钱坤
- 作品数：33 被引量：140H指数：6
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学化学工程更多>>
- 无动物源性培养系统对人胚胎干细胞生长的支持作用
- 2009年
- 目的:建立完全非动物源性培养系统,为人胚胎干细胞定向诱导为各系统细胞应用于临床、消除动物源性污染打下基础。方法:分别采用人包皮成纤维细胞、胎儿肌肉细胞及人子宫内膜基质细胞为饲养层细胞,以血清替代品取代动物血清,支持人胚胎干细胞生长,观察其增殖和分化情况。结果:人包皮成纤维细胞、胎儿肌肉细胞均能很好支持人胚胎干细胞生长增殖,并保持90%左右未分化表型:AKP染色强阳性,SSEA-4、TRA-1-81表达强阳性,可见OCT-4 mRNA表达,核型正常。人子宫内膜基质细胞不能支持hESC的生长。结论:完全可以使用非动物源性培养系统支持人胚胎干细胞增殖。
- 钱坤陈红朱桂金
- 关键词：胚胎干细胞成纤维细胞肌肉细胞子宫内膜细胞
- 亚低温干预联合青皮升压对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及相关机制探讨被引量：2
- 2007年
- 目的观察中药青皮联合亚低温干预对大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的保护作用及对脑梗死灶周边葡萄糖利用率(LCGU)的影响,同时探讨其相关的脑保护机制。方法将64只实验大鼠随机分为对照组、青皮升压组、亚低温组及亚低温+升压组。将上述4组大鼠制成局灶性脑缺血再灌注模型,其中青皮升压组于缺血再灌注后给予升压干预,亚低温组于缺血再灌注后给予亚低温治疗,亚低温+升压组于缺血再灌注后同时给予升压及亚低温处理,对照组则未给予特殊处理。观察各组实验大鼠神经功能缺损评分、脑梗死灶体积及缺血侧大脑半球梗死灶周边区LCGU水平的变化情况。结果青皮升压组、亚低温组及亚低温+升压组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死灶体积、LCGU水平均明显低于对照组(均P<0.05);亚低温+升压组大鼠脑梗死体积、LCGU水平明显低于青皮升压组及亚低温组(均P<0.05)。结论升压及亚低温干预措施均对局灶性脑缺血再灌注损伤具有明显脑保护作用,两者联用具有协同功效,能进一步提高疗效,其相关治疗机制可能包括升压及亚低温协同治疗能改善缺血半暗带区局部脑血流量与LCGU不匹配的现象。
- 陈红钱坤曾非黄晓琳
- 关键词：亚低温升压
- 异位子宫内膜细胞增殖及增殖动力学研究被引量：3
- 2003年
- 目的 探讨异位内膜细胞的增殖特性及增殖动力学。 方法 对 1 0例异位内膜组织 (试验组 )及 1 0例正常内膜组织 (对照组 )进行原代培养 ,采用免疫细胞化学检测两组内膜 ki-67表达 ,采用流式细胞术检测两组细胞的细胞周期。 结果 ( 1 )异位内膜腺上皮细胞的 ki-67积分 ( 4.2 0± 0 .55)与正常内膜腺上皮细胞 ( 3 .90± 0 .70 )相当 ( P>0 .0 5)。异位内膜间质细胞 ki-67积分 ( 2 .92± 0 .58)与正常内膜间质细胞 ( 2 .60± 0 .3 7)相当 ( P>0 .0 5)。( 2 )异位内膜 G0 / G1、G2 / M、S期的比例分别为 ( 78.1 4± 3 .51 ) %、( 1 1 .53±2 .1 8) %、( 1 0 .3 2± 1 .72 ) %与正常内膜 ( 79.2 7± 2 .49) %、( 1 1 .53± 1 .43 ) %、( 9.2 0±1 .66) %相似 ( P>0 .0 5)。 结论 ( 1 )异位内膜细胞并非高度增殖 ;( 2 )
- 钱坤何福仙陈红
- 关键词：增殖动力学细胞周期子宫内膜异位症
- p57与同源框基因HOXA10在子宫内膜基质细胞体外蜕膜化过程中的表达被引量：1
- 2005年
- 本文旨在从mRNA和蛋白水平研究子宫内膜基质细胞(endometrial stromalcell,ESC)体外蜕膜化过程中p57和同源框基因HOXA10(homeobox A10 gene)的表达变化以及HOXA10的亚细胞定位,从而推测其在蜕膜化过程中的作用。本实验联合使用0.5mmol/L8-溴-cAMP和1×10?6mol/LMPA(medroxyprogesterone acetate)作用1、2、4d(D1、D2、D4)诱导ESC发生蜕膜化,相应时间点提取mRNA和蛋白质行半定量RT-PCR和免疫印迹,同时以2%低血清培养ESC1、4d作为对照(C1、C4)。用间接免疫荧光和基因转染的方法,观察蜕膜化过程中HOXA10的亚细胞定位。结果显示:(1)蜕膜化过程中HOXA10的表达进行性下降,D2开始与对照组(C4)比较具有显著性差异(P<0.05)。(2)相反,蜕膜化过程中p57的表达进行性上升,D2开始与对照组C4比较也有显著性差异(P<0.05)。(3)低血清培养ESC1、4d后,p57和HOXA10的表达没有显著性差异(P>0.05)。(4)蜕膜化过程中HOXA10始终定位于胞核,不发生胞浆胞核穿梭。以上观察结果表明:(1)p57的高表达是ESC脱离细胞周期走向分化的因素之一。(2)HOXA10的低表达可能是p57上调的原因之一。(3)孕激素受体(progesterone receptor,PR)途径参与了促进ESC脱离细胞周期而走向分化的过程。
- 钱坤陈红章汉旺李豫峰靳镭朱桂金
- 关键词：蜕膜P57
- HOXA-10调节的围着床相关分子研究进展被引量：3
- 2005年
- HOXA -10子,介导胚胎种植的多个环节,如子宫内膜容受性的建立、胚胎的定位及粘附、胞饮突形成、蜕膜化、血管通透性等。然而HOXA- 10调节的下游分子知之甚少。差异显示技术,将有助于阐明其在着床中的分子生物学作用机制,并可能为生殖调节提供分子靶点。
- 钱坤朱桂金
- 关键词：着床
- HOXA10的辅因子Meis1、Pbx1在人子宫内膜中的表达被引量：11
- 2005年
- 目的:探讨HOXA10的两个辅因子Pbx1和Meis1在人正常子宫内膜中的表达及其变化规律。方法:采用原位杂交进行组织学定位,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行半定量,在mRNA水平上检测人正常月经周期子宫内膜中Pbx1和Meis1的表达水平。结果:Meis1在子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞均有表达,其中腺上皮细胞的表达高于基质细胞;增生期Meis1仅有弱表达,分泌期显著增加(P<0.05),以分泌中期表达最强(P<0.05)。在整个月经周期中并未检测到Pbx1的表达。结论:Meis1作为HOXA10的辅因子,在人正常子宫内膜中规律性的表达,可能对HOXA10介导的胚胎着床发挥着重要作用。
- 徐蓓钱坤朱桂金
- 关键词：PBX1HOXA10子宫内膜着床
- 子宫内膜基质细胞体外蜕膜化过程中的微小RNA差异表达谱及其对细胞周期的调控被引量：3
- 2012年
- 目的 研究在子宫内膜基质细胞（ ESC）体外蜕膜化过程中的微小RNA （miRNA）差异表达谱及其细胞周期调控.方法 培养原代ESC,构建ESC体外蜕膜化模型（蜕膜化组）,并进行形态学及催乳素水平验证,鉴定其构建成功；以未经蜕膜化处理的ECS作为对照（对照组）.采用miRNA微阵列芯片技术筛选两组ESC中miRNA差异表达谱,利用实时荧光定量PCR技术对miRNA微阵列芯片检测结果进行验证.转染miR-222抑制物后,流式细胞仪检测两组体外蜕膜化ESC的细胞周期比例.结果 （1） miRNA微阵列芯片技术筛选结果显示,蜕膜化组与对照组中有49个ESCmiRNA表达水平具有显著差异,其中16个miRNA显著上调,33个miRNA显著下调.实时荧光PCR技术检测显示,hsa-miR-27b、30c、143、101、181b、29b、30d、507、23a、222、221的表达水平在蜕膜化组与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.（2）对照组转染阴性对照-6-羧基荧光素（NC-FAM）后S期细胞比例为（6.2±0.7）％,明显低于转染前的（10.9±0.8）％（P＜0.05）；而G0/G1期细胞[（77.5±1.3）％]较转染前[（73.0±1.6）％]有升高趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）.蜕膜化组转染后S期细胞比例[（3.3±0.6）％]较转染前[（7.8±0.9）％]明显减少（P＜0.05）；G0/G1期细胞比例[ （80.7±1.6）％]较转染前[（74.9±1.1）％]有升高趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）.对照组和蜕膜化组G2/M期细胞比例转染前、后比较,差异均无统计学意义（P均＞0.05）.结论 miRNA可能通过调控细胞周期进程参与ESC体外蜕膜化过程.
- 胡琳莉钱坤李海霞孙莹璞朱桂金
- 关键词：微RNAS间质细胞蜕膜微阵列分析细胞周期
- 不同病因非梗阻性无精子症患者显微切开睾丸取精及ICSI结局比较被引量：11
- 2018年
- 目的:比较不同病因非梗阻性无精子症(NOA)患者显微切开睾丸取精术(micro-TESE)的成功率及配偶卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)结局。方法:回顾分析2016年9月至2017年12月155例行micro-TESE NOA患者的临床资料,根据不同病因将其分为先天性NOA(n=49)、获得性NOA(n=15)和特发性NOA(n=91) 3组,比较3组患者年龄、睾丸体积、生殖激素水平、超声表现、micro-TESE取精成功率。同时,根据女方情况,纳入符合要求的取精成功患者对受精率、可利用胚胎率和临床妊娠率进行分析。结果:先天性NOA患者睾丸体积[(6. 4±5. 0) ml)]显著小于获得性NOA患者[(10. 2±2. 0) ml]和特发性NOA患者[(9.9±3.2) ml](P <0.05);先天性NOA患者LH[(15. 2±10. 1) IU/L]显著高于获得性NOA患者[(9. 1±6. 5) IU/L)]和特发性NOA患者[(7. 8±3. 5) IU/L)](P <0. 05);而特发性NOA患者T[(11. 8±4. 8) nmol/L]显著高于先天性NOA患者[(8. 9±4. 5) nmol/L](P <0. 05)。先天性NOA患者micro-TESE取精成功率为73. 5%(36/49),获得性NOA患者为100%(15/15),特发性NOA患者为24. 2%(22/91),3组间差异显著(P <0. 05)。获得性NOA患者配偶ICSI后受精率为(73. 1±23. 3)%,显著高于先天性NOA患者[(48. 9±21. 7)%]和特发性NOA患者[(52. 6±22. 7)%](P <0. 05)。不同病因NOA患者配偶ICSI后可利用胚胎率和临床妊娠率间无显著差异。结论:获得性NOA患者micro-TESE取精成功率最高,且ICSI后受精率、可利用胚胎率以及临床妊娠率最高,其次是先天性NOA患者;特发性NOA患者取精成功率及ICSI结局较差。
- 杨竣杨竣任新玲孙雪娇谷龙杰孙雪娇宋靖宇高鑫涛魏玉兰余哲郭娜唐哲钱坤魏玉兰吴黎郭娜胡娟钱坤
- 关键词：非梗阻性无精子症卵细胞胞质内单精子注射
- 胚胎干细胞定向分化为脊髓运动神经元
- 2009年
- 目的探讨胚胎干细胞(ESC)分化为运动神经元的方法。方法用含重组人白血病抑制因子(LIF,1 000 U/μl)的培养液培养胚胎干细胞,第3天,悬滴法培养拟胚体(embryoid body,EB),第5天添加音猬酸(sonic hedgehog,Shh,5 nmol/L)和维甲酸(RA,1μmol/L),再培养5 d;然后将EB贴于铺有基质胶(matrigel)的培养皿上。采用免疫细胞荧光及流式细胞术检测运动神经元的分化。结果胚胎干细胞可以在LIF存在条件下撤去饲养层细胞,并保持未分化状态,碱性磷酸酶和OCT-4检测阳性。Shh和RA处理后5 d,胚胎干细胞可以分化为运动神经元,运动神经元核转录因子HB-9阳性:未经Shh和RA处理的胚胎干细胞几乎没有HB-9阳性细胞。流式细胞检测(36.09±8.68)%EB细胞HB-9阳性表达。结论胚胎干细胞在特殊的细胞因子作用下可以定向分化为特定的神经元;该培养方案可以定向分化胚胎干细胞为运动神经元。
- 邢变枝陈红钱坤湛彦强张苏明
- 关键词：胚胎干细胞细胞分化维甲酸运动神经元
- 关于口服非蛋白能量补充剂改善CKD3b-5期和腹膜透析患者营养不良的研究
- 目的：探究口服非蛋白能量补充剂-费瑞卡对慢性肾脏病(CKD)3b-5期和维持性腹膜透析患者营养不良、肾功能、炎症状态和免疫功能的影响。方法：根据入选标准和排除标准筛选出存在营养不良的20例CKD3b-5期及10例维持性腹...
- 郭衍超叶婷钱坤梁望群姚颖
- 关键词：慢性肾脏病营养不良
