目的了解上世纪90年代以来我国部分地区禽源大肠杆菌和沙门菌分离株对1-4代喹诺酮类药物耐药情况。方法血清型采用常规的凝集试验进行测定;药敏纸片试验采用CLSI(clinical and laboratory standards institute)推荐的K-B药敏纸片法。结果344株禽源大肠杆菌分离株覆盖了27个血清型,其中O78、O2、O1和O18血清型菌株分别有141、47、27和22株,共237株,占定型菌株的68.90%;224株禽源沙门菌经血清型鉴定均为鸡白痢沙门菌。1993-1999年禽源大肠杆菌分离株仅对萘啶酸的耐药率超过60%(62.43%,113/181);2000-2008年禽源大肠杆菌分离株对1-3代9种喹诺酮类药物的耐药率均超过60%;禽源沙门菌从2000年起开始出现喹诺酮类耐药菌株,2000-2008年分离到的沙门菌对萘啶酸的耐药率达到了83.74%,但对其它喹诺酮类抗生素的耐药率相对较低。结论近20年来,我国禽源大肠杆菌和沙门菌对喹诺酮类药物的耐药性不断上升,10种喹诺酮类药物之间存在着不同程度的交叉耐药性,且禽源大肠杆菌比沙门菌对喹诺酮类药物的耐药性更为严重,交叉耐药情况亦更为复杂。
目的建立快速、特异性好、灵敏度高的Real-Time PCR方法定量检测沙门菌。方法根据编码沙门菌肠毒素基因stn的核苷酸序列,设计荧光探针和一对引物,通过对荧光定量PCR反应体系和反应条件的摸索,建立定量检测沙门菌的方法。结果建立的Real-Ti me PCR方法有很好的特异性与敏感性,所检测沙门菌结果均为阳性,而非沙门菌均为阴性;标准曲线相关系数为R2=0.993,其敏感性为5CFU。运用该方法对108份鸡粪便、50份鸡肉以及58份水样进行检测,阳性率分别为3.7%(6/108)、4%(2/50)和3.4%(2/58),与传统细菌分离检测结果相符。结论结果表明该方法具有简便、快速、特异性强、敏感性高等特点,此研究为环境及疾病诊断中沙门菌快速检测提供了新方法。
