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本脑炎病毒蛋白与宿主蛋白的相互作用被引量：1: 2011年; 日本脑炎病毒（JEV）隶属于黄病毒科黄病毒属，所致的日本脑炎为经蚊虫传播的人畜共患疾病，主要累及中枢神经系统，病死率高，因其致病机制复杂，至今尚无特异治疗方法。近年研究表明，JEV蛋白与宿主细胞蛋白的相互作用对病毒复制、嗜神经毒力、神经细胞增殖／凋亡、IFN抵抗及诱导宿主保护性免疫等方面可产生重要影响。此文重点从JEV基因结构、病毒结构和非结构蛋白及其功能等层面，对JEV主要编码蛋白与宿主细胞蛋白相互作用与影响作了综述。; 丁德平冯国和; 关键词：病毒蛋白细胞凋亡

日本脑炎病毒核心蛋白酵母双杂交诱饵载体构建及鉴定: 2012年; 目的构建日本脑炎病毒核心蛋白(JEV C蛋白)基因的酵母双杂交诱饵载体,并检测其蛋白表达产物对酵母细胞的毒性及对酵母细胞内报告基因的自激活效应。方法 PCR扩增JEV C蛋白cDNA全基序并克隆入载体pGBKT7的EcoRI/BamHI酶切位点之间,酶切及测序鉴定;PEG/LiAc法将构建好的诱饵质粒pGBKT7-JC及载体pGBKT7分别转化入酵母菌株Y2H Gold感受态细胞,经酵母氨基酸缺陷培养及表型筛选检测其对酵母细胞毒性及自激活作用;用Western-blotting法分析酵母菌中诱饵蛋白BD-JC的表达。结果重组质粒pGBKT7-JC经酶切鉴定及测序结果与Genebank公布的JEV SA14-14-2株中JEV C蛋白编码基序完全一致;成功转化质粒pGBKT7-JC及空载体pGBKT7的酵母菌株Y2H Gold感受态细胞均只在SD/-Trp、SD/-Trp/X培养基上生长,二者菌落数、菌落大小、分布无明显差异且不变蓝,且SD/-Trp液体培养基30℃过夜培养测OD600值均>0.8,在SD/-Trp/X/A培养基上均不生长;经Western-blotting法检测到酵母菌能表达分子量约为35KDa的特异性融合蛋白BD-JC。结论成功构建了酵母双杂交诱饵表达质粒pGBKT7-JC;其诱饵蛋白BD-JC对酵母细胞无细胞毒性及自激活效应,为筛选及验证与pGBKT7-JC相互作用蛋白奠定实验基础。; 丁德平冯国和; 关键词：日本脑炎病毒酵母双杂交技术质粒构建诱饵蛋白

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丁德平

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