陈嫚
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 供职机构：北京理工大学更多>>
- 相关领域：生物学理学医药卫生更多>>
- 重组人组织型纤溶酶原激活剂突变体基因的克隆、表达与生物活性鉴定被引量：5
- 2004年
- 目的 :研究重组人组织型纤溶酶原激剂突变体 (reteplase,r -PA)基因的克隆和表达 ,并对表达产物进行活性鉴定。方法 :通过PCR的方法从t-PA基因上扩增得到r-PA基因的编码序列 ,并克隆到pUC19载体中 ,经DNA测序正确后 ,将该基因克隆到含有T7启动子的高效表达质粒pJZ - 10 0中 ,转化E .coliBL2 1(DE3) ,得到含有r-PA基因的工程菌。工程菌经IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE检测表达情况。提取包涵体 ,经过体外稀释法复性 ,亲和色谱层析纯化 ,测定产物的活性。结果 :表达的重组蛋白约占可溶性总蛋白的 2 0 % ,复性并纯化后测定活性为 5 80 0 0IU mg。结论 :成功构建了重组r-PA的表达质粒 ,表达产物具有良好的生物活性。
- 任启生陈嫚宋新荣冯长根
- 关键词：克隆生物活性
- 重组人组织型纤溶酶原激活剂改构体的表达、复性与分离纯化被引量：3
- 2004年
- 目的 获得具有高纯度、高生物活性的重组人组织型纤溶酶原激活剂改构体(瑞替普酶,reteplase,r-PA)。方法 reteplase基因克隆到表达质粒pJZ-100中,转化Escherichia cli B121(DE3),在0.05 mmol·L-1异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下获得高效表达,表达产物通过脉冲稀释法复性,复性后的蛋白质用ETI-Sepharose 4B亲和色谱纯化。结果 表达产物占菌体总蛋白质的20％,脉冲稀释法复性后复性收率为28％,经纯化后纯度达96％以上,比活为580 000 IU·mg-1。结论 建立了reteplase表达、复性与纯化工艺,以此工艺可获得高活性高纯度的reteplase。
- 冯长根陈嫚任启生宋新荣
- 关键词：复性纯化
- 刺桐胰蛋白酶抑制剂的色谱复性研究
- 2005年
- 目的 研究在大肠杆菌中表达的刺桐胰蛋白酶抑制剂 (Erythrinatrypsininhibitor,ETI)的色谱复性。方法 使用透析、阴离子交换和凝胶色谱法对ETI复性进行研究 ,比较 3种复性方法的相对复性率及蛋白质回收率。结果 3种复性方法的复性率分别为 2 0 . 1% ,32 . 1%和 5 0 . 8% ,蛋白质回收率分别为 16 . 6 % ,15 . 1%和 5 5 . 2 %。结论 凝胶色谱复性优于其他两种方法。色谱复性使蛋白质的复性与纯化同步进行 ,简化了操作程序 ,提高了产品的回收率。
- 冯长根陈嫚任启生宋新荣
- 关键词：刺桐胰蛋白酶抑制剂复性色谱
- 重组人组织型纤溶酶原激活剂改构体复性研究被引量：2
- 2004年
- 目的 研究重组人组织型纤溶酶原激活剂改构体(reteplase)体外复性。方法 通过研究复性所需的时间、温度、pH值、蛋白浓度、氧化还原对比例和添加精氨酸等因素,确定了reteplase复性所需的基本条件,并对直接稀释法、氧化复性后再稀释和脉冲稀释法进行了方法学比较研究。结果 脉冲稀释法优于直接稀释法和氧化复性后再稀释。结论建立了reteplase复性方法,此方法可使重组蛋白在较高的重折叠浓度下仍具有良好的复性效率。
- 冯长根陈嫚任启生宋新荣
- 关键词：改构体复性
- 刺桐胰蛋白酶抑制剂亲和层析填料的制备及应用被引量：6
- 2005年
- 研究用交联琼脂糖为载体 ,三聚氯氰为活化剂 ,刺桐胰蛋白酶抑制剂为配基 ,制备亲和填料的方法 .通过紫外和红外光谱分析 ,对制备的填料进行表征 .用制备的亲和填料吸附重组人组织型纤溶酶原激活剂突变体(reteplase,r- PA) ,研究吸附与解吸附条件 .结果表明 ,用该方法制备的亲和填料 ,制备工艺简单 ,吸附性能良好 ,对r- PA的吸附量为 8.76 mg· g- 1 .解吸附完全 ,不影响活性 ,可以用来分离纯化 r- PA.
- 陈嫚任启生宋新荣冯长根
- 关键词：三聚氯氰刺桐胰蛋白酶抑制剂
