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慢病毒载体感染小鼠曲细精管的研究被引量：1: 2010年; 目的探讨基于慢病毒载体曲细精管注射方法建立转基因动物的可行性。方法将8只4w～5w龄的雄性昆明小鼠分为高剂量(2只)、低剂量(6只)2个实验组,曲细精管注射滴度分别为1×109、2×107TU/mL的绿色荧光蛋白慢病毒载体(LV-GFP),注射量均为20μL/testis。注射后第4w、8w分别处死高剂量组小鼠各1只,于第5w、13w、17w各处死2只低剂量组小鼠,取睾丸,通过PCR、荧光显微镜和免疫组化等方法检测睾丸组织中GFP基因及表达。结果3只低剂量和2只高剂量小鼠睾丸组织中均可检测到GFP基因;但GFP表达仅见于高剂量组小鼠睾丸,其分布范围主要集中于曲细精管基膜及管间隙。结论慢病毒载体可通过曲细精管注射感染小鼠睾丸组织,但其感染效率与病毒滴度有关。; 马啸叶华虎杜小燕王迎陈振文; 关键词：慢病毒曲细精管小鼠转基因

基于慢病毒载体的精子介导的转基因方法学研究: 转基因动物在人类疾病研究、珍贵药物蛋白生产、培育新品种等方面发挥着重要的作用。优化转基因动物技术以提高转基因效率及遗传的稳定性、降低生产成本、简化技术操作等一直是转基因研究工作的重点。本实验探讨基于慢病毒载体(Lenti...; 马啸; 关键词：转基因技术精子介导人工授精慢病毒载体

外源基因对精子的影响及其在山羊早期胚胎中的表达被引量：4: 2008年; 在前期实验中发现,山羊精子可自发结合外源DNA,但结合能力在不同动物个体之间差异显著。挑选结合能力明显不同的3只公羊,进一步探讨了外源DNA对精子的影响及其在早期胚胎中的表达,结果发现:外源基因与精子共同孵育后,精子的活率、顶体反应发生率和受精能力均呈下降态势,其降幅与精子的结合能力密切相关。利用与DNA共育后的精子进行体外受精,外源基因可被导入卵母细胞并在早期胚胎中获得表达,但胚胎阳性率因精子供体不同而差异显著(P<0.05);其中来源于高、中结合能力供体生产的胚胎,分别有16.2%(25/154)和5.3%(4/76)可检测到外源基因存在,但表达仅见于高结合能力供体生产的早期胚胎,表达率为6.5%(10/154);低结合能力供体生产的胚胎无外源基因。研究表明,在以精子载体方法生产转基因动物的实验过程中,筛选对DNA结合能力较强的精子供体是提高转基因效率的前提,但需要考虑外源DNA对精子受精能力的影响。; 叶华虎董罡袁菊芳隋丽华胡娟峰李瑞生刘彦马啸陈振文曾林; 关键词：精子胚胎山羊

慢病毒载体转染犬睾丸生殖细胞被引量：1: 2013年; 目的观察慢病毒载体(Lentiviral vector,LV)对犬生殖细胞的转染,为基于LV的精子介导法制备转基因动物提供依据。方法采用睾丸打点注射法,向比格犬两侧睾丸分别注入滴度为5×108、1×108、2×107TU/mL的慢病毒液组成3个剂量组,每点注射量为每只犬0.2 mL。于注射后第2周开始采集精液,通过精液DNA的PCR检测和精子荧光镜检评估绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的整合及表达。结果 1)在高剂量组,整合并表达GFP基因的精子于第4周首现并持续至第17周;在中、低剂量组于第5周首现,分别持续到第14周、12周。2)GFP表达的高峰期在注射后第7周～10周。3)GFP表达于整个精子,以顶体后区和精子尾颈部表达最强。4)注射后第2周～6周,中剂量组犬采精困难,高低剂量组犬精子畸形率有上升的趋势。5)在GFP表达的高峰期,绿色荧光精子的百分率在高、中、低剂量组分别为43.33%、35.53%和4.55%,具有明显的差异。结论基于LV的精子介导转基因法(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)可成功获得转基因犬精子,转基因阳性率、表达的强度与持续时间与慢病毒滴度相关。; 王洪军马啸赵明杜小燕李益琛陈振文; 关键词：比格犬慢病毒载体生殖细胞

苯甲基磺酰氟(PMSF)在犬精子4℃保存中的作用被引量：1: 2009年; 目的探讨4℃保存的条件下,苯甲基磺酰氟(phenylmethylsulfonyl fluoride,PMSF)对犬精子的保护作用。方法犬精子以含不同浓度PMSF的Tris-卵黄液(Tris-egg yolk,EYT)处理后,于4℃低温保存,在24、48、72、96 h分别以伊红、瑞-吉和吖啶橙染色检测精子活率、顶体膜和DNA完整性。结果低温保存24 h后,吖啶橙染色检测DNA断裂率(%):对照组(5.93±0.32),实验组:20μg/mL(4.50±0.38)、40μg/mL(4.20±0.25)、80μg/mL(4.21±0.46)、160μg/mL(3.87±0.67),P<0.05;各浓度组之间没有明显差异;72 h后,犬精子活率仍>30%;96 h内,对照组和实验组犬精子在活率、顶体膜完整性上未见明显差异。结论PMSF于4℃低温保存条件下对犬精子具有保护作用,24 h内能有效保护精子DNA双链的完整性,4℃低温保存72 h后,犬精子仍符合人工授精要求。; 马啸叶华虎曾林路静王迎陈振文

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马啸