞内第二信使ＩＰ３而激活氯通道。钙激活氯通道的电导很小，从全细胞电流分析应小于１０ｐＳ。平滑肌细胞上的氯平衡电位（ＥＣｌ）正于静息膜电位，因此Ｃｌ－通道开放Ｃｌ－外流驱动膜电位向ＥＣｌ方向靠近，形成膜的去极化。Ｃａ２＋激活Ｃｌ－通道开放使细胞膜去极化并引起细胞的兴奋，这种通道在由激素或神经递质引起平滑肌细胞的兴奋过程中起重要作用。
- 王泽君于德洁邓艳春鲍光宏
- 关键词：平滑肌细胞钙激活氯通道
- 一种生产人造血增效因子的制备方法及所用的核苷酸序列
- 本发明涉及生物医药领域。具体而言，本发明涉及一种生产人造血增效因子的制备方法，本发明还涉及所述的方法中使用的特异的核苷酸序列。
- 陈松森齐春梅杨克恭张艳丽罗丝邓艳春
- 文献传递
- 一种人FL多核苷酸及其与人GM－CSF联合基因治疗恶性肿瘤的用途
- 本发明涉及生物医药领域。具体而言，本发明涉及编码受体蛋白flt3的配体(FL)的多核苷酸、其编码的蛋白、其生产方法及其用途。本发明还涉及人FL与人GM－CSF联合基因的联合表达及二者联合表达用于制备治疗恶性肿瘤的药物中的...
- 张艳丽陈松森杨克恭邓艳春王亚栋
- 文献传递
