目的探讨不同剂量粉尘螨提取液对哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Regulatory T cells,Tregs)的影响,确定粉尘螨提取液免疫治疗的最佳维持剂量。方法用粉尘螨提取液经腹腔注射C57BL/6小鼠,建立过敏性哮喘模型,将32只哮喘小鼠随机分为4组:生理盐水组以及粉尘螨低(100μg/只)、中(1 mg/只)和高(2 mg/只)剂量组,治疗完成后,采用流式细胞术检测小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞及Foxp3+CD4+CD25+Tregs的含量,ELISA法检测小鼠血清中细胞因子IL-10、TGF-β1的水平。结果生理盐水组、粉尘螨低剂量组小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的百分比均明显低于粉尘螨中剂量组和高剂量组(P均<0.05),而中剂量组与高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05);生理盐水组、粉尘螨低剂量组脾细胞中Foxp3+CD4+CD25+Tregs占CD4+CD25+T细胞的百分比均明显低于粉尘螨中剂量组和高剂量组(P均<0.05),而中剂量组与高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05);生理盐水组、粉尘螨低剂量组小鼠血清中IL-10和TGF-β1的水平均明显低于粉尘螨中剂量组和高剂量组(P均<0.05),而中剂量组与高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论中剂量粉尘螨提取液为哮喘特异性免疫治疗的最佳维持剂量。
目的:制备能够表达大鼠血清淀粉样物质P(Serum amyloid P component,SAP)的重组腺病毒。方法:采用RT-PCR扩增的方法获取大鼠SAP,并将该基因采用定向克隆的方法克隆进入穿梭质粒pAdTrace-TO4中,进一步采用同源重组的方法将该质粒和腺病毒骨架质粒Adeasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,然后用脂质体介导的方法导入包装细胞HEK293中,产生表达目的基因的重组腺病毒,扩增病毒后用倍比稀释法测定其滴度。结果:通过PCR技术从重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒中扩增出700bp左右插入片段,测序结果和基因库中的基因序列一致。扩增后的重组腺病毒滴度为2.8×108pfu/ml。结论:成功构建了携带SAP基因的重组腺病毒载体Adeasy-1-SAP,为探讨SAP对肺纤维化的作用及其机制打下基础。