孙京杰
- 作品数：24 被引量：58H指数：4
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- 丙戊酸钠诱导胃癌细胞凋亡及其机制被引量：4
- 2007年
- 目的观察丙戊酸钠（VPA）对胃癌细胞系BGC-823的生长抑制及诱导凋亡作用．并通过检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase3、caspase8、caspase9）的活性和蛋白表达变化探讨VPA诱导凋亡的可能机制。方法M1Tr法检测细胞生长抑制、Annexin V／PI双染检测细胞凋亡、间接免疫荧光法分析caspase3、caspase8、caspase9蛋白变化，分光光度法检测caspase3、caspase8、caspase9活性改变。结果VPA0．75～4．00mmol／L干预BGC-823细胞24h和48h后，细胞生长被明显抑制，细胞凋亡率显著增加[VPA0．75mmol／L，24h时细胞凋亡率为（7．2±0．5）％，48h时为（9．2±1．0）％；VPA4．00mmol／L，24h时为（16．7±2．2）％，48h时为（20．4±1．6）％]，与对照组[24h时细胞凋亡率为（4．9±0．2）％，48h时为（5．1±0．8）％]比较．差异有统计学意义（P〈0．001），并呈时间、剂量依赖趋势；caspase3、caspase9蛋白表达被明显上调．活性升高．与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．001）。caspase8活性及蛋白表达在VPA作用24h后未见明显改变，48h后仅轻度增加。结论VPA可明显抑制胃癌细胞的生长并诱导其凋亡，而且该作用主要通过激活caspase9介导的内源性凋亡途径实现；caspase8介导的外源性细胞凋亡途径未参与或仅部分参与了该诱导过程。
- 时昌文赵霞曹莉莉孙京杰刘爱武
- 关键词：胃肿瘤细胞系BGC-823凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
- 应用VPA调节组蛋白乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase的影响被引量：3
- 2009年
- 目的：探讨应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠（VPA）调节染色体组蛋白低乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达及活性的影响,同时通过检测VPA与Caspase3、Caspase8、Caspase9特异性抑制剂协同作用后细胞凋亡的变化加以验证。方法：应用0.75~4.0 mmol/L VPA干预肝癌细胞HepG2、胃癌细胞BGC-823、乳腺癌细胞MCF-7 48小时后,流式细胞术分析细胞凋亡的变化;分光光度法检测Caspase3、Caspase8、Caspase9活性;流式细胞仪间接免疫荧光法定量分析Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达。结果：0.75~4.0 mmol/L VPA干预48小时后,FCM分析可见HepG2、BGC-823、MCF-7细胞凋亡率显著增加,与对照组比较差异有显著意义（P〈0.001）并且呈剂量依赖趋势;HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达均被明显上调、活性升高,与对照组相比有显著差异（P〈0.001）;Caspase8活性及蛋白表达在HepG2、MCF-7细胞未见明显改变,BGC-823细胞仅轻度增加。VPA与Caspase3、9相应特异性抑制剂共同作用后,Caspase3、Caspase9活性被抑制,细胞凋亡率较VPA单独干预组显著降低（P〈0.005）;VPA与Caspase8特异性抑制剂共同作用组细胞凋亡率与VPA单独作用组比较无明显变化（P〉0.05）。结论：应用VPA干预组蛋白乙酰化修饰对HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达及活性可起明显的调控作用;对Caspase8的调控作用则随肿瘤细胞来源及表型的不同而有所差异,但总体趋势不明显。
- 赵霞时昌文孙京杰曹莉莉李杰于振海
- 关键词：组蛋白丙戊酸钠肝癌
- 应用丙戊酸钠调节组蛋白乙酰化对肿瘤细胞周期相关蛋白的调控作用被引量：2
- 2008年
- 目的探讨应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠（VPA）调节染色体组蛋白低乙酰化修饰水平对肿瘤细胞增殖周期相关蛋白CyclinA、CyclinD1、CyclinE和P21^Waf/cip1。的调控作用。方法应用0．75—4．00mmol／LVPA干预肝癌细胞HepG2、胃癌细胞BGC-823、乳腺癌细胞MCF-748h后，PI标记流式细胞术检测细胞周期；间接免疫荧光法分析CyclinA、CyclinD1、CyclinE、P21^Waf/cip1。蛋白表达；RT—PCR检测分析CyclinA、CyclinD1、CyclinE、P21^Waf/cip1 mRNA表达。结果HepG2、BGC-823、MCF-7这3种细胞系培养48h后，流式细胞术分析可见0．75～4．00mmol／LVPA实验组随药物浓度的增加而出现逐渐递增的细胞增殖周期G1期阻滞趋势。HepG2、BGC-823细胞CyclinA蛋白及mRNA表达被明显下调；MCF-7细胞CyclinA蛋白及mRNA表达在两个浓度组均未见明显变化；CyclinD1蛋白及mRNA表达在3个细胞系均被明显下调；P21^Waf/cip1蛋白及mRNA表达在3个细胞均被明显上调；CyclinE蛋白及mRNA表达则未见明显变化。结论应用VPA干预组蛋白乙酰化修饰可对HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Cyc—linD1、P21^Waf/cip1表达起明显的调控作用；对CyclinA的调控作用则随肿瘤细胞来源及表型的不同而有所差异，而对CyelinE则无明显的调控作用。在VPA诱导肿瘤细胞增殖周期G，期阻滞过程中，下调CyclinD1和上调P21^Waf/cip1蛋白及mRNA表达可能是其共同作用途径。
- 时昌文赵霞曹莉莉孙京杰李杰
- 关键词：组蛋白丙戊酸钠细胞周期蛋白
- 丙戊酸钠通过激活内源性凋亡途径诱导乳腺癌细胞凋亡的实验研究被引量：3
- 2007年
- 目的探讨丙戊酸钠（VPA）诱导乳腺癌细胞凋亡的作用。方法乳腺癌细胞株MCF-7细胞分为0.75～4.0 mmoL/L VPA实验组、对照组（不加VPA）及VPA与caspase抑制剂共同作用组。Annexin V-PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡,间接免疫荧光法定量分析及分光光度法检测caspase- 3、caspase-8、caspase-9蛋白丰度和活性,探讨VPA诱导凋亡的机制,同时检测VPA与caspase-3、caspase- 8、caspase-9特异性抑制剂协同作用后细胞凋亡的变化来加以验证。结果各浓度VPA干预MCF-7细胞48 h后,细胞凋亡率显著增加,caspase-3、caspase-9活性升高、蛋白表达明显上调,与对照组相比有显著差异（F=552.1、610.9、312.8、222.8、70.3,均P〈0.001）;而caspase-8活性及蛋白表达未见明显改变;1.5、3.0 mmol/L VPA与caspase-3、caspase-9相应特异性抑制剂共同作用组,细胞凋亡率均较VPA组显著降低（t=109.0、28.7、18.7、32.3,均P〈0.005）;VPA与caspase-8特异性抑制剂共同作用组细胞凋亡率与VPA组比较无明显改变（t=1.03、2.32,均P〉0.05）。结论VPA可通过激活caspase-9介导的内源性凋亡途径,明显诱导乳腺癌细胞凋亡,具有较好的临床应用价值。
- 时昌文于振海李杰曹莉莉孙京杰
- 关键词：乳腺肿瘤细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶分子作用机制
- Twist在胃癌中的表达及其与临床病理学指标关系研究被引量：7
- 2007年
- 目的:检测Twist蛋白在胃癌组织中的表达及与临床病理学指标的关系,探讨Twist蛋白在胃癌诊治中的临床应用价值。方法:应用鼠抗人Twist单克隆抗体免疫组织化学方法检测98例不同类型胃癌组织及32例正常胃组织中Twist的表达。结果:在98例胃癌组织中,Twist阳性表达60例(61.2%);在正常胃组织中其阳性表达5例(15.2%),两者比较,P=0.000(χ2=20.06);结合临床病理资料统计分析发现,Twist在胃癌组织中表达与肿瘤的分化程度、胃壁浸润、淋巴结转移及远处转移有关(χ2分别为6.577、9.557、9.87、4.88,P值分别为0.01、0.002、0.002、0.027);而其表达与病人年龄、性别无关(χ2分别为0.226、0.331,P值分别为0.634、0.565)。结论:Twist在胃癌诊断中作用明确,并且在判断肿瘤分化程度、浸润、淋巴结转移等方面均具有较好的辅助诊断价值。
- 时昌文李杰孙京杰曹莉莉刘爱武
- 关键词：TWIST胃肿瘤免疫组织化学
- 丙戊酸钠调节组蛋白乙酰化抑制胃癌细胞增殖的实验研究被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)逆转染色体组蛋白低乙酰化水平对胃癌细胞增殖的影响及其分子机制。方法:应用0.75～4.0mmol/LVPA作用于胃癌细胞系BGC-823细胞后,MTT法检测细胞生长抑制,PI标记流式细胞术检测细胞周期,间接免疫荧光法分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E和p21Waf/cip1蛋白表达,RT-PCR检测分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E和p21Waf/cip1 mRNA表达。结果:经0.75～4.0mmol/LVPA作用24、48、72和96h,各实验组均出现了时间、剂量依赖趋势的生长抑制,生长抑制率为9%～66%,差异有统计学意义,P<0.001;对照组细胞增殖G1期所占比例为57.8%～60.9%;而实验组则随药物浓度、作用时间的不同而出现不同程度的细胞周期G1期阻滞,G1期比例为58.2%～79.4%,与对照组比较差异有统计学意义,P<0.001。VPA干预BGC-823细胞后,Cyc-lin A、Cyclin D1蛋白和mRNA表达明显下调而p21Waf/cip1蛋白和mRNA表达明显上调,与对照组比较差异均有统计学意义,P<0.001;Cyclin E蛋白和mRNA表达变化未见明显差异,P>0.05。结论:组蛋白特异性脱乙酰酶抑制剂VPA可明显抑制胃癌细胞增殖、阻滞细胞增殖周期于G1期;其阻滞胃癌细胞增殖的作用通过上调p21Waf/cip1 mRNA、蛋白表达,下调Cyclin D1、Cyclin A mRNA和蛋白表达分别和(或)协同实现。
- 赵兴海孙京杰刘爱武李凯曹莉莉时昌文
- 关键词：胃肿瘤丙戊酸细胞增殖
- 应用VPA调节组蛋白乙酰化修饰抑制乳腺癌细胞增殖的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的观察应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠（VPA）调节染色体组蛋白低乙酰化水平对乳腺癌细胞增殖的作用，并进一步检测CyclinA、Cyclin D1、Cyclin E、P21^Walf/cipl蛋白及mRNA表达变化来探讨其分子作用机制。方法乳腺癌细胞系MCF-7细胞经0.75-4.0mmol／L VPA作用后，MTT法检测细胞生长抑制、PI标记流式细胞术检测细胞周期、间接免疫荧光法分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21^Walf/cipl蛋白表达、RT-PCR检测分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、P21^Walf/cipl mRNA表达。结果经0.75-4.0mmol／L VPA作用24、48、72、96h，试验组细胞生长抑制率逐渐升高，且呈时间、剂量依赖趋势；对照组细胞增殖周期G1、S、M期所占比例未见明显改变，而实验组则随药物浓度、作用时间的不同而出现不同程度的细胞增殖周期G1期阻滞，G1期比例由56．7％．78．9％不等，与对照组比较其升高差异有统计学意义（P〈0．01）。试验组P21^Walf/cipl蛋白、mRNA表达被明显上调、Cyclin D1蛋白及mRNA表达被明显下调，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；而Cyclin A、Cyclin E蛋白和mRNA表达则未见明显变化（P〉0．05）。结论通过应用组蛋白特异性脱乙酰酶抑制剂调节组蛋白乙酰化修饰可明显抑制乳腺癌细胞生长、诱导细胞增殖周期阻滞；丙戊酸钠作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂可明显抑制乳腺癌细胞增殖，其作用机制是通过上调P21^Walf/cipl mRNA、蛋白表达，下调Cyclin D1 mRNA和蛋白表达分剐和／或协同实现。
- 时昌文赵霞孙京杰曹莉莉于振海顾禾
- 关键词：丙戊酸组蛋白脱乙酰基酶类乳腺肿瘤细胞增殖
- 脾切除术对门静脉高压症患者细胞免疫功能的近期影响
- 2001年
- 曹莉莉孙京杰张曙光于振海阮长乐
- 关键词：门脉高压症脾切除术细胞免疫功能
- 大鼠胰腺癌模型制备的实验研究被引量：3
- 2005年
- 目的:探讨大鼠胰腺癌模型制备的可行方法。方法:SD大鼠80只,随机分为3组。A组:胰腺被膜下包埋生理盐水线结;B组:胰腺被膜下包埋二甲基苯并蒽(DMBA)浸泡线结;C组:胰腺被膜下包埋DMBA浸泡线结+硫唑嘌呤口服。术后定期获取胰腺病理切片检查成瘤情况。结果:A组无肿瘤形成,B、C组6周后开始成瘤。B组累计发生胰腺肿瘤 10 只(35. 7%),C组发生胰腺肿瘤 18 只(62. 1%),C组成瘤率高于B组(χ2=3 .96,P<0 .05)。结论:DMBA埋线法制备大鼠胰腺癌模型具有操作简单、成瘤率高、成瘤时间短的优点;加服硫唑嘌呤具有协同作用,可以提高成瘤率。
- 李朝阳张曙光于振海孙京杰时昌文阮长乐
- 关键词：二甲基苯并蒽胰腺肿瘤
- Doxycycline抑制人肝癌细胞系HepG_2生长的实验研究被引量：3
- 2008年
- 目的:观察多西环素(Doxycycline)对人肝细胞性肝癌细胞系HepG2生长抑制和凋亡的作用,并初步探讨其作用机制。方法:不同浓度的Doxycycline(5、10、20、30和50mg/L)对体外培养人肝癌细胞系HepG2进行不同的时间干预(24、48和72h),MTT法测定细胞生长抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡率,免疫细胞化学检测Fas、FasL及MMP-2蛋白表达的变化。结果:Doxycycline作用HepG2细胞48h和72h后,细胞生长被明显抑制,与无药对照组比较差异有统计学意义(P<0.001),且呈时间、浓度依赖趋势。其细胞凋亡率较无药对照组也明显升高(P<0.01);20mg/L Doxycycline作用于癌细胞48h后,实验组FasL蛋白阳性表达较无药对照组明显升高,MMP-2蛋白阳性表达较无药对照组明显降低,两组差异均有统计学意义(P<0.01),而Fas蛋白表达则差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Doxycycline对人肝癌细胞系HepG2具有明显的生长抑制和促凋亡作用,其机制可能与下调MMP-2、上调FasL从而启动Fas/FasL膜受体途径有关。
- 张强波李杰时昌文李捷孙京杰曹莉莉
- 关键词：肝肿瘤DOXYCYCLINEFASLMMP-2
