周兵
- 作品数：13 被引量：25H指数：3
- 供职机构：厦门大学公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目黑龙江省博士后科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 抗人IL-1β单链抗体的构建及其中和活性的检测被引量：2
- 2013年
- 目的:原核表达抗人IL-1β(hIL-1β)的scFv,并对纯化后抗体的特异性、亲和力以及中和活性进行检测,为研制治疗类风湿关节炎的小分子抗体药物奠定基础。方法:使用PCR方法从含有抗hIL-1β抗体基因的质粒中获得抗hIL-1β的单链抗体基因,将其插入原核表达载体pET-27b(+)中,构建重组表达载体pET-27b-A-hIL-1β-scFv。将该载体转化大肠杆菌Rosetta后诱导表达,经包涵体变性、复性得到可溶的抗hIL-1βscFv蛋白。利用高效液相色谱仪对其纯度进行分析后使用Western blot和ELISA方法测定scFv抗体对抗原特异性结合能力和亲和力,使用MTT的方法检测scFv抗体中和人IL-1β蛋白的能力。结果:成功地对抗hIL-1β单链抗体进行构建、诱导、表达和纯化。得到纯度为72.05%、相对分子质量约为28 ku的目的蛋白。ELISA和Western blot结果证实scFv蛋白对hIL-1β具有特异性结合能力。MTT实验结果证实该scFv抗体可以有效阻断hIL-1β刺激L929细胞的增殖。结论:通过原核表达系统得到的抗hIL-1β单链抗体,纯化后,鉴定其与hIL-1β蛋白有特异性结合能力,并且表现出中和hIL-1β的活性,为进一步研究治疗RA的小分子抗体奠定了基础。
- 李天鹤任桂萍徐黎明周兵郭茉齐剑英张宇赵景壮于引航尹杰超李德山
- 关键词：单链抗体包涵体复性中和活性MTT
- 三种双特异性抗体对小鼠类风湿关节炎模型的治疗效果
- 2014年
- 为获得治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的先导药物,本研究比较了3种双特异性抗体(BsAB-1、BsAB-2和BsAB-3)对Ⅱ型胶原(CII)诱导的RA(CIA)模型小鼠的治疗效果。首先用ELISA法比较了3种二价抗体同时与两种抗原的结合能力,结果显示,3种抗体均能同时结合两种抗原,BsAB-1结合抗原的能力优于其他两种抗体(P<0.01)。用鸡CII建立CIA模型,用纯化的抗体对CIA模型小鼠进行治疗,每2天给药1次,治疗29天。治疗结束后与CIA模型对照组相比,各治疗组小鼠踝关节肿胀、皮肤紧绷、后足皮肤表面充血等临床症状明显减轻,其中BsAB-1治疗后足趾肿胀不明显,基本恢复正常。采用ELISA法检测了各组小鼠血清中CII抗体,real-time PCR法检测了脾脏中细胞因子IL-2、IL-1β、IL-17A和TNF-α的表达水平。与CIA模型对照组相比,所有抗体治疗组都能明显降低血清中CII抗体水平、脾脏中IL-2、IL-1β、IL-17A和TNF-α的表达量,且BsAB-1治疗效果最佳,与另外两种抗体比较有显著差异(P<0.01)。因此,3种二价抗体对CIA模型小鼠都有治疗效果,BsAB-1的治疗效果要优于另外两种抗体,是优选的先导药物。
- 李清萃韩晓辉周兵王文飞任桂萍孙翠羽吴强于引航徐黎明王秋颖齐剑英魏雨泉曹宏伟韩俊岩李德山
- 关键词：双特异抗体II型胶原
- FGF-21对H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞H9c2氧化应激损伤的保护作用被引量：11
- 2014年
- 成纤维细胞生长因子-21(fibroblast growth factor-21,FGF-21)是机体内重要的代谢调节因子,但尚不清楚FGF-21对心血管系统的直接影响。本研究利用H2O2诱导的心肌细胞H9c2氧化应激模型,分别用MTT、流式细胞术、real-time PCR等方法评价FGF-21是否具有对抗氧化损伤引起的心肌细胞凋亡的能力及其相关作用机制。结果显示,FGF-21能提高H2O2处理后的H9c2细胞存活率,降低心肌细胞凋亡,并减少H2O2引起的ROS累积;而且FGF-21通过上调SOD活性以及调控Bcl-2/Bax的表达量,发挥抑制细胞凋亡的作用。研究结果证实,FGF-21能够保护心肌细胞免受氧化应激带来的损伤。
- 韩苗苗王文飞刘铭瑶李德山周兵于引航任桂萍
- 关键词：FGF-21心肌细胞过氧化氢氧化应激损伤
- 抗IBDV鸡源重组抗体的构建及生物活性鉴定
- 尹杰超张瑛杰李天鹤周兵郭笑辰李德山
- 稳定表达可视化hFcRn的MDCK细胞株构建被引量：2
- 2017年
- [目的]建立稳定表达融合EGFP的人新生儿Fc受体(h FcRn)的MDCK细胞株。[方法]构建重组慢病毒质粒p EGFP-h FcRn,采用四质粒包装系统共转染HEK 293T细胞生产重组慢病毒,感染MDCK细胞后对EGFP阳性细胞进行流式单细胞分选;通过Western Blot及EGFP-β2m荧光共定位验证h FcRn的完整性,并用流式细胞仪检测h FcRn与人Ig G的结合活性。[结果]测序结果表明成功构建p EGFP-FcRn慢病毒表达载体;感染后EGFP阳性MDCK细胞比例约为26.5%,流式单细胞分选后得到纯阳性细胞;荧光共定位及Western Blot均检测到h FcRn的完整表达;流式分析表明细胞株上的h FcRn与Ig G存在p H依赖性结合。[结论]成功获得稳定表达具有生物活性的可视化h FcRn的MDCK细胞株。
- 康赐明陈远志王一文周兵游敏罗文新夏宁邵
- 关键词：慢病毒表达载体EGFPMDCKP
- 基于细菌展示技术的高通量抗原表位筛选方法的建立被引量：1
- 2014年
- 目的：本研究旨在利用细菌表面展示技术结合流式细胞术建立一种快速直观的抗原表位的新方法。方法：本研究以传染性法氏囊病毒结构蛋白VP2作为目标蛋白，对该方法的可行性进行检测。将VP2基因分为连续不重叠的5个基因片段（V1～V5）。将各段基因分别克隆至细菌展示载体pAPEx中．转化大肠杆菌DH5a，利用IPTG诱导使蛋白片段锚定表达于大肠杆菌细胞间质侧的内膜上，利用溶菌酶破除细菌外膜（原生质球制备），使蛋白片段暴露于原生质球表面。将该原生质球先后与传染性法氏囊病毒多克隆抗体和FITC标记的兔抗鸡抗体进行孵育，利用流式细胞仪（Flowcytometer，FC）检测原生质球的荧光信号强度。结果：FC结果显示，除V2片段外其余片段均有很强的荧光信号，其荧光强度为V3最强，Vl、V4、V5其次。该结果说明V1、V3、V4、V5段存在抗原表位，V2段中无表位。为验证Fc结果，本研究利用传统方法对各基因片段进行表达、纯化及Westernblot鉴定，结果显示V3与多抗的结合能力最强，v2段无阳性反应，与FC结果相符。此外，本研究利用抗原表位分析软件对各蛋白片段潜在抗原表位进行预测，其结果与FC结果相一致。结论：本研究利用Fc对抗原表位筛选过程进行实时监测，通过荧光信号强弱即可判断抗原表位是否存在及强弱，与传统抗原表位筛选方法相比，节省了时间提高了效率。利用该方法可以快速地筛选出优势表位，对于流行病病原的基础研究及疫苗的研制具有重意义。
- 郭茉徐黎明周兵尹杰超任桂萍李德山
- 关键词：抗原表位流式细胞术
- 利用SUMO表达系统高效可溶表达人白细胞介素15及其活性研究被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨重组人白细胞介素15(rhIL-15)的表达条件、纯化工艺并进行生物活性鉴定。方法:采用RT-PCR方法从正常成人外周血淋巴细胞中扩增出人白细胞介素15(hIL-15)cDNA,克隆到pSUMO Vector中,构建rpSUMOhIL-15重组质粒。将转化重组质粒的工程菌诱导表达,超声破碎后取菌液上清,经过亲和层析、酶切、亲和层析得到成熟蛋白。高效液相色谱进行纯度分析;利用rhIL-15促进T细胞增殖、rhIL-15诱生的NK细胞杀伤肿瘤细胞的能力鉴定其生物活性;荷瘤鼠实验研究rhIL-15抗肿瘤作用。结果:经纯化后得到rhIL-15,其分子量大小为14.4 kD,蛋白纯度在95%以上,具有显著刺激T细胞增殖和NK细胞杀伤肿瘤细胞效果。动物实验结果显示其具有明显的抗肿瘤作用。结论:经过纯化获得高纯度和高生物学活性的rhIL-15,且具有明显增强NK细胞杀伤、刺激T细胞增殖和抗肿瘤的活性,为细胞因子联合其他方法治疗肿瘤等疾病提供了实验基础。
- 白福良田辉牛泽杉于引航王文飞周兵李德山
- 关键词：融合蛋白T细胞增殖NK细胞杀伤活性抑制肿瘤作用
- 抗IBDV鸡源重组抗体治疗鸡传染性法氏囊病
- 建立稳定表达抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)鸡源重组全长抗体的细胞系,将其表达的抗IBDV鸡源重组全长抗体应用在治疗鸡传染性法氏囊病(IBD)中.将构建的鸡源重组全长抗体的真核表达质粒转染到哺乳动物细胞CHO-K1-SV...
- 郭笑辰张瑛杰尹杰超李天鹤周兵徐鹏飞任桂萍李德山
- 关键词：传染性法氏囊病毒
- 抗IBDV鸡源重组抗体治疗鸡传染性法氏囊病
- 建立稳定表达抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)鸡源重组全长抗体的细胞系,将其表达的抗IBDV鸡源重组全长抗体应用在治疗鸡传染性法氏囊病(IBD)中。将构建的鸡源重组全长抗体的真核表达质粒转染到哺乳动物细胞CHO-K1-SV...
- 郭笑辰张瑛杰尹杰超李天鹤周兵徐鹏飞任桂萍李德山
- 关键词：传染性法氏囊病毒
- 两种scFv抗体、其编码基因及其在制备治疗或预防鸡传染性法氏囊病制剂中的应用
- 本发明公布了两种scFv抗体、其编码基因及其在制备治疗或预防鸡传染性法氏囊病制剂中的应用。发明提供了两种单链抗体（即scFv抗体），scFv抗体具有与IBDV结构蛋白2（VP2）蛋白及多种IBDV毒株特异性结合的能力，可...
- 尹杰超周兵李天鹤李德山张瑛杰张立夏
- 文献传递
