万民远
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：四川大学生命科学学院四川省分子生物学及生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 一种新型的基因突变重组方法及其应用
- 本发明属于基因工程领域，涉及到一种基因突变重组的方法以及在蛋白质(酶)基因突变文库建立中的应用。在扩增目标序列的聚合酶链式反应(PCR)体系中，通过PCR反应将核苷酸类似物2－脱氧次黄嘌呤核苷－5－三磷酸(dITP)随机...
- 冯红万民远杨庆军李念张义正
- 文献传递
- 短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的随机突变被引量：2
- 2010年
- 碱性蛋白酶(DHAP)属于丝氨酸蛋白酶家族(S8A),是由275个氨基酸残基组成的单链多肽,没有二硫键,以Asp32、His64、Ser221作为活性中心.采用易错PCR方法,对短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因(GenBank登录号:AY458140)进行随机突变.在大肠杆菌中建立随机突变文库,然后转化枯草芽孢杆菌WB600,构建枯草芽孢杆菌突变文库,筛选出酶活性提高或最适反应温度和pH值有所降低的突变体.通过3轮的随机突变和筛选,获得2个阳性突变体pP43AP-M166和pP43AP-M375.其中pP43AP-M166在不同的温度和pH条件下,与出发菌株相比,酶活都有不同程度提高,特别是当反应温度为50℃、pH为10时,突变蛋白酶酶活性提高1.23倍,表现出很好的热稳定性.测序结果表明,该突变体含有一个氨基酸置换,位于碱性蛋白酶催化三联体活性中心His64旁,与其只有一个氨基酸残基相隔.
- 杨锦冯红万民远焦惠科张晓露张义正
- 关键词：碱性蛋白酶短小芽孢杆菌定向进化易错PCR
