陈双雅
- 作品数：9 被引量：33H指数：4
- 供职机构：厦门出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目出入境检验检疫行业标准计划项目更多>>
- 相关领域：理学轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒衣壳蛋白基因在毕赤酵母中的表达
- 2012年
- 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒是"须向OIE申报的甲壳动物重要疾病"之一。将该病毒主要结构蛋白基因克隆至毕赤酵母穿梭表达质粒pPIC9K,构建重组表达载体(命名为pPIC9K-IV),限制性内切酶BglⅡ对其进行酶切线性化,采用电穿孔法转化到毕赤酵母GS115宿主菌。采用PCR方法分析和G418筛选来鉴定重组的毕赤酵母,诱导表达的产物分别进行ELISA分析或Western blot免疫印迹鉴定,分泌表达产物分子量大小为40ku左右,原核表达时制备的兔抗对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒衣壳蛋白的血清可与真核表达的目的蛋白发生特异性反应。
- 彭小莉谢明星刘棠陈双雅王群力陈伟玲王景明张其清
- 关键词：衣壳蛋白毕赤酵母真核表达
- 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒衣壳蛋白基因的克隆表达及抗体制备被引量：2
- 2008年
- 本文根据GenBank登录的对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的全基因组序列(NC-002190),设计出主要结构蛋白基因的相应引物,从厦门发病的对虾中,提取DNA,以此为模板,利用PCR扩增目的基因.再将目的基因分别与pGEX-6p1载体和pET-28a载体连接,构建重组表达载体pGEX-IV、pET-IV,重组子经酶切和测序鉴定后导入表达型大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,大小约为62KDa和41KDa,与预测大小一致.将pET-IV表达重组蛋白经纯化,免疫小鼠,W estern免疫印迹反应结果表明其抗体均可与pGEX-IV和pET-IV表达的蛋白发生特异性反应.本研究的结果为对虾IHHNV的快速检测及其免疫提供了研究基础.
- 彭小莉刘棠徐维佳王群力陈伟玲陈双雅王景明谢明星
- 关键词：衣壳蛋白基因克隆及表达蛋白质纯化对虾
- 凡纳滨对虾桃拉综合征病毒主要结构蛋白基因的克隆及原核表达被引量：2
- 2007年
- 根据GenBank中桃拉病毒的全基因组序列,分别设计扩增该病毒主要结构蛋白基因vp1、vp2、vp3的相应引物,以发病的凡纳滨对虾中提取的总RNA为模板,利用RT-PCR技术对目的基因进行了扩增,分别获得分子量为1 164、849、507bp的基因片段,与预期一致.再将目的基因与pET-28a载体连接,分别构建重组表达载体pET-VP1、pET-VP2和pET-VP3,重组子经酶切和测序鉴定后导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测.SDS-PAGE电泳的结果表明,在37℃下,0.5mmol/dm3的IPTG诱导表达的重组蛋白均以包涵体的形式存在,重组蛋白VP1、VP2、VP3的大小分别为48、36、24KDa.本研究的结果为制备桃拉病毒主要结构蛋白的特异性抗体,进而研制桃拉病毒快速检测试剂盒奠定了基础.
- 刘棠彭小莉陈亮徐维佳陈伟玲方元炜陈双雅谢明星
- 关键词：桃拉病毒结构蛋白原核表达凡纳滨对虾
- 食源性变形杆菌簇致病菌的检测被引量：3
- 2010年
- 为建立食源性变形杆菌簇致病菌的检测方法,对富集培养基、选择性平板分离培养基和生化特性进行了筛选比较。结果表明,肠杆菌富集肉汤培养基更有利于变形杆菌簇致病菌的检出,平板分离培养基可用EMB琼脂培养基和SS琼脂培养基(或麦康凯琼脂培养基),初筛方法为革兰氏反应和苯丙氨酸脱氨酶实验,最后用其他生化反应进行确认。该方法检出率高,检测范围较宽,可为建立变形杆菌簇致病菌的检验标准提供实验依据。
- 陈双雅张永祥陈伟玲王群力谢明星刘棠彭小莉
- 关键词：致病菌
- 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性和芯片生物分析技术用于台湾海峡常见石斑鱼和鲷鱼的品种鉴定被引量：6
- 2011年
- 应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和芯片生物分析系统建立了台湾海峡常见石斑鱼和鲷鱼的分子生物学品种鉴定新方法。首先提取鱼的基因组脱氧核糖核酸(DNA)进行细胞色素b基因特定片段的PCR扩增,然后用DdeⅠ、HaeⅢ和NlaⅢ3种限制性内切酶进行酶切,在Agilent DNA1000芯片上对酶切片段进行分离。该方法成功鉴定了台湾海峡常见的8种石斑鱼品种和5种鲷鱼品种,是一种快速、简便、有效的鱼类品种鉴定分析手段。
- 陈双雅张津陈伟玲徐敦明周昱
- 关键词：芯片实验室物种鉴定细胞色素B石斑鱼鲷鱼
- 基因芯片在食品微生物检测中的应用被引量：6
- 2008年
- 综述了近年来基因芯片技术在食品微生物检测中的应用进展,重点讨论了应用基因芯片技术对食品常见致病菌的检测和分型,并对该技术在食品微生物中的应用前景作了展望。
- 陈双雅张永祥
- 关键词：基因芯片食品微生物
- 冰淇淋中紫色色杆菌的分离鉴定
- 2009年
- 〔目的〕对进出口送检冷冻食品及市售冷冻食品进行食品安全调查。〔方法〕按《食品卫生微生物检验菌落总数测定》(GB/T4789.2-2003)进行菌落总数的测定。挑取平板上的紫色菌落纯培养,获得的菌株在VITEK微生物鉴定仪中进行鉴定。〔结果〕从1份冰淇淋样品中分离出1株紫色色杆菌。〔结论〕由于紫色色杆菌感染病死率极高,对食品中该菌的检测值得重视。
- 彭小莉陈伟玲陈双雅
- 关键词：紫色色杆菌冷冻食品
- DNA检测方法在鱼类物种鉴定中的应用被引量：7
- 2012年
- 总结了近年来在鱼类物种鉴定中常用的DNA序列分析、DNA指纹技术、物种特异性聚合酶链式反应和实时荧光PCR技术等DNA检测方法,同时对各类方法的特点和局限性进行了分析.
- 王嘉鹤陈双雅陈伟玲徐敦明周昱
- 关键词：物种鉴定鱼类
- 应用PCR-RFLP和芯片生物分析系统鉴别河豚鱼品种被引量：8
- 2012年
- 应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态分析和芯片生物分析系统建立5种河豚的分子生物学品种鉴定新方法。首先提取鱼的DNA进行细胞色素b基因的PCR扩增,然后用DdeⅠ、HaeⅢ和NlaⅢ三种限制性内切酶进行酶切,在Agilent DNA1000芯片上对酶切片段进行分离。该方法可成功区分5个河豚鱼品种,是一种快速、简便、有效的鱼类品种鉴定分析手段。
- 陈双雅陈文炳张津陈伟玲徐敦明周昱
- 关键词：河豚PCR-RFLP
