- 慢病毒介导的RNA干扰沉默Slug基因对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响
- 2012年
- 目的:探讨利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默Slug基因,观察对结肠癌HCT116细胞增殖和周期的影响。方法:构建Slug基因特异性siRNA慢病毒载体,感染结肠癌HCT116细胞,设立空白对照组、阴性对照组及SlugsiRNA三组,应用Real-time PCR和Western blot方法分别从基因和蛋白质水平检测各组干扰质粒对Slug基因的干扰效果,MTT法检测Slug基因在siRNA作用下的细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞凋亡周期变化情况。结果:转染Slug siRNA后,结肠癌HCT116细胞中Slug基因mRNA和蛋白表达明显受到抑制(P<0.05);MTT检测,干扰组细胞增殖水平明显低于阴性对照组;流式细胞仪检测细胞G1期细胞百分比(52.3±0.6)高于阴性对照组(45.1±0.3,P<0.05)。结论:Slug siRNA能明显下调靶基因Slug的表达,在体外可抑制结肠癌HCT116细胞的生长并促进其凋亡。
- 钱江陈旺盛文坤明傅仲学
- 关键词：RNA干扰SLUG细胞增殖凋亡
- 姜黄素对人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR蛋白质双向电泳图谱的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨姜黄素处理对人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR蛋白质表达谱的影响。方法实验分两组,姜黄素处理组用25μmol/L的姜黄素作用于人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR 24h,对照组加入相应体积的生理盐水。应用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离姜黄素处理组与对照组人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR的总蛋白,凝胶银染显色,采集凝胶图像,用PDQuest 8.0软件分析并比较两者之间差异表达的蛋白质。结果获得了背景清晰、分辨率高、重复性好的HCT-8/VCR细胞系2-DE图谱,姜黄素处理组和对照组图像的平均蛋白质点数分别为1030±69和1070±96,两者的差异点共33个,姜黄素处理组有8个蛋白点表达上调,18个表达下调,2个在姜黄素处理组特异表达,5个在对照组特异表达。结论建立了经或不经姜黄素处理的人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR的双向凝胶电泳图谱,识别了33个差异表达的蛋白质点,对这些差异蛋白点的进一步分析有助于研究姜黄素逆转结肠癌多药耐药的分子机制。
- 李雷傅仲学覃勇卢伟东王学虎陈旺盛
- 关键词：蛋白质组学多药耐药相关蛋白质类姜黄素结肠肿瘤
- Slug和E-cadherin在结直肠癌组织中的表达及临床意义被引量：9
- 2012年
- 目的探讨Slug和E-cadherin在结直肠癌组织中的表达及预后意义。方法应用免疫组化SP法检测65例结直肠癌组织,25例癌旁正常结直肠组织中Slug和E-cadherin的表达,分析两者表达水平与临床病理特征及患者预后的关系。结果 Slug在结直肠癌组织中异常表达率为47.1%,而在正常结直肠组织中表达率为12%,差异有统计学意义(P<0.01);E-cadherin在结直肠癌组织中异常表达率为55.4%,而在正常结直肠组织中表达率为8%,差异有统计学意义(P<0.01);两者阳性表达率与肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移、Dukes分期相关性均有统计学意义(P<0.05)。Slug、E-cadherin、淋巴结转移、Dukes分期可成为影响结直肠癌预后的独立因素(P<0.05)。结论 Slug和E-cadherin的表达异常可能与结直肠癌的发生发展、转移相关并可作为评价结直肠癌生物学行为和预后的重要指标。
- 钱江陈旺盛文坤明傅仲学王素梅
- 关键词：结直肠癌SLUGE-钙黏素
- Oct4基因沉默对结直肠癌细胞凋亡的诱导作用及机制研究被引量：7
- 2012年
- 目的探讨Oct4基因沉默对人结直肠癌SW480细胞凋亡的影响及其可能机制。方法将对数生长期SW480细胞分为3组。①空白对照(Con)组:不转染病毒;②阴性对照(NC)组:转染阴性对照病毒;③RNA干扰(RNAi)组:转染Oct4-shRNA慢病毒载体。采用实时荧光定量PCR检测Oct4 mRNA表达;采用Western blotting检测Oct4、p-Akt蛋白表达;采用流式细胞仪测定Oct4+及CD44+细胞比例变化及肿瘤细胞凋亡情况。结果与NC组比较,RNAi组Oct4的mRNA(分别为1.00和0.19±0.02)和蛋白(分别为0.032±0.004和0.007±0.001)表达量均有明显下降(P<0.01),Oct4+细胞比例(分别为91.53%和10.70%)和CD44+细胞比例(分别为59.69%和23.58%)明显减少,p-Akt蛋白表达明显受抑(0.11±0.03和0.03±0.01),细胞凋亡明显增加(分别为12.1%±1.8%和43.2%±4.5%,P<0.01)。结论沉默Oct4基因可明显减少SW480细胞中Oct4+及CD44+细胞比例,增加细胞凋亡,其作用可能与PI3K/Akt通路有关。
- 文坤明傅仲学张贵海陈旺盛钱江
- 关键词：结直肠肿瘤RNA干扰细胞凋亡
- Cripto-1在食管癌组织中的表达及其与上皮间质转化的关系被引量：5
- 2013年
- 目的探讨Cripto-1在食管癌组织中的表达及其与上皮-间质转化(EMT)的关系。方法采用RT-PCR、Western blotting检测41例食管癌患者癌组织、癌旁组织及正常食管黏膜组织中Cripto-1的表达;采用免疫组织化学法检测食管癌组织中Cripto-1及EMT标记物(N-钙黏蛋白、波形蛋白、E-钙黏蛋白)的表达,并结合临床病理资料分析Cripto-1蛋白与N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、波形蛋白表达的相关性。结果食管癌组织、癌旁组织及正常食管黏膜组织中Cripto-1 mRNA表达水平分别为0.35±0.08、0.22±0.04、0.13±0.03,Cripto-1蛋白表达水平分别为0.62±0.06、0.45±0.07、0.33±0.05,均明显高于癌旁组织及正常食管黏膜组织(P<0.05)。免疫组化染色显示,食管癌组织中Cripto-1、N-钙黏蛋白、波形蛋白、E-钙黏蛋白的阳性表达率分别为53.7%、51.2%、61.0%、36.6%。Cripto-1蛋白表达与N-钙黏蛋白及波形蛋白表达呈正相关(r=0.463,r=0.460,P<0.05),与E-钙黏蛋白表达呈负相关(r=-0.310,P<0.05),与淋巴结转移、远处转移及临床分期显著相关(P<0.05)。结论 Cripto-1在食管癌组织中表达增高,可能与食管癌的发生、发展相关,并可能通过调控EMT促进食管癌的转移。
- 陈旺盛傅仲学黄春文坤明钱江冯继红李雷
- 关键词：食管肿瘤间质细胞上皮细胞
- 结直肠癌耐药细胞株诱导上皮间质转化的研究被引量：6
- 2012年
- 目的建立结直肠癌耐奥沙利铂细胞株，观察该细胞株上皮间质转化（EMT）标记物的变化。方法以耐药SW620／OxR细胞及亲本SW620细胞为研究对象，采用流式细胞技术检测P-糖蛋白^＋（P—gp^＋）及Survivin^＋细胞比例，Western blot法检测EMT标记物[E-钙黏素（E-eadherin）、N—cadherin、波形蛋白（Vimentin）]的变化。结果与SW620细胞株比较，SW620／OxR细胞中P—gp^＋细胞数[（63．78±6．82）％比（10．35±2．59）％，P〈0．01]、Survivin^＋细胞数[（43.59±9.26）％比（7．82％±3．48）％，P〈0．01]及间质标记物N—cadherin（0．33±0．06比0，19±0．05，P〈0．05）、Vimentin（0．38±0．07比0．09±0．02，P〈0．01）明显增高，而上皮标记物E-cadherin（0．45±0．07比0．86±0．18，P〈0．01）表达则明显下降。结论SW620／OxR细胞株高表达P—gp和Survivin基因及蛋白，并诱导EMT发生。
- 文坤明傅仲学张贵海陈旺盛钱江冯继红
- 关键词：结直肠肿瘤化疗上皮间质转化
- EphrinB2对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响及其机制研究
- 目的:在体外实验中研究利用RNA干扰技术沉默EphrinB2基因对结直肠癌生物学行为的影响，并探讨其可能的机制，为结直肠癌的早期诊断和基因治疗提供理论依据和实验基础。
方法:用Western Blot与RT-PCR...
- 陈旺盛
- 关键词：结直肠癌肿瘤血管生成体外实验
- Oct4-shRNA慢病毒载体沉默结直肠癌Oct4基因并诱导细胞凋亡的初步研究被引量：2
- 2013年
- 目的:探讨Oct4-shRNA慢病毒载体对人结直肠癌SW480细胞Oct4的抑制效率及对细胞凋亡的影响。方法:构建针对Oct4的4对Oct4-shRNA干扰慢病毒载体质粒,用Oct4与GFP融合的过表达质粒分别与4个干扰质粒共转染293T细胞,采用Western blot检测GFP的表达,筛选出干扰效果最好的Oct4-shRNA慢病毒载体,用293T细胞包装后转染SW480细胞,实时荧光定量PCR和Western blot检测Oct4的表达情况,流式细胞仪测定细胞凋亡。结果:与转染阴性对照病毒的对照组相比,转染Oct4-shRNA慢病毒载体的SW480细胞Oct4的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01);细胞凋亡明显增加(P<0.01)。结论:Oct4-shRNA慢病毒载体可有效抑制SW480细胞Oct4表达,并显著增加细胞凋亡。
- 文坤明傅仲学陈旺盛钱江冯继红
- 关键词：结直肠癌RNA干扰OCT4慢病毒载体细胞凋亡
- Slug基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定被引量：4
- 2012年
- 目的构建Slug基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体。方法针对人Slug基因的序列,设计出RNA干扰的靶序列,合成靶序列Oligo DNA,退火形成双链DNA,通过Age I和EcoR I酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生shRNA慢病毒载体,质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆并用插入鉴定引物进行PCR鉴定阳性克隆并测序,同时应用Real-time PCR和Western blot方法检测HCT116结肠癌细胞中Slug基因mRNA和蛋白的表达情况。结果 PCR鉴定与DNA测序证实合成的含Slug shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。Western blot证实Slug RNAi慢病毒载体能够抑制Slug的表达。结论成功构建Slug基因RNAi慢病毒表达载体,为后续感染结肠癌细胞,为探索在结直肠癌发生和发展中的作用奠定基础。
- 钱江傅仲学文坤明陈旺盛
- 关键词：RNA干扰SLUG慢病毒载体
- Peroxiredoxin 2基因RNAi慢病毒载体构建及对SW480细胞增殖的影响
- 2015年
- 目的构建Peroxiredoxin2(PRDX2)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,探讨PRDX2基因干扰后对结直肠癌SW480细胞增殖的影响。方法设计、合成靶向PRDX2的RNA干扰的序列,构建pGC-EGFP-shPRDX2慢病毒载体并进行鉴定,同时应用qRT-PCR和Western blot方法观察转染的SW480结肠癌细胞PRDX2 mRNA和蛋白表达的抑制效果,并通过MTT、平板克隆形成实验检测细胞增殖变化。结果成功构建PRDX2基因慢病毒载体并经测序证实;pGCEGFP-shPRDX2可有效抑制结直肠癌SW480细胞PRDX2的表达,感染慢病毒的SW480细胞中PRDX2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);SW480细胞经PRDX2 RNA干扰后其生长和增殖能力显著降低(P<0.05)。结论 PRDX2基因RNAi慢病毒表达载体在SW480细胞中表达稳定可靠,PRDX2基因干扰后有效抑制了结直肠癌SW480细胞的增殖和生长,为进一步探讨PRDX2在结直肠癌发生、发展及转移中的作用奠定基础。
- 冯继红傅仲学文坤明卢伟东王昊陈旺盛郭金宝张寿儒
- 关键词：绿色荧光蛋白质类慢病毒载体
