高顺
- 作品数：16 被引量：13H指数：2
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- 重组风雨花凝集素在大肠杆菌中表达条件的优化
- 2012年
- 为提高重组表达质粒pET32c-ZGA在大肠杆菌中的表达量,对表达重组风雨花凝集素基因工程菌的培养条件进行优化筛选,对影响蛋白质表达量和工程菌生长的因素如pH值、诱导温度、IPTG、接种量、诱导时间、补充碳源形式、诱导时机、无机离子等进行了探索.经过优化,重组融合目的蛋白占菌体总蛋白的61.8%,比优化前提高了13.4%.条件优化后,pET32c-ZGA工程菌经过放大培养,获得6 g/L的湿菌体量,超声波破碎菌体,SDS-PAGE证实重组融合蛋白以包涵体形式表达.
- 张帆高顺温馨谢之易鲍锦库
- 关键词：大肠杆菌重组蛋白包涵体
- 一种大量获得黄精凝集素II的方法
- 本发明公开了囊丝黄精再生体系的建立方法，其步骤为：A.囊丝黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)外植体愈伤组织的诱导；B.将前述愈伤组织接种到分化培养基中诱导生苗；C.将步骤B中未生根的幼苗移至生根培...
- 鲍锦库吴传芳安洁高顺赵曦常丽青荣艳珍吕鸿周何小佳洪志霞邓洁刘超顾莹陈放
- 文献传递
- 转麻疯树甜菜碱醛脱氢酶基因提高烟草耐盐性被引量：3
- 2008年
- 【目的】研究麻疯树甜菜碱醛脱氢酶(JcBD1)的功能。【方法】通过RT-PCR和RACE的方法从麻疯树中克隆甜菜碱醛脱氢酶基因(JcBD1)的全长cDNA序列。将从麻疯树中克隆的JcBD1 cDNA与CaMV 35S组成型启动子融合,构建植物表达载体pBI-JB,利用根癌农杆菌介导转入烟草。对获得抗性的植株用PCR、RT-PCR及Western杂交检测分析,同时测定转基因烟草植株的电导率、JcBD1酶活性及抗盐性等特性。【结果】由JcBD1 cDNA序列推测的JcBD1氨基酸序列与已知的BADH具有很高的同源性,包括BADH家族绝对保守区域十肽"VSMELGGKSP"和半胱氨酸残基。这两部分区域在甜菜碱醛脱氢酶底物特异性结合过程中起着重要作用,与酶的催化活性有关。PCR及RT-PCR检测证明外源JcBD1已整合到烟草基因组中并成功表达,转化率为56.7%。转基因植株的电导率明显低于未转基因植株。盐胁迫处理后,在转基因植株的蛋白提取样中能检测到Western杂交信号,而在未转基因植株中没有检测到杂交信号;转基因植株的蛋白提取样中能检测到甜菜碱醛脱氢酶活性,而对照没有活性,表明JcBD1在转基因植株中得到了表达。转JcBD1烟草在盐胁迫下,生长势明显强于未转基因植株。【结论】JcBD1能在异源植物中正常翻译、表达;JcBD1是盐害胁迫相关的重要基因。
- 张富丽蔡峰吴军陈放王云霄赵小光高顺
- 关键词：麻疯树甜菜碱醛脱氢酶烟草转基因耐盐性
- 麻疯树过氧化氢酶的分离纯化被引量：1
- 2010年
- 麻疯树种仁经抽提、硫酸铵盐析、Phenyl Sepharose CL-4B层析、DEAE-Sepharose F.F.层析,获得了纯化的麻疯树过氧化氢酶(CAT).该酶比活力为69.23 U/mg,纯化倍数为37.63倍.经Sephacryl S-300 HR测定,该酶表观分子量为232 kD,SDS-PAGE显示为一条分子量为59 kD的条带,表明该酶是由四个相同的分子量为59 kD的亚基组成.经等电聚焦测定该酶的等电点为4.7.经过温度和pH考察,该酶最适温度为30℃,最适pH为7.0.Mn^(2+)对酶活有促进作用,Zn^(2+)、Cd^(2+)、Mg^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(3+)、Co^(2+)有抑制作用.6×10^(-3)mmol/L NaN_3以及0.9 mmol/L KCN能使酶活丧失.该酶的V_(max)和K_m分别为5 U/mL·min,1.5 mmol/L.
- 陈林高顺唐琳陈放
- 关键词：麻疯树过氧化氢酶纯化酶学性质
- 囊丝黄精再生体系的建立方法
- 本发明公开了囊丝黄精再生体系的建立方法，其步骤为：A.囊丝黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)外植体愈伤组织的诱导；B.将前述愈伤组织接种到分化培养基中诱导生苗；C.将步骤B中未生根的幼苗移至生根培...
- 鲍锦库吴传芳安洁高顺赵曦常丽青荣艳珍吕鸿周何小佳洪志霞邓洁刘超顾莹陈放
- 文献传递
- 朱顶红凝集素的分子克隆和序列测定
- 朱顶红凝集素(Amaryllis vittata Agglutinin AVA)是一种来源于石蒜科植物朱顶红的具有多重生物学活性的甘露糖结合蛋白,自从1987年第一个石蒜科雪花莲凝集素被发现以来,石蒜科植物凝集素因其重要...
- 吴传芳王陈继常丽青荣艳珍高顺赵曦曾仲奎鲍锦库
- 文献传递
- 水稻巯基蛋白酶抑制剂的圆二色谱研究被引量：1
- 2005年
- 水稻巯基蛋白酶抑制剂(CPI)圆二色性谱(CD)显示206nm和222nm处的双负峰,CPI分子以α 螺旋构象为主;当CPI与木瓜蛋白酶等摩尔结合后,CPI完全丧失抑制活性,复合物CD谱发生显著变化,α 螺旋含量降低.CPI具有较高的结构稳定性,但在100℃处理时间延长以及pH向酸碱两极变化时,其CD谱发生较大改变,α 螺旋含量减少;而抑制活性仅在pH>9时逐渐下降,在酸性条件下保持不变.用不同试剂修饰CPI分子中的巯基和二硫键,CPI的活性不受影响;DTT、PCMB修饰CPI,其CD谱发生显著变化,NEM修饰CPI,其CD谱变化甚微.4mol/L的脲中,CD谱仅显示206nm负峰、214nm和225～235nm处新的负肩,并在240～250nm之间出现新的负峰,分子中无规卷曲增加,CPI活性未受影响;经NBS修饰,CPI分子中α 螺旋减少,无规卷曲增加较多,CPI完全丧失抑制活性.
- 荣艳珍赵曦常丽青高顺李宜瑾吕鸿周王陈继鲍锦库
- 关键词：抑制剂分子修饰抑制活性圆二色性
- 金属离子和变性条件对野花生豆凝集素活性和构象的影响被引量：1
- 2005年
- 野花生豆凝集素在pH7.0和pH5.0缓冲体系中,用EDTA去除其金属离子,CML凝血活性下降.Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+可使去除金属离子CML活性基本恢复到天然水平,表明这些二价金属离子为CML活性所必需.研究不同温度和不同浓度盐酸胍条件下CML的圆二色谱、荧光光谱及其凝血活性的变化,结果表明CML含有较多β 折叠,具有较强的抗变性能力;脲变性的时间扫描荧光光谱证实了CML变性过程的阶段性.
- 赵曦荣艳珍常丽青高顺吴传芳李宜瑾王陈继鲍锦库
- 关键词：野花生豆凝集素金属离子圆二色谱荧光光谱生物学活性
- 黄精凝集素Ⅱ的分子克隆研究
- 黄精凝集素Ⅱ是从中药黄精地下茎中分离纯化的一种甘露糖/唾液酸结合凝集素。其N-末端30个氨基酸顺序为VNSLSSPNSL FTGHSLEVGP SYRLIMPGDC。按照测定的N-端氨基酸序列,参照所有已知的相关凝集素的...
- 安洁段真胡晓佳荣艳珍高顺常丽青曾仲奎鲍锦库
- 文献传递
- 温度和酸碱度对黄精凝集素Ⅱ生物学活性与构象的影响研究被引量：2
- 2003年
- 采用圆二色谱和荧光光谱 ,研究了黄精凝集素Ⅱ (PCLⅡ )在不同温度及不同pH值时 ,其活性和分子构象变化的关系 ,结果表明 :PCLⅡ具有较强的温度和酸碱度的耐受性 ,但在80℃ ,pH 2 ,pH 4和 pH 12时 ,其分子构象发生较大变化 。
- 吕辉高顺荣艳珍赵曦安洁段真王陈继鲍锦库
- 关键词：温度酸碱度圆二色性生物学活性分子构象
