钱俊杰
- 作品数：12 被引量：55H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Skp2参与HeLa细胞G_2/M周期检查点的调控被引量：5
- 2005年
- 具癌基因特性的Skp2在大多数肿瘤组织和肿瘤细胞中异常高表达,它作为SCFSkp2复合物的底物识别亚基调控p27KIP蛋白的稳定性而促进细胞G1/S期转换.为进一步明确Skp2与G2/M周期检查点的关系,在HeLa细胞中过表达Skp2以及通过反义寡核苷酸抑制Skp2表达.结果发现:Skp2能促进细胞周期运转,表现为S期细胞增多和G2/M期细胞减少,其中F-box结构域具有重要的功能意义;反义寡核苷酸抑制Skp2表达后,HeLa细胞发生显著的G2/M期阻滞;MTT检测结果表明,400nmol/L的Skp2的反义寡核苷酸能明显抑制HeLa细胞的增殖活性;Western印迹结果表明,HeLa细胞中Skp2可能通过负调控p21WAF的稳定性来参与G2/M检查点调控,这在用放线菌素D处理HeLa细胞的实验中得到验证.这些结果初步揭示了Skp2参与HeLa细胞G2/M周期检查点调控的分子机制.
- 钱俊杰孙国敬孟祥兵宋宜梅柱中刘斌董燕孙志贤
- 关键词：SKP2
- 人外周血活化淋巴细胞中Survivin蛋白表达的分子机制研究被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨活化淋巴细胞中Survivin蛋白诱导表达的信号转导通路、分子级联反应和生物效应,揭示Survivin蛋白表达调控的分子机制。方法:用PHA和rhIL-2刺激培养人外周血单个核细胞,附加JAK抑制剂—AG490的处理,以Western blot检测Survivin和相关蛋白的表达;以流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞分裂增殖。结果:刺激培养的细胞按照时序先后出现的分子和细胞学反应为:Stat3和Stat5磷酸化→CyclinD3、CyclinE蛋白水平上调→细胞进入S期及Survivin蛋白起始表达→细胞有丝分裂及Survivin蛋白表达水平增加。AG490对于上述反应均呈现明显的抑制作用,但对周期抑制蛋白P21和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平没有影响。结论:Survivin蛋白的表达依赖JAK-Stat信号转导通路的早期活化,通过上调CyclinD3和CyclinE周期蛋白水平,启动细胞周期的运行,诱导Survivin蛋白的周期时相依赖性表达,参与细胞有丝分裂与增殖。
- 董燕梅柱中钱俊杰宋宜田宝磊刘斌孙志贤
- 关键词：SURVIVIN蛋白活化淋巴细胞信号转导
- 蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞凋亡前G_2/M期阻滞及机制被引量：18
- 2004年
- 背景和目的:蛋白酶体(proteasome)抑制剂能够诱导多种肿瘤细胞凋亡,是一种潜在的有应用前景的抗肿瘤剂。本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-Leu-Leu-CHO)诱导白血病细胞HL-60凋亡和G2/M期阻滞的机制。方法:采用荧光显微镜观察、流式细胞术和免疫印迹研究测定MG132诱导HL-60细胞凋亡和周期阻滞及机制。结果:2μmol/L的MG132能够有效地诱导HL-60细胞凋亡,用药后24h就显现有细胞凋亡;在MG132诱导HL-60细胞凋亡出现之前有一个明显的G2/M期阻滞,加MG132后12h时G2/M期时相百分比为63.42±2.02;24h时加MG132组细胞凋亡为16.67±1.48,与对照组G2/M期时相百分比为7.29±3.01及细胞凋亡为0相比,两者之间有显著性差别(P<0.01);咖啡因CAF能够减少MG132诱导HL-60细胞出现的G2/M期阻滞,同时也减少凋亡细胞的比例;细胞周期检查点的负调控因子p21waf/cip1蛋白在加MG132处理后3h有明显的表达,但并未能检测到p53和p27蛋白。结论:MG132诱导HL-60细胞凋亡之前有一个明显的G2/M期阻滞,p21蛋白表达明显上调提示:是p21waf/cip1而不是p53或其同源蛋白参与了其中的调控。
- 孙国敬钱俊杰孟祥兵宋宜张枫梅柱中董燕孙志贤
- 关键词：HL-60细胞G2/M期阻滞细胞凋亡蛋白酶体抑制剂P21蛋白负调控因子
- 组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导H eLa细胞p21^(WAF1/CIP1)表达的分子机制研究被引量：2
- 2005年
- 目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HD Is)诱导肿瘤细胞产生周期阻滞以及诱导p21WAF1/C IP1表达的分子机制。方法:以人宫颈癌HeLa细胞为模型,用曲古抑菌素A(TSA)处理HeLa细胞,通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡,通过W estern印迹及RT-PCR检测周期相关分子的蛋白及mRNA的表达;并构建TSA靶分子启动子区的荧光素酶报告质粒,进一步检测TSA的主要作用位点,寻找相关作用途径。结果与结论:TSA可诱导HeLa细胞发生周期阻滞,并呈现明显的剂量和时间依赖关系,加大用药剂量及延长用药时间可诱导凋亡。TSA可显著诱导p21WAF1/C IP1的表达,表现为转录水平的调节,其变化可以指示周期阻滞的程度。p21WAF1/C IP1启动子区3′端是TSA作用的主要位点,同样被TSA诱导表达增加的p53很可能通过与其效应元件的结合而使TSA诱导p21WAF1/C IP1表达的总效果增强。
- 赵国伟宋宜董燕钱俊杰梅柱中田宝磊张应玖孙志贤
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A细胞周期阻滞
- PKA磷酸化p21^(WAF)后对其泛素化修饰和稳定性的影响
- 2005年
- 目的:探索p21被蛋白激酶A(PKA)磷酸化修饰后对其泛素化修饰和稳定性的影响。方法:构建p21可能磷酸化位点的突变体p21 T145A,观察PKA体外磷酸化修饰p21;W estern印迹分析PKA特异性抑制剂H89对p21稳定性的影响;通过免疫沉淀分析H89对p21泛素化修饰的影响以及p21 Thr 145突变前后和Skp2结合能力的变化。结果:PKA体外磷酸化修饰p21的Thr 145;PKA特异性抑制剂H89能够提高p21的稳定性并抑制p21的泛素化修饰;野生型(w ild)p21比p21 T145A结合Skp2的能力强。结论:PKA磷酸化修饰p21的Thr145后导致其结合E3连接酶结合亚基Skp2的能力增强,从而促进p21的泛素化修饰,导致p21稳定性的降低。
- 钱俊杰孙国敬宋宜梅柱中董燕刘斌孙志贤
- 关键词：蛋白激酶A泛素化修饰SKP2细胞周期蛋白质类
- 组蛋白去乙酰化酶抑制剂的构效关系研究进展被引量：9
- 2006年
- 组蛋白去乙酰化酶介导核小体结构改变和调节基因表达,参与细胞周期进程和分化,并且与多种疾病如癌症、急性髓性白血病、病毒和感染等的发生与发展有关,研究其抑制剂对上述疾病的治疗具有重要意义。组蛋白去乙酰化酶抑制剂按结构类型分为:异羟肟酸类、羧酸类、苯甲酰胺类、亲电酮类、环肽类等。本文从结构与活性关系的角度综述了近年来组蛋白去乙酰化酶抑制剂的构效关系研究。
- 周玉美王林钱俊杰孙志贤
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶抑制剂构效关系
- RNA干涉抑制存活素表达并诱导HeLa S3细胞凋亡的研究被引量：2
- 2005年
- 选择3个(S1,S2,S3)靶向存活素基因的siRNA序列,构建相应的RNA干涉载体pTet-U6-S1,pTet-U6-S2,pTet-U6-S3,将它们分别转染HeLa S3细胞,采用RT-PCR和W estern印迹检测分析转染对HeLa S3细胞内源存活素表达的影响,结果表明,针对存活素3’端非编码区序列的干涉载体pTet-U6-S3转染细胞后,存活素的mRNA水平和蛋白水平均明显下调,抑制水平高于S1序列.与对照相比,S1,S2和S3片段对存活素mRNA的抑制率分别是20%,12.5%和40%,对存活素蛋白的抑制率分别是39.2%,17.0%和58.6%.流式细胞术检测结果表明,抑制存活素表达后,HeLa S3细胞凋亡比例显著提高.
- 王瑞瑛梅柱中董燕钱俊杰赵国伟田宝磊董申罗贵民孙志贤
- 关键词：存活素RNA干涉凋亡HELA
- HeLa细胞中Skp2的表达调控p21WAFCIP1稳定性被引量：6
- 2004年
- 泛素 蛋白酶体抑制剂MG 132处理的HeLa和SaoS 2细胞中 ,低表达的p2 1WAF CIP1受泛素 蛋白酶体通路调控 .为探讨肿瘤细胞中高表达的E3连接酶底物结合亚基 Skp2和低表达的p2 1WAF CIP1之间的关系 ,在HeLa细胞中转染Skp2的反义寡核苷酸后 ,p2 1表达水平明显升高 .同时 ,相对于转染空载体和Skp2ΔF(Skp2的F box缺失突变体 )的真核表达载体 ,转染全长Skp2的HeLa细胞中 ,p2 1表达水平显著下降 ,说明肿瘤细胞中Skp2调节p2 1的稳定性 ,并且这种调控作用依赖于Skp2蛋白中的F box结构 .免疫荧光结果表明 ,Skp2和p2 1共定位于细胞核 ,这为两者间的相互作用提供了前提 ;体内相互免疫共沉淀结果表明 ,p2 1和其它SCFSkp2 的底物一样与Skp2直接结合 ,并且它们之间的结合区不在F box结构域 ,这一结果在体外的GST
- 钱俊杰孙国敬孟祥兵宋宜梅柱中刘斌董燕孙志贤
- 关键词：SKP2泛素-蛋白酶体通路
- 亚细胞蛋白质组学技术分析MG132诱导HL-60细胞G_2/M期阻滞的分子机制被引量：5
- 2006年
- 背景与目的:蛋白酶体抑制剂能够诱导多种肿瘤细胞凋亡,是一种有应用前景的抗肿瘤制剂。本研究通过对蛋白酶体抑制剂——MG132诱导G2/M期阻滞的HL-60细胞核蛋白进行蛋白质组学分析,探索参与HL-60细胞G2/M期阻滞调控的相关蛋白。方法:流式细胞术分析MG132处理的HL-60细胞周期,选取合适的时间点,提取细胞核,光镜和Westernblot检测细胞核纯度,裂解制样,通过二维电泳和MALDI-TOF-TOF串联质谱分析,鉴定表达显著差异的细胞核蛋白。结果:HL-60细胞在被2.5μmol/LMG132诱导凋亡之前8h,有明显的G2/M期阻滞发生;提取阻滞发生时和阻滞发生前的HL-60细胞核蛋白,二维电泳分析获得23个差异表达的蛋白点,质谱鉴定了8个核蛋白。结论:质谱鉴定的eIF5A、mRNA前体剪接因子等蛋白可能参与HL-60细胞的G2/M周期阻滞调控,为研究蛋白酶体抑制剂诱导白血病细胞周期阻滞及凋亡的分子机制提供了一些线索。
- 钱俊杰应万涛孙国敬宋宜刘斌董燕钱小红孙志贤
- 关键词：蛋白酶体抑制剂HL-60细胞细胞周期蛋白质组
- 电离辐射造成的DNA损伤反应中PML调控p53凋亡信号转导通路机制的研究
- 早幼粒细胞白血病蛋白PML(promyelocytic leukemia)在Fas、TNF、 IFN、神经酰胺、电离辐射等多种因素诱发的细胞凋亡反应中均发挥着关键性的调控作用,它借助其N末端的RBCC结构募集将近50种分...
- 田宝磊宋宜钱俊杰董燕刘华刘斌瞿文全刘继来祝晓梅孙志贤
- 关键词：P53MDM2电离辐射凋亡
- 文献传递
