刘忠华
- 作品数：10 被引量：51H指数：4
- 供职机构：湖南农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：湖南省科技重大专项国家自然科学基金湖南省科技厅重点项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 首次从国内鉴定到猪肠道杯状病毒及其分子流行病学调查被引量：12
- 2009年
- 目的了解国内猪札如病毒（猪肠道杯状病毒成员）的存在和流行情况。方法从多个腹泻猪场共采集腹泻猪粪便189份，采用RT-PCR方法进行分子流行病学调查。结果检出猪札如病毒阳性病料24份，阳性率为12.70%（24/189）。测序后与国外已发表的毒株比较，表明了所测定流行毒株的序列与猪札如病毒代表株Cowden相近（同源性介于75.6%-88.3%之间），证实了其均为猪札如病毒。结论首次发现我国猪群中存在猪札如病毒。
- 黄泽彬余兴龙李润成谢小雨尹德明颜运秋白霞刘忠华丁建汪镇南黎满香
- 关键词：腹泻
- 猪'高热病'相关猪繁殖与呼吸综合征病毒不同缺失变异株Nsp2基因、糖蛋白基因的克隆与遗传变异分析
- 从湖南省内各地区多个出现可疑猪'高热病'症状的猪场共采集病料70份,采用RT-PCR方法进行分子流行病学调查。检出PRRSV阳性病料54份,阳性率高达77.14％(54/70)。对其中八份分别来自湖南娄底、淑浦、益阳、浏...
- 黄泽彬刘忠华丁建汪镇南李润成余兴龙
- 关键词：猪高热病猪繁殖呼吸综合征病毒糖蛋白
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株检测、分离及病毒特性的研究
- 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS Virus,PRRSV)引起猪的一种新型传染病。该病自198...
- 刘忠华
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株RT-PCR
- 文献传递
- 卵黄抗体和灭活疫苗同时注射紧急预防H5N1亚型禽流感被引量：5
- 2008年
- 丁建余兴龙白霞刘春红李润成黄泽彬汪镇南刘忠华
- 关键词：H5N1亚型禽流感病毒灭活疫苗卵黄抗体A型流感病毒公共卫生意义
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病RT-PCR快速鉴别诊断方法的建立与临床应用被引量：18
- 2008年
- 根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2基因的缺失信息,设计了3条特异性引物,以含高致病性PRRSVNsp2基因的质粒pMDNSP2及普通PRRSVVR2332株RNA为模板,建立了快速诊断高致病性PRRSVRT-PCR方法。通过对临床组织病料的总RNA进行不同稀释倍数检测,结果表明该方法能从0.265pg的总RNA中检测到PRRSV的基因,说明敏感性高。用该方法对猪瘟病毒(CSFV)、Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)、伪狂犬病病毒(PRV)、链球菌(Streptococcus)、副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis)和大肠杆菌(Escherichiacoli)同条件检测,结果都为阴性。进一步对36份疑似高致病性PRRSV临床组织病料细胞培养物、2株PRRSV商品活疫苗以及52个猪场所送检的184份临床样品进行了检测应用,结果36份疑似高致病性PRRSV临床组织病料的细胞培养物有5份样品为阳性且都为高致病性PRRSV,2株PRRSV商品活疫苗为普通PRRSV,52个猪场中有42个猪场(123份样品)呈阳性,其中只有1份为普通PRRSV。实验表明该方法能够准确地鉴别诊断高致病性PRRSV和普通PRRSV,且具有快速、敏感和特异的特点,具有临床实用性。
- 刘忠华余兴龙李润成黄泽彬廖立珊白霞李晶向卫军汪镇南丁建
- 猪Ⅱ型圆环病毒ORF2与猪GM-CSF基因重组腺病毒共表达及免疫效果分析
- 2009年
- 旨在构建含融合基因pGMCSF-ORF2的重组腺病毒,并对其表达水平和免疫效果进行分析。运用PCR方法扩增PCV2ORF2和pGM-CSF基因,拼接后克隆入pMD18-T载体,然后再亚克隆入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,阳性穿梭质粒经PmeⅠ酶线性化后电转化含腺病毒基因组(AdEasy-1)的大肠杆菌细胞BJ5183-Ad-1,成功获得了重组腺病毒DNA。将纯化后的重组腺病毒DNA转染AD293细胞,经过病毒基因组的PCR和转录水平的RT-PCR及Westernblot等方面对融合蛋白的表达进行了鉴定。以该病毒免疫Babl/c小白鼠,对免疫小鼠血清中PCV2抗体进行检测。结果显示,获得了pGMCSF-ORF2重组基因,重组腺病毒载体构建成功,获得了表达pGMCSF-ORF2融合蛋白的重组腺病毒。该病毒免疫小鼠后,在小鼠血清中检测到了PCV2的特异性抗体。获得的重组腺病毒能有效表达pGMCSF-ORF2融合蛋白,且可诱导小鼠产生针对PCV2的特异性抗体。
- 陈降华刘忠华李文平
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白部分基因序列与大肠杆菌LTB成熟肽基因的融合表达及免疫原性研究被引量：6
- 2007年
- 为了获得猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)衣壳蛋白(Cap)基因3’端396 bp的片段与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)成熟肽编码区融合基因的高效表达,并检验重组蛋白的免疫保护效果。以含PCV-2全基因组的pMDT PCV-2质粒为模板,用PCR的方法扩增PCV-2 Cap基因,并将其克隆到pET28a(+)中,构建得到pET-Cap质粒,利用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切切下Cap基因3’末端396 bp的片段,插入到pET-LTB原核表达质粒LTB基因的3’末端,从而构建pET-LTB△Cap原核表达质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS后,用IPTG诱导重组菌,用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物。表达产物经初步纯化后用昆明系小白鼠做免疫保护实验。结果表明:pET-LTB△Cap重组融合表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白分子量约为29Ku,表达量约占菌体蛋白的36.67%,融合蛋白能被PCV-2阳性血清识别。攻毒后,所有小鼠临床表现正常。用PCR检测有1/8的免疫小鼠感染了PCV-2,而对照组8只小鼠都感染了PCV-21。PCV-2 Cap基因3’端396 bp的片段与LTB基因融合能实现高效表达,表达产物免疫的小白鼠可抵抗PCV-2的攻击此研究为PCV-2基因工程疫苗的研究奠定了基础。
- 侯强红余兴龙李微李润成罗维刘浩尹恒刘忠华
- 关键词：猪圆环病毒2型免疫原性
- O型口蹄疫病毒代表性抗原VP1基因的人工合成与表达及其免疫原性检测被引量：4
- 2008年
- 通过对GenBank近10年内收录的O型口蹄疫(FMD)病毒VP1基因序列的同源性比较分析,并根据中国、老挝、缅甸等国家FMDV流行毒株的基因序列,设计并合成了有群内抗原代表性的结构蛋白VP1全基因序列.将合成的序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建了VP1的表达质粒pETVP1.SDS-PAGE和Western-blot分析表明,该质粒的BL21(DE3)LysS转化菌在IPTG诱导下可特异性表达VP1蛋白,该重组蛋白以包涵体的形式存在,相对分子质量约30 000,能与口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清发生特异性反应.动物接种试验表明,重组蛋白能诱导小白鼠产生特异性抗FMDV抗体.
- 李润成余兴龙白霞侯强红罗维刘忠华向卫军
- 关键词：口蹄疫病毒VP1基因免疫原性
- 一例猪繁殖与呼吸综合症病毒变异株感染的实验室诊断报告被引量：1
- 2008年
- 本实验通过免疫学和分子生物学的方法,对湖南省浏阳市某疫区猪场是否存在猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)变异株感染进行了确诊,并对该病的诊断和防控做出了讨论。
- 李润成刘忠华向卫军王亚余兴龙
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒变异株免疫学分子生物学
- 高致病性PRRSV缺失变异株Nsp2基因的克隆与遗传变异分析被引量：3
- 2008年
- 从湖南省内多个出现疑似猪"高热病"症状的猪场采集病料70份,采用RT-PCR方法进行分子流行病学调查.结果检出PRRSV阳性病料54份,阳性率高达77.14%(54/70).对其中8份分别来自娄底、浏阳、永州、双峰、益阳、株洲、宁乡和溆浦的病料中的PRRSV基因组Nsp2高变区部分基因片段进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定分析.与国内外美洲型PRRSV分离株比较,序列相似性为72.2%～100%,其中,与公布的高致病性PRRSV缺失变异毒株的同源性最高,序列相似性为98.2%～100%.序列分析表明,这些毒株均是天然存在缺失的变异毒株,其Nsp2均有2个部位出现了缺失,分别为编码1个氨基酸的3个核苷酸的缺失和编码29个氨基酸的连续87个核苷酸的缺失,与高致病性PRRSV缺失变异毒株序列的缺失情况完全一致,且与其具很高的同源性,从而确定了分离的毒株均为引起猪"高热病"的猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株,这是国内外少见的PRRSV缺失变异及毒力显著增强的现象.
- 黄泽彬李润成尹德明颜运秋刘忠华丁建汪镇南余兴龙
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因
