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冷加燕: 作品数：18 被引量：19H指数：2; 供职机构：江苏大学附属人民医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金镇江市科技支撑计划(社会发展)项目江苏省卫生重大课题基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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CD44v17在胃癌组织中的表达及其与临床生物学特性之间的关系: 2011年; 目的探讨一种新的CD44变异体（CD44v17）在胃癌组织中的表达及其与临床生物学特性之间的关系.方法根据本实验室在MCF-7／Adr中新发现的1种CD44剪切拼接变异体CD44v17设计特异性引物,应用SYBR Green I荧光染料,采用实时PCR法检测87例胃癌组织及相应癌旁组织CD44v17 Mrna的表达,根据标准曲线计算CD44v17mRNA的表达量,分析CD44v17mRNA表达与胃癌临床生物学特性之间的关系.结果胃癌组织CD44v17 Mrna表达明显高于相应癌旁正常组织（P〈0.05）;肿瘤〉5 cm组CD44v17 Mrna表达与肿瘤≤5 cm组表达比较差异无显著性（P〉0.05）;未分化腺癌组表达明显高于乳头状腺癌及管状腺癌组（P〈0.05）,乳头状腺癌组CD44v17 Mrna表达与管状腺癌组比较差异无显著性（P〉0.05）;肿瘤累及浆膜及浆膜外组CD44v17 Mrna表达显著高于侵及黏膜、黏膜下层及肌层组（P〈0.05）,而肿瘤侵及黏膜及黏膜下层组的CD44v17 Mrna表达与侵犯肌层组表达比较差异无显著性（P〉0.05）.淋巴结转移组CD44v17 Mrna表达明显高于淋巴结无转移组（P〈0.05）;有肝脏转移组CD44v17 Mrna表达显著高于无肝脏转移组（P〈0.05）.结论CD44v17 Mrna在胃癌组织中高表达,可能与胃癌的侵袭、转移及预后有关.; 姚俊许文林冷加燕徐红美吴晓君陈巧云; 关键词：实时荧光定量PCR 胃癌

基于drop-off ddPCR方法检测急性髓系白血病C-KIT基因N822位点突变及其临床应用: 2024年; 目的:建立急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者C-KIT基因N822位点突变的drop-off微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法,并评价其临床应用价值。方法:针对C-KIT基因第17外显子设计一对引物及探针,优化drop-off ddPCR反应条件及体系,评价该方法的特异性、灵敏度、重复性,使用所建立的方法对140例已行Sanger测序的AML初诊患者骨髓标本进行检测,并用二代测序(next generation sequencing, NGS)验证结果;用drop-off ddPCR对3例阳性患者化疗后C-KIT突变频率进行动态监测。结果:drop-off ddPCR检测C-KIT基因N822位点突变的最适退火温度为54℃,空白检测限为1.62拷贝数/μL,最低检测下限为10.12拷贝数/μL,线性良好。140例AML初诊患者样本中Sanger测序检出2例阳性(1.4%),而ddPCR共检出突变7例(5.0%),突变频率为0.29%~7.41%;进一步应用常规NGS方法对ddPCR阳性样本进行验证,共检出阳性3例(2.1%),等位基因频率为1.26%~8.00%。动态监测3例阳性患者C-KIT突变频率,结果显示治疗达完全缓解时C-KIT突变频率明显下降甚至降低至0。结论:本研究建立了检测C-KIT基因N822位点突变的drop-off ddPCR技术,具有良好的方法学检测性能,其灵敏度高于Sanger测序和NGS,有望用于阳性患者缓解后的可检测残留疾病监测及治疗指导。; 李婷金晔袁倩姚冬明向鹤麟肖高飞于迪冷加燕林江钱军; 关键词：C-KIT基因急性髓系白血病

Drop-off微滴式数字PCR检测急性髓系白血病NRAS基因突变及其临床应用被引量：1: 2023年; 目的:建立检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)神经母细胞瘤RAS病毒癌基因同源物(NRAS)基因突变的drop-off微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法,并评价该方法的临床应用价值。方法:针对NRAS G12和G13突变位点设计特异性drop-off ddPCR引物和探针,建立最佳反应体系,并对该方法进行性能验证。应用该方法对140例临床样本进行初筛,其检测结果与Sanger测序进行比较,并用二代测序(next generation sequencing,NGS)进行验证。结果:建立drop-off ddPCR检测NRAS基因G12/G13突变的方法,灵敏度达0.158%,重复性、线性良好,其空白限为5.40拷贝数/μL,最低检测下限为15.84拷贝数/μL。在140例初诊AML患者中,drop-off ddPCR检出NRAS突变28例(20%),其突变负荷为0.26%~52.85%(中位2.14%);而Sanger测序仅检出7例(5%)阳性,为进一步验证,将21例Sanger测序结果阴性而drop-off ddPCR检测阳性的样本进行NRAS基因NGS,检出14例阳性,而另外7例NGS阴性的样本,其drop-off ddPCR检测突变频率为0.53%~1.50%(中位1.10%)。结论:建立了drop-off ddPCR技术检测AML患者中NRAS基因突变的方法,该方法灵敏度高,可用于对NRAS基因G12/G13突变进行定量检测,有望可用于AML患者预后判断和疾病监测。; 向鹤麟金晔袁倩姚冬明李婷于迪冷加燕冷加燕林江; 关键词：急性髓系白血病基因突变

老年弥漫大B细胞淋巴瘤(初治)临床路径(2023版): 2024年; 一、老年弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)(初治)临床路径标准(一)适用对象第一诊断为初诊DLBCL(ICD-10:C83.3),年龄≥60岁。(二)诊断依据根据2022年修订的第5版WHO淋巴组织肿瘤分类^([1])。1.临床表现:主要表现为无痛性进行性淋巴结肿大,但也可发生于淋巴结以外的器官或组织,包括胃肠道、肝、脾、中枢神经系统、睾丸、皮肤等,肿瘤浸润、压迫周围组织而出现相应临床表现。部分病人伴有乏力、发热、盗汗、消瘦等症状。2.体格检查:生命体征(体温、脉搏、呼吸、心率、血压、脉氧),一般状况评估[身高、体质量、体表面积、美国东部肿瘤协作组(eastern cooperative oncology group,ECOG)评分],淋巴结肿大区域(包括waldeyer环),肝脾肿大情况,有无其他结外受累的病灶,贫血、出血相关体征,有无感染病灶等。; 江苏淋巴瘤协作组江苏省老年医学学会淋巴瘤分会朱华渊冷加燕柳萍张亚平范磊于亮李炳宗顾伟英施文瑜; 关键词：弥漫大B细胞淋巴瘤感染病灶肝脾肿大淋巴结肿大体表面积

来那度胺治疗血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤3例被引量：2: 2020年; 1临床资料1.1病例1患者女性,66岁。2013年6月出现发热、皮疹,伴瘙痒。查体及淋巴结彩超:体温38.3℃,全身多处皮肤可见红色斑丘疹,压之不褪色,双侧颈部、腋窝、锁骨上、腹股沟、腹主动脉旁淋巴结肿大,最大直径约32 mm×17 mm,双侧扁桃体无肿大。; 马贝贝冷加燕马玉娟杨磊张永宁季勇慧钱震钱军; 关键词：淋巴瘤 T细胞来那度胺血管免疫母细胞淋巴结病

CD44变异体(CD44v17)在食管癌中的表达及意义: 2011年; 目的:探讨CD44v17在食管癌中的表达及意义。方法:根据本实验室在MCF-7/Adr中发现的一种CD44剪切拼接变异体CD44v17(基国库序列号FJ216964)设计特异性引物,采用实时定量PCR法检测了73例食管癌组织及相应癌旁组织CD44v17 mRNA的表达情况,分析CD44v17 mRNA表达与食管癌临床生物学特性之间的关系。结果:食管癌组织CD44v17 mRNA表达明显高于相应癌旁正常组织(P<0.05);食管癌CD44v17 mRNA表达与肿瘤的大小、发生部位、病理类型均无相关性(P>0.05),而与食管癌的分化程度、临床TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。结论:CD44v17 mRNA在食管癌组织中高表达,可为临床预测食管癌恶性程度,浸润转移潜能,评估预后提供一种重要的参考指标。; 姚俊许文林冷加燕徐红美吴晓君李皓陈巧云; 关键词：实时定量PCR 食管癌淋巴结转移

Hsa-mir-216a真核表达载体的构建及其在胃癌细胞SGC7901/DDP中的表达: 2011年; 目的:构建人mir-216a真核表达载体,实现其在胃癌细胞SGC7901/DDP中的表达,为进一步研究mir-216a的功能打下基础。方法:依据miRBase数据库中pre-mir-216a序列设计引物;PCR扩增pre-mir-216a基因并将其克隆至pGenesil-1载体;将pGenesil-1-hsa-mir-216a质粒转染SGC7901/DDP细胞,RT-PCR及实时定量RCR法检测成熟mir-216a在SGC7901/DDP细胞中的表达。结果:pGenesil-1-hsa-mir-216a质粒经酶切及测序鉴定正确;pGenesil-1-hsa-mir-216a质粒转染进SGC7901/DDP细胞后,RT-PCR检测mir-216a成熟体表达明显增强,实时定量PCR检测S/D/mir-216a组mir-216a成熟体表达较S/D/HK组上调(63.530±0.159)倍(t=1.201,P<0.01)。结论:成功构建了pGenesil-1-hsa-mir-216a真核表达质粒,并在胃癌细胞SGC/DDP中高效表达。; 徐红美许文林姚俊冷加燕吴晓君陈巧云; 关键词：真核表达载体转染

YB-1腺病毒载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞耐药性的影响被引量：2: 2011年; 目的:构建携带人YB1基因的重组腺病毒载体,并观察其对乳腺癌细胞株MCF-7药物敏感性的影响,并分析其可能的机制。方法:设计含有BglⅡ和HindⅢ酶切位点的引物,PCR克隆人YB1基因,插入穿梭载体pAdTrack-CMV,与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠埃希菌BJ5183内同源重组,获得重组子pAdEasy-1-hYB1,转染293A细胞,包装获得含hYB1的重组腺病毒(AdYB1),体外转染MCF-7细胞。采用MTT法分析在As2O3作用下YB1对MCF-7细胞半数抑制浓度(IC50)的影响;采用Annexin V/PI双染法,经流式细胞仪分析在As2O3作用下YB1对MCF-7细胞凋亡的影响。结果:成功构建了含有hYB1基因的腺病毒载体AdYB1,该重组腺病毒能显著提高MCF-7细胞的YB1mRNA及蛋白的表达水平,转染YB1组能够增加MCF-7细胞对AS2O3的IC50值;通过Annexin V/PI检测证实YB1能够抑制早期细胞凋亡。结论:成功构建含有hYB1基因的腺病毒载体AdYB1,能高效感染MCF-7,并通过抑制早期细胞凋亡提高MCF-7细胞对As2O3的耐药性。; 冷加燕许文林沈慧玲龙璐璐吴晓君陈巧云姚俊; 关键词：MCF-7细胞腺病毒载体耐药

YB-1对乳腺癌MCF-7细胞CD44表达和细胞侵袭及成球能力的影响被引量：2: 2011年; 目的:观察Y-盒结合蛋白1(Y-box binding protein-1,YB-1)对乳腺癌MCF-7细胞CD44表达及细胞迁移、成球能力的影响。方法:应用基因重组技术将YB-1基因及其siRNA构建于腺病毒载体pADeasy-1,重组腺病毒及腺病毒空载体转染乳腺癌细胞株MCF-7;通过蛋白质印迹法,RT-PCR和免疫荧光的方法检测YB-1和CD44的表达;MTT法检测转染后细胞生长速度,并绘制生长曲线;并通过Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力;细胞使用无血清培养基培养,并加入表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)后,观察YB-1对细胞成球能力的影响。结果:蛋白质印迹法和RT-PCR结果显示,转染YB-1重组腺病毒载体的MCF-7细胞中,YB-1和CD44的表达明显高于转染腺病毒空载体组和未转染组;相反,转染YB-1 siRNA重组腺病毒载体的MCF-7细胞中,YB-1和CD44表达明显低于对照腺病毒空载体组和未转染组;免疫荧光也证实CD44蛋白水平与YB-1表达正相关。细胞生长曲线表明,转染YB-1重组腺病毒载体组的细胞生长速度最快,而且其侵袭、迁移和成球能力最强。结论:YB-1可能通过调控CD44的表达影响人乳腺癌细胞MCF-7的侵袭及成球能力。; 吴晓君许文林冷加燕龙璐璐朱小兰李皓姚俊徐红美陈巧云惠璐璐; 关键词：YB-1 CD44 乳腺癌 MCF-7细胞株

基于硼替佐米的VCD方案治疗初发多发性骨髓瘤合并肾功能不全的效果观察被引量：2: 2021年; 目的研究硼替佐米联合环磷酰胺、地塞米松方案(VCD方案)对初发多发性骨髓瘤合并肾功能不全的化疗效果。方法选取该院2018年1月至2020年10月收治的11例初发多发性骨髓瘤合并肾功能不全患者作为研究对象,采用VCD方案进行化疗。具体方案为:硼替佐米1.3 mg/m^(2)(第1、4、8、11天),环磷酰胺500 mg/m^(2)(第1、8、15、22天),地塞米松20 mg(第1~2、8~9、15~16、22~23天)。观察化疗后肾功能恢复情况及基础病疗效、相关不良反应,评估其安全性。结果11例患者经治疗后多发性骨髓瘤总缓解率为81.8%。化疗前肾功能指标血肌酐为(498.55±107.06)μmol/L,化疗后为(193.36±51.45)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05),肾功能不全总缓解率为90.9%。不良反应主要为化疗后骨髓抑制继发白细胞、血小板下降,主要为3级以下血液学毒性;外周神经损伤以1~2级为主,未影响化疗的执行。结论VCD方案对合并肾功能不全初发多发性骨髓瘤具有良好疗效,可实现肾功能的逆转恢复,不良反应及不良反应相对较轻,可作为多发性骨髓瘤合并肾功能不全治疗的一线选择。; 钱震钱军冷加燕于迪; 关键词：硼替佐米环磷酰胺肾功能不全

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