阮研硕
- 作品数：10 被引量：57H指数：5
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所更多>>
- 发文基金：北京市重点实验室开放基金北京市教育委员会科技发展计划北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程环境科学与工程更多>>
- 三种小鼠RNA病毒样品储运条件对核酸检测的影响被引量：1
- 2018年
- 目的分析实验动物小鼠三种肠道病毒MHV、Reo-3、MNV生物样品的储运条件对病原核酸检测结果的影响。方法将MHV、Reo-3、MNV三种RNA病毒与小鼠盲肠内容物混合制备参考品;保存剂包括RNA提取试剂裂解液(Buffer AVL)及生理盐水,存储温度为4℃及室温(22℃~25℃);在保存1、2、3、7、14 d时间点提取各样品核酸,采用实时荧光定量PCR方法检测病毒样品量的变化。结果生理盐水作为保存剂核酸样品检出量低于RNA提取试剂裂解液组,且检出量下降明显;Buffer AVL组样品储于4℃条件的样品检出量优于室温25℃的条件;4℃-buffer AVL组的三种病毒参考品在3 d时间点的病毒检出量在50%以上,在7 d时间点仍有检出,但14 d时已检测不到。结论三种小鼠RNA病毒样品储运条件优选使用RNA提取试剂裂解液,并在低温条件下储运,最好在3 d内完成核酸检测。
- 李欣悦佟巍张丽芳阮研硕丛日旭向志光
- 关键词：实时荧光定量PCR储运
- 实验用狨猴微卫星引物筛选及遗传多样性分析被引量：2
- 2018年
- 目的筛选、优化狨猴微卫星DNA引物,用以对中国医学科学院医学实验动物研究所引进的实验用狨猴种群进行遗传学分析及评估。方法用筛选的20对狨猴微卫星引物,对随机抽取的30只狨猴血液样本进行基因组DNA提取及PCR扩增,扩增产物经电泳鉴定后进行STR扫描检测,用Popgene1.32软件对STR扫描结果进行数据处理和分析。结果 20对微卫星引物均呈现出遗传多样性,共检测147个等位基因,观察等位基因数5~10个,平均7.35个;有效等位基因数2.2500~6.3830个,平均4.0402个;观察杂合度0.000~0.4667,平均0.1533;期望杂合度0.1424~0.4350,平均0.2506;香隆指数1.2242~2.0324,平均1.5949;多态信息含量0.5366~0.8254,平均0.7053。结论本文筛选的20对狨猴微卫星引物具有高度遗传多样性,均处于Hardy-Weinberg平衡状态。
- 滕永康刘先菊张旭向志光阮研硕肖冲刘云波
- 关键词：微卫星DNA
- 植物活性成分对细胞存活率的影响及其测定方法的比较研究被引量：7
- 2012年
- 选用植物活性物质单体白藜芦醇和绿原酸作用于中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,采用MTS法、WST-1法、CCK-8法、XTT法和MTT法测定细胞存活率,并将MTS法、WST-1法、CCK-8法、XTT法这4种方法与传统的MTT法进行比较分析,从中选出最佳的检测方法;通过IC50值比较白藜芦醇和绿原酸毒性大小。结果显示:CCK-8法所得结果稳定,且与MTT法所测得的IC50值最接近,为最佳选择;WST-1法的实验可重复性较差,结果偏小;XTT法是4种方法中最不稳定的,作用时间、检测波长最难确定,且实验重复性差。CCK-8法、MTS法、WST-1法、XTT法和MTT法测定所得白藜芦醇的IC50值分别是116.86、124.68、64.90、162.86、86.30μmol/L;绿原酸的IC50值分别为2808.60、1119.96、1029.72、1325.43、2852.63μmol/L,同种方法下绿原酸的IC50值均高于白藜芦醇的IC50值。结论是测定植物活性成分对细胞存活率影响的方法以CCK-8为最好。白藜芦醇对CHO细胞的毒性比绿原酸大。
- 孙健梅晶赵晓红刘涛阮研硕
- 关键词：MTSCCK-8XTT细胞存活率白黎芦醇
- 兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体的制备及初步鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的狨猴血清中纯化IgG抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中IgG,HRP(辣根过氧化物酶)标记兔抗狨猴IgG。方法 Hi TrapTMProtein G亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清IgG,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定,免疫琼脂双扩散法(double immunodiffusion assay)测定制备的兔抗狨猴抗血清效价,改良"简易过碘酸钠标记法"制备兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体,酶联免疫吸附测定法(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blotting)对兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定。结果狨猴和兔抗狨猴血清纯化IgG纯度分别大于95%、97%;兔抗狨猴IgG抗血清的效价为1∶64。ELISA和Western blotting鉴定了兔抗狨猴IgG-HRP酶标抗体参考工作浓度为1∶256 000、1∶15 000,特异性明显。结论制备狨猴IgG-HRP标记抗体并初步鉴定,包括ELISA及Western blotting的特异性及使用浓度,为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学检测体系储备了资源。
- 丛日旭刘先菊滕永康向志光佟巍张丽芳阮研硕刘云波
- 关键词：狨猴抗体制备酶标抗体
- 阿魏酸拮抗大气PM2.5对大鼠肺的损伤作用被引量：7
- 2017年
- 探讨阿魏酸干预北京市大气PM2.5对大鼠肺的损伤作用,为预防和控制PM2.5造成的健康危害提供基础数据。通过建立空白对照组、不同剂量PM2.5(1.5、6.0、24.0 mg/kg)染毒组及相应阿魏酸保护组,取肺组织进行苏木精-伊红染色观察组织形态学变化;收集肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)进行炎性细胞计数,并测定乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活力;测定血液上清液丙二醛(methane dicarboxylic aldehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine,8-OHd G)含量;测定肺组织匀浆上清液免疫球蛋白E(immunoglobulin E,Ig E)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-4、IL-8、核转录因子-κB(nuclear factorkappa B,NF-κB)含量及Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)-4含量。结果显示,PM2.5染毒能够造成大鼠肺组织不同程度病理性改变;BALF中炎性细胞密度增加,且具有剂量依赖关系,6.0 mg/kg PM2.5中剂量组,损伤作用最明显;阿魏酸剂量为38.8 mg/kg时可以抑制这种改变。剂量为38.8 mg/kg的阿魏酸可以抑制PM2.5染毒引起的血清中MDA含量升高、SOD活力降低和8-OHd G含量升高。PM2.5染毒后,Ig E、TNF-α、IL-4和TLR-4含量增加,阿魏酸预处理可以抑制其增加。因此,PM2.5对大鼠肺部造成明显的氧化损伤和炎性损伤,阿魏酸能够减轻该损伤作用,可能是通过抑制Toll样受体通路减轻PM2.5诱导的炎症反应。
- 周艳丽劳文艳阮研硕毕婷婷陈世杰赵晓红
- 关键词：阿魏酸PM2.5肺损伤拮抗作用
- 三种小鼠肠道病毒核酸检测技术在小鼠健康监测中的应用
- 2018年
- 目的应用核酸检测技术检测小鼠盲肠内容物中MHV、Reo-3、MNV三种肠道病毒,并与血清学检测结果相比较,分析核酸检测在小鼠健康监测中的适用性。方法随机选取本实验室接收的小鼠盲肠内容物样品,提取核酸,应用荧光定量PCR技术检测MHV、Reo-3、MNV三种肠道病毒;并与其血清学抗体检测结果做关联分析。结果在272份样品中,MHV、Reo-3、MNV三种肠道病毒检出率分别为17.3%,18.8%,16.9%;MHV、Reo-3核酸检出量多呈低拷贝状态;与血清学抗体检测结果的关联分析表明3种病毒的核酸检测结果与抗体检测结果不完全相关。结论实验动物小鼠群体中存在携带MHV,Reo-3,MNV三种病毒的可能,作为血清学抗体检测技术的补充,核酸检测可作为高敏感性的方法应用于实验动物群体的健康监测。
- 李欣悦佟巍丛日旭郭智蔡鹃阮研硕向志光
- 关键词：荧光定量PCR健康监测
- 植物活性物质对PM_(2.5)致细胞损伤的抗性作用被引量：4
- 2015年
- 为研究植物活性物质对PM2.5致细胞损伤的抗性作用,研究了北京城区PM2.5对CHO(Chinese hamster ovary,中国仓鼠卵巢)细胞的损伤作用,并选择植物活性物质绿原酸、阿魏酸和荭草素探讨其对CHO细胞的保护作用.以CCK-8法确定PM2.5的试验剂量和3种活性物质的最佳保护剂量,然后通过彗星试验、微核试验、流式细胞术及Western Blotting分别检测PM2.5的损伤作用及植物活性物质的保护作用.结果表明:1由CHO细胞存活率可知,PM2.5的有效试验剂量为15μg/m L,绿原酸、阿魏酸和荭草素的最佳保护剂量分别为50、20、10μmol/L.2PM2.5可引起CHO细胞明显的DNA损伤、微核形成增加、细胞周期阻滞所致的细胞增殖指数降低,而经阿魏酸、绿原酸和荭草素预处理后,均可减轻PM2.5对细胞的损伤作用,起到了一定的保护作用.3PM2.5能引起CHO细胞中p53和caspase-3蛋白的表达增加,而阿魏酸、绿原酸和荭草素均可使其表达量有所降低.由PM2.5引起的细胞损伤经绿原酸、阿魏酸、荭草素作用后表达量降低.在3种植物活性物质中,以阿魏酸拮抗PM2.5损伤的效果最佳,绿原酸次之,荭草素相对较差.
- 刘涛阮研硕毕婷婷郭辰赵晓红
- 关键词：DNA损伤阿魏酸绿原酸荭草素
- 两种大鼠哮喘模型建立方法的比较被引量：5
- 2017年
- 以两种方法建立哮喘大鼠模型,方法一:用新鲜配制的卵清蛋白(OVA)(0.2 mg)致敏,氢氧化铝作为佐剂,连续7天进行1%OVA雾化激发,30 min/次;方法二:用高剂量卵清蛋白(2 mg)致敏,氢氧化铝(Al(OH)_3)与百日咳灭活杆菌共同作为佐剂,先以1.7%OVA气管滴注染毒,随后1%OVA连续雾化激发6 d,30 min/次。通过肺组织形态学观察、无创肺功能测试、肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞分类及计数、组织样本中特异性蛋白IgE以及卵清蛋白特异性IgE(OVA-IgE)含量作为敏感指标判断哮喘模型建立成功与否。结果显示两种哮喘模型大鼠均表现出哮喘大鼠的肺组织病理学改变,肺功能降低,BALF中的细胞总数、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞数增加;采用方法二能够引起组织样本中IgE以及OVA-IgE含量增高,而采用造模方法一未观察到此类变化。因此,方法二能够更好地制备过敏性哮喘模型,可作为较好的哮喘大鼠模型建立方法。
- 劳文艳阮研硕周艳丽陈世杰赵晓红
- 关键词：哮喘炎性反应
- 乙醇性胃粘膜损伤及其保护作用的研究进展被引量：15
- 2013年
- 本文主要对乙醇的特点及其在胃肠道中的代谢,乙醇对胃粘膜的损伤作用,对胃粘膜防御因子和自由基的影响,胃粘膜保护机制,以及保护胃粘膜的药物和生物活性物质的研究进展作简要介绍。
- 张雅博阮研硕赵晓红刘畅
- 关键词：乙醇胃粘膜药物生物活性物质
- 岩藻多糖对急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用被引量：17
- 2015年
- 目的:研究岩藻多糖对急性酒精性损伤模型大鼠胃黏膜的保护作用,为胃黏膜保护类功能食品开发提供科学依据。方法:将60只SD大鼠随机分成空白对照组、模型组、海藻多糖各剂量组【0.083,0.167,0.334 g/(kg BW)】、阳性对照组【(甲氰咪胍,0.8 g/(kg BW)】,每组各10只。采用酒精灌胃致胃黏膜损伤模型。给予岩藻多糖30d后,观察胃黏膜组织的大体和病理组织改变,测定胃组织前列腺素E2含量、丙二醛含量、NO含量及超氧化歧化酶活力。结果:岩藻多糖能明显改善胃黏膜组织损伤情况,降低损伤积分(P<0.05),提高酒精性损伤抑制率;在高剂量组能提高大鼠胃组织氧化歧化酶活力(P<0.05);各剂量组均能提高大鼠胃组织前列腺素E2含量(P<0.01)和NO含量(P<0.05),降低大鼠胃组织丙二醛含量(P<0.05)。结论 :岩藻多糖对大鼠急性酒精性胃粘膜损伤具有一定保护作用,其机制可能与增强胃黏膜保护因子,提高抗氧化和降低脂质过氧化能力有关。
- 阮研硕赵江燕李艳梅赵晓红刘畅张雅博
- 关键词：胃粘膜损伤酒精前列腺素E2抗氧化指标
