刘晓宁
- 作品数：9 被引量：25H指数：3
- 供职机构：华北煤炭医学院附属医院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金河北省科技领军人才创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 骨髓基质干细胞成骨分化过程中Wnt、骨形态发生蛋白2信号通路相关因子与辛伐他汀的作用被引量：4
- 2011年
- 背景:辛伐他汀可促进体外培养的人或鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化,但作用机制尚不清楚。目的:观察辛伐他汀对大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化过程中Wnt与骨形态发生蛋白2信号途径中相关因子表达的影响。方法:取6周龄雌性SD大鼠双侧股骨、胫骨全骨髓进行体外成骨细胞诱导培养。实验分为对照组及SIM组。SIM组加入浓度为10-7mol/L辛伐他汀,对照组加入等量无水乙醇和PBS。培养14d,行碱性磷酸酶染色,28d时,行vonKossa染色观察细胞外基质矿化情况;培养14,21d,免疫荧光细胞化学染色观察成骨细胞中β-catenin,Smad1/5,Cbfa1的表达及分布。结果与结论:大鼠骨髓基质干细胞经体外诱导后可分化为具有碱性磷酸酶活性和矿化细胞外基质能力的成熟成骨细胞。辛伐他汀可显著上调骨髓基质干细胞成骨分化过程中碱性磷酸酶的表达。同时,与对照组比较,SIM组β-catenin,Smad1/5,Cbfa1表达明显增多(P<0.05),且呈现明显的核内聚集趋势。说明辛伐他汀促进骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的作用可能与调控Wnt与骨形态发生蛋白2信号通路中相关因子的表达及细胞内分布有关。
- 靳云乔张柳田发明张磊程潭刘晓宁
- 关键词：骨髓基质干细胞成骨细胞WNT信号通路辛伐他汀
- 阿仑膦酸钠体外对软骨细胞的影响及对兔前交叉韧带切断后关节软骨和软骨下骨的作用被引量：2
- 2009年
- 目的探讨阿仑膦酸钠(alendronate,ALN)对受IL-1β干预后软骨细胞的影响,以及对前交叉韧带切断术(anterior cruciate ligament transection,ACLT)后兔骨性关节炎模型关节软骨和软骨下骨的保护作用。方法取3月龄雄性日本大耳白兔关节软骨采用酶消化法分离软骨细胞,并进行体外培养。取第3代软骨细胞随机分为3组:ALN组(A1组)及IL-1β组(B1组),采用含10ng/mL人重组IL-1β的DMEM完全培养液培养2d后,分别更换含或不含1×10-6mol/L ALN的DMEM完全培养液培养3d;空白组(C1组)细胞以DMEM完全培养液培养5d。取各组细胞行ColⅡ及MMP-13免疫细胞化学染色观察及实时RT-PCR检测。另取24只3月龄雄性日本大耳白兔,随机分为3组(n=8)。ACLT+ALN组(A2组)及ACLT组(B2组)制备ACLT模型,假手术组(C2组)以同法显露前交叉韧带后缝合切口。术后4d A2组以10μg/(kg·d)皮下注射浓度为25μg/mL的ALN,B2组和C2组予等量生理盐水。8周后处死动物行膝关节大体观察,取股骨内侧髁行组织学观察及ColⅡ及MMP-13免疫组织化学染色观察,对胫骨进行软骨下骨组织形态学分析。结果C1组软骨细胞胞浆中见ColⅡ免疫细胞化学染色表达呈强阳性,A1组呈阳性表达,B1组少见阳性显色。A1组积分吸光度(IA)值高于B1组(P<0.05),与C1组差异无统计学(P>0.05)。C1组软骨细胞胞浆中未见MMP-13免疫细胞化学染色阳性表达,A1组呈阳性表达,B1组呈强阳性表达。A1组IA值低于B1组(P<0.05),但高于C1组(P<0.05)。实时RT-PCR检测示A1组ColⅡmRNA表达高于B1组(P<0.05),与C1组差异无统计学意义(P>0.05);MMP-13mRNA表达低于B1组(P<0.05),但高于C1组(P<0.05)。体内实验8周后C2组膝关节面无溃疡,A2组膝关节面有少量溃疡,B2组关节面溃疡较多并有全层溃疡。A2组Mankin评分低于B2组(P<0.05),但高于C2组(P<0.05)。免疫组织化学染色见C2组关节软骨中ColⅡ蛋白表达呈强阳性,A2组呈阳性表达,B2组少见阳性显色;A2组IA值�
- 胡宏宇张柳李彬张尹娜刘晓宁田发明程潭王哲彦
- 关键词：阿仑膦酸钠MMP-13
- 辛伐他汀对人骨髓基质干细胞向成骨细胞分化过程的影响
- 2009年
- 目的:观察辛伐他汀(SIM)对体外人骨髓基质干细胞(hBMSCs)向成骨分化的影响,探讨其刺激成骨的作用机制.方法:取健康成人骨髓进行体外成骨诱导培养,实验分为对照组(G1):不给予药物干预;实验组(G2):传代后加入SIM1×10-7mol/L.于传代后7,14,21d采用RealtimeRT-PCR检测mRNA水平和BMP-2,Smad1,β-catenin,Frizzled2的表达,并用免疫组织化学检测蛋白水平β-catenin的表达.传代后7d行细胞碱性磷酸酶(ALP)染色和比活性检测;传代后21d行vonKossa染色,检测细胞外基质矿化.结果:SIM作用后7,14,21d3个不同时间点,BMP-2表达均显著高于对照组;Smad1在成骨诱导14,21d时表达高于G1,其余组间差异均不显著;β-catenin免疫组织化学染色2组差异不显著;G2组ALP表达和矿化能力均显著高于G1组.结论:SIM1×10-7mol/L可促进体外成骨诱导培养的hBMSCs向成骨细胞分化,上调TGF-β/BMPs信号通路部分信号分子表达,但未能显著改变Wnt/β-catenin信号通路部分相关因子的表达.
- 牛军强张柳张磊刘晓宁田发明韩大成
- 关键词：辛伐他汀人骨髓基质干细胞成骨细胞BMP-2实时定量聚合酶链反应
- RNA干扰Axin2对大鼠骨髓基质干细胞的成骨分化及Wnt信号途径相关因子mRNA表达的影响
- 2010年
- 我们利用已建立的大鼠BMSCs体外培养模型，在诱导其成骨分化同时对Axin2进行RNA干扰（RNAi），从而探讨Axin2基因沉默对骨髓基质于细胞（BMSCs）向成骨细胞分化过程以及Wnt信号途径的影响。
- 张磊张柳高建清田发明韩大成牛军强刘晓宁
- 关键词：WNT信号途径RNA干扰成骨分化MRNA表达体外培养模型
- RNA干扰Axin2对大鼠骨髓基质干细胞的成骨分化表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的通过对大鼠Axin2基因的RNA干扰(RNAi),探讨Axin2对大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化过程的影响。方法取6周龄雌性SD大鼠双侧股、胫骨骨髓细胞,采用全骨髓培养法进行原代和传代培养。细胞传2代后实验组进行Axin2 mRNA干扰质粒转染,对照组进行阴性干扰质粒转染。转染48 h后换用成骨诱导分化培养基。诱导分化28 d后用von Kossa方法进行细胞外基质矿化染色。采用适时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)技术检测诱导分化后第7、14天β-catenin、骨钙素(OCN)、frizzled-2、Lef-1、Wnt5a mRNA的表达水平。结果对照组大鼠BMSCs经体外诱导后分化为具备矿化细胞外基质能力的成熟成骨细胞,而实验组BMSCs成骨分化不全;RQ-PCR检测显示,诱导分化后第7天实验组β-catenin、frizzled-2 mR-NA表达水平显著低于对照组,而OCN、Lef-1、Wnt5a mRNA表达水平显著高于对照组;诱导分化后第14天实验组frizzled-2、Lef-1和Wnt5a mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。结论对大鼠BMSCs Axin2进行RNAi后,BMSCs向成骨细胞分化晚期细胞外基质矿化能力减弱。
- 张磊张柳高建清田发明韩大成牛军强刘晓宁
- 关键词：成骨细胞RNA干扰干细胞WNT信号转导途径
- 降钙素在体内体外实验中对兔关节炎关节软骨退变及软骨下骨骨代谢的影响被引量：9
- 2009年
- [目的]研究降钙素(calcitonin,CT)对骨性关节炎关节软骨退变和软骨下骨骨代谢的影响。[方法]30只3个月龄雌性日本大耳白兔随机分为三组,其中两组行右膝关节前交叉韧带切断术(anterior cruciate ligament trans-action,ACLT),分为ACLT+CT组和ACLT+NS组,第3组为Sham组。ACLT+CT给予每日1次皮下注射降钙素5IU/(kg.d),持续8周,ACLT+NS组给予同样剂量生理盐水。术后8周后处死所有动物。取股骨髁制成切片行MMP-13和Ⅱ型胶原免疫组化染色。取胫骨近端制成硬组织切片行骨形态计量学检测。体外实验中,取兔膝关节软骨,经消化、培养,将第3代软骨细胞分三组:向IL-1β组加入人重组IL-1β(10ng/ml)。IL-1β+CT组加入人重组IL-1β(10ng/ml)2d后,再向培养液中加入CT(50ng/ml)。正常组不加任何诱导剂和干扰剂培养。然后行MMP-13、Ⅱ型胶原免疫组化检测和Realtime RT-PCR法检测。[结果]Sham组和ACLT+CT组软骨下骨骨小梁相对体积和厚度等均显著高于ACLT+NS组。Sham组和ACLT+CT组的Ⅱ型胶原的光密度值均显著高于ACLT+NS组,而MMP-13的光密度值显著低于ACLT+NS组(P<0.05)。正常组和IL-1β+CT组的Ⅱ型胶原光密度值均显著高于IL-1β组而MMP-13的光密度值都显著低于IL-1β组(P<0.05)。在正常组和IL-1β+CT组中Ⅱ型胶原的mRNA含量均显著高于IL-1β组而MMP-13的mRNA含量均显著低于IL-1β组(P<0.05)。[结论]降钙素5IU/(kg.d)皮下注射能够增加ACLT兔膝关节软骨Ⅱ型胶原的分泌和抑制MMP-13的表达,并可能通过调节软骨下骨的骨代谢和微结构来保护关节软骨;CT(50ng/ml)能增加体外培养的含有IL-1β(10ng/ml)的软骨细胞中Ⅱ型胶原的含量和抑制MMP-13分泌。
- 李彬张柳胡宏宇刘晓宁张磊张尹娜田发明常婷婷张岩杨健
- 关键词：降钙素骨性关节炎关节软骨软骨下骨
- 辛伐他汀对大鼠BMSCs成骨诱导Wnt信号传导通路相关因子mRNA表达的影响被引量：9
- 2009年
- 目的探讨辛伐他汀(simvastatin,SIM)对大鼠BMSCs成骨分化过程中Wnt信号传导通路相关因子mRNA表达的影响,研究SIM促进BMSCs成骨分化的作用机制。方法取6周龄雌性SD大鼠双侧股骨、胫骨骨髓细胞,全骨髓培养法进行原代和传代培养。取第2代细胞换用成骨诱导培养基培养,并将细胞分为2组,实验组加入1×10-7mol/LSIM,对照组加入等量无水乙醇和PBS。诱导培养7d倒置相差显微镜观察两组细胞形态,并行ALP染色观察;培养28d行vonKossa染色观察ECM矿化;培养7、14d采用实时定量PCR检测Wnt信号传导通路相关因子Axin2、β-catenin、骨钙素(osteocalcin,OC)、frizzled-2、Lef-1、Wnt5amRNA的表达。结果诱导培养7d倒置相差显微镜观察显示,实验组以多边形和三角形细胞居多;对照组细胞多呈长梭形,少数为小圆形或三角形。诱导培养7dALP染色观察显示,实验组细胞质中出现蓝染的ALP,阳性染色细胞和区域明显多于对照组;培养28dvonKossa染色观察显示,两组细胞均可见点状及片状钙沉积,与对照组相比,实验组钙沉积明显增多。实时定量PCR检测显示,诱导培养7d,实验组Axin2mRNA表达水平显著低于对照组,frizzled-2、Lef-lmRNA表达水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);其余各因子mRNA表达两组差异无统计学意义(P>0.05);培养14d,实验组除β-catenin外,其余各因子mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。结论SIM可促进BMSCs向成骨细胞分化,并伴Wnt信号途径相关因子mRNA表达水平的改变。
- 张磊张柳田发明韩大成牛军强刘晓宁
- 关键词：BMSCS成骨诱导分化信号传导通路辛伐他汀
- 辛伐他汀对幼鼠骨小梁中骨形成相关因子表达以及BMSCs成骨分化的影响被引量：1
- 2011年
- 目的既往研究表明辛伐他汀具有促成骨作用,现探讨辛伐他汀对幼鼠骨小梁中骨形成相关因子表达以及BMSCs成骨分化的影响。方法 40只1周龄雄性SD大鼠,体重17.5～19.5 g,随机分为2组,每组20只。实验组于大鼠颈部皮下注射辛伐他汀注射液[5 mg/(kg.d)],对照组同法注射等剂量生理盐水。于注射后1、3周,两组分别脱颈处死10只大鼠,采用免疫组织化学染色检测胫骨上端骨小梁BMP-2、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)、VEGF的表达情况。注射后1、3周,两组分别取大鼠双侧股骨,采用全骨髓培养法体外分离培养BMSCs,取第1代BMSCs成骨诱导培养,培养后14 d行ALP染色,培养后21 d采用实时荧光定量PCR检测BMP-2、Runx2、Osterix、Msx2、Dlx3、Dlx5 mRNA的表达,培养后28 d行von Kossa染色。结果免疫组织化学染色示注射后1、3周两组胫骨上端骨小梁BMP-2、MMP-13、VEGF表达,差异均无统计学意义(P>0.05)。成骨诱导培养14 d,注射后1、3周两组ALP染色阳性细胞百分比差异均无统计学意义(P>0.05);成骨诱导培养21 d,实时荧光定量PCR检测示注射后1、3周两组BMP-2、Runx2、Osterix、Dlx3、Dlx5、Msx2 mRNA表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);成骨诱导培养28 d,注射后1、3周两组钙结节单位面积比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论皮下注射辛伐他汀5 mg/(kg.d)后1、3周对幼鼠骨小梁中骨形成相关因子表达以及BMSCs成骨分化无明显影响。
- 张柳刘晓宁田发明张辉韩大成
- 关键词：辛伐他汀BMSCS成骨分化
- 辛伐他汀对幼鼠骨发育及骨髓基质干细胞成骨分化的影响
- 2010年
- 背景:辛伐他汀作为常用降脂类药物,表现出一定的促成骨分化和骨形成作用,但目前的研究结果尚有争论,尤其对幼鼠骨发育的影响并无报道。目的:课题创新性设计观察辛伐他汀对幼鼠骨小梁骨形成相关因子表达以及骨髓基质干细胞成骨分化的影响。方法:1周龄雄性SD大鼠20只,随机分为实验组和对照组,每组10只。实验组皮下注射辛伐他汀[5mg/(kg·d)]2周,对照组给与安慰剂2周。采用免疫组织化学方法检测胫骨上端骨小梁成骨相关因子骨形态发生蛋白2、基质金属蛋白酶13、血管内皮生长因子等因子的表达情况;取双侧股骨骨髓基质干细胞向成骨方向诱导培养。培养14d分别进行碱性磷酸酶染色,21d采用Real-timePCR法检测骨形态发生蛋白2、RUNX2、Osterix、MSX2、DLX3、DLX5等成骨过程中相关因子mRNA的表达,28d进行vonKossa染色。结果与结论:①实验组和对照组胫骨上端骨小梁骨形态发生蛋白2、基质金属蛋白酶13、血管内皮生长因子等因子的表达差异无显著性意义。②两组碱性磷酸酶染色阳性细胞(胞浆蓝黑色)比例均在30%左右,差异无显著性意义(P>0.05)。③骨髓基质干细胞向成骨细胞诱导分化过程中相关因子骨形态发生蛋白2、RUNX2、Osterix、DLX3、DLX5、MSX2mRNA表达水平差异无显著性意义。④vonKossa染色可见大小不等染为棕黑色的钙化点,其大小和密度两组比较差异无显著性意义。结果表明,皮下注射辛伐他汀[5mg/(kg·d)]2周不能显著影响幼鼠骨小梁骨形成相关因子表达以及骨髓基质干细胞成骨分化。
- 刘晓宁张柳田发明张辉韩大成牛军强张磊
- 关键词：辛伐他汀骨形成骨髓基质干细胞成骨分化
