孙海梅
- 作品数：132 被引量：491H指数：12
- 供职机构：首都医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市教委科技发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学化学工程更多>>
- 人脐血非造血干细胞的基本特性被引量：6
- 2006年
- 目的:通过对体外培养人脐血来源非造血干细胞生长特性的观察和对细胞免疫表型的检测,探讨人脐血来源非造血干细胞的一般特性,为进一步研究人脐血来源非造血干细胞提供依据。方法:实验于2005-01/10在首都医科大学北京神经科学研究所和首都医科大学组织学胚胎学教研室实验室完成。脐带血由首都医科大学附属天坛医院提供,经密度梯度离心法分离新鲜脐带血,获取的单个核细胞进行培养。①倒置显微镜下观察细胞形态。②培养基中加入白血病抑制因子或用Mescencult间充质干细胞培养基进行培养,记录细胞生长状况。③流式细胞术分析脐血单个核细胞的免疫表型。结果:①人脐血非造血干细胞形态观察:较低密度接种细胞并不能形成大量贴壁细胞,而以5×106细胞密度接种则在48～72h后出现贴壁的梭形细胞,培养过程中细胞形态逐渐形成均一梭形。②生长特性:人脐血非造血干细胞接种5d后增殖速度加快,随后的几天内保持较快的增殖速度,15d后进入平台期。高糖DMEM培养基+胎牛血清和高糖DMEM培养基+胎牛血清+白血病抑制因子,两种培养体系在细胞增殖上未显示差异,白血病抑制因子并没有显著改善人脐血非造血干细胞生长增殖速度。③免疫表型:新鲜脐血经分离得到的单个核细胞中有少量CD34阳性细胞,CD90,CD166阳性细胞比例分别为(24.18±5.46)%和(36.44±6.26)%;人脐血非造血干细胞体外培养10d左右无CD34阳性细胞,CD166阳性细胞的比例达(76.48±4.54)%,较单个核细胞中CD166阳性细胞比例明显增高,并且表达HLA-ABC,而少量表达HLA-DR。结论:合适的细胞接种密度有利于人脐血非造血干细胞贴壁生长。白血病抑制因子并不能增加体外培养的人脐血非造血干细胞的生长增殖速度。人脐血非造血干细胞体外培养10d左右可以获得纯度较高的CD166阳性细胞。
- 王屹季凤清孙海梅赵春礼曾晓蓓杨慧
- 关键词：脐带胎血流式细胞术
- 同一器官的混合标本在医学形态学实验教学中的应用被引量：2
- 2011年
- 目的:为了更好地激发学生对形态学实验课的兴趣,实现形态学实验课程的融合,不断更新实验内容,我们在形态学实验教学标本制作方面作了尝试。方法:将同一种组织器官的正常和异常标本切片相互对照引入形态学实验教学。结果:说明其混合标本,表现出一定的教学优势。结论:激发学生对实验课的学习兴趣,对掌握形态学相关基础理论有很大帮助。
- 张立新尚宏伟路欣郭晓霞孙海梅董晓黎苏红星
- 关键词：石蜡切片组织标本形态学实验教学
- 内毒素所致SIRS/MODS小鼠脾细胞损伤的形态学观察被引量：2
- 2002年
- 目的 应用大肠杆菌内毒素脂多糖 (LPS)腹腔注射制备小鼠全身炎症反应综合征 /多器官功能失常综合征(SIRS/MODS)模型。方法 用免疫组化的方法检测了Bcl 2的表达。结果 随LPS作用时间的延长 ,脾损伤逐渐加重。HE染色中 ,生发中心和动脉周围淋巴鞘分别在LPS注射后 9小时和 18小时出现大量深浅不一的颗粒状细胞碎片。TUNEL阳性染色细胞随时间延长而增多。电镜下可见到凋亡的淋巴细胞。在 18小时还见到细胞坏死现象。Bcl 2的表达随着LPS作用时间的延长而明显下降 ,与TUNEL染色的相关分析表明 ,Bcl 2的表达与细胞凋亡有显著的负相关。结论 在LPS所致的SIRS/MODS模型中 ,脾细胞损伤以凋亡为主 ,随LPS作用时间延长而加重 ,在晚期还会出现细胞坏死。Bcl 2参与了LPS引起的脾细胞凋亡效应。
- 仇文颖王兴翠尚宏伟李宝红孙海梅郭崇洁魏育林
- 关键词：内毒素形态学全身性炎症反应综合征多器官功能失常综合征
- 内源性H2S对非酒精性脂肪性肝炎大鼠线粒体损伤的保护作用
- 近年来研究提示，线粒体损伤在非酒精性脂肪性肝炎(non-alconholic steatohepatitis, NASH)发展过程中发挥了重要作用。内源性硫化氢(H2S)在多系统发挥不同生理作用，与过氧化物反应，减少细胞...
- 蔡照华武彦宁孙海梅尚宏伟郝刚张立洁孙琳张华丁惠国
- 关键词：脂肪性肝炎非酒精性线粒体损伤
- 文献传递
- 非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏内源性H_2S合成减少被引量：2
- 2010年
- 目的探讨非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠肝脏硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)变化及与肝细胞线粒体损伤的可能关系。方法采用雄性SD大鼠26只,分为正常对照组(n=6),NASH模型组(n=10)及复方牛胎肝提取物治疗组(n=10),高脂饮食12周建立NASH大鼠模型。亚甲基蓝分光光度法测定肝组织H2S生成率,RT-PCR及免疫组织化学测定肝组织CSEmRNA及其表达。透射电子显微镜观察肝细胞超微结构、PCR法测定肝细胞线粒体DNA(mtDNA)片段ND1、ND6、CO1、CYB及ATP6。结果 NASH大鼠模型组肝细胞线粒体肿大、膜模糊或嵴消失,正常组大鼠mtDNA片段ND1、ND6、CO1、CYB及ATP6表达明显高于模型组和治疗组(P<0.05)。NASH模型组肝组织H2S生成率〔(1.26±0.08)nmol/min〕较正常组〔(2.11±0.17)nmol/min〕明显减少(P<0.05),且肝脏CSEmRNA水平及其表达减少,治疗组与模型组比较差异无统计学意义。结论 NASH大鼠肝脏H2S合成减少可能与肝细胞线粒体损伤有关,H2S在NASH发病机制中可能具有保护肝脏的作用。
- 武彦宁蔡照华孙海梅尚宏伟郝刚张立新孙琳张华丁惠国
- 关键词：非酒精性脂肪性肝炎线粒体DNA硫化氢胱硫醚-Γ-裂解酶
- 子宫内膜电切术前后血管内皮因子及其受体表达变化的研究
- 2004年
- 目的：用免疫组织化学的方法研究血管内皮生长因子(VEGF)及其受体KDR、微血管密度(MVD)在子宫内膜单纯增生、子宫腺肌病患者经子宫内膜电切术(TCRE)治疗前后的表达变化，探讨子宫内膜电切术治疗异常子宫出血的分子学机理。方法：取10例单纯子宫内膜增生所致功能失调性子宫出血和10例子宫腺肌病患者行子宫内膜电切术前取增殖中晚期子宫内膜为术前实验组；
- 孙海梅杨保军张华
- 关键词：子宫内膜电切术子宫腺肌病血管内皮因子受体表达
- 酪氨酸激酶受体KIT在小鼠结肠黏膜上皮的表达及其功能
- 2013年
- 目的探讨酪氨酸激酶受体KIT在小鼠结肠黏膜上皮的表达及作用。方法应用Western blotting和RT-PCR技术检测c-kit基因及KIT蛋白在野生型C57BL/6小鼠结肠黏膜上皮的表达;用免疫荧光染色显示野生型C57BL/6小鼠以及乙基亚硝酸钠(ENU)诱变的c-kit基因点突变纯合子小鼠(Wadsm/m)结肠黏膜上皮KIT阳性细胞的部位;腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)(30 mg/kg)观察对比野生型以及Wadsm/m小鼠结肠黏膜上皮BrdU掺入情况及动态变化,分析KIT在结肠黏膜上皮更新过程的作用。结果 RT-PCR检测结果表明,在野生型小鼠结肠黏膜组织表达c-kit基因,Western blotting证明在肠黏膜组织存在KIT蛋白;免疫荧光染色显示,KIT阳性细胞位于结肠黏膜上皮,主要位于肠腺隐窝基底部,但是Wadsm/m小鼠KIT阳性细胞数以及KIT蛋白表达量较野生型小鼠明显减少;BrdU掺入实验发现,Wadsm/m小鼠远端结肠黏膜上皮BrdU摄入和更新速度较野生型小鼠明显减慢。结论结肠黏膜上皮表达KIT蛋白与结肠黏膜上皮的更新密切相关。
- 康倩薛红孙海梅李小双张国权梁元晶周德山
- 关键词：KIT结肠黏膜小鼠
- 绝经期乳腺癌妇女服用他莫昔芬后子宫内膜雌、孕激素受体变化及Ki-67的表达被引量：7
- 2005年
- 目的评估他莫昔芬(TAM)对绝经后妇女子宫内膜的雌激素样作用与性激素受体的改变是否相关,以及细胞增生核抗原Ki-67在子宫内膜中的表达。方法选择46例绝经后因乳腺癌服用TAM超过6个月妇女的子宫内膜为研究组,同时选择18例绝经后妇女的萎缩型子宫内膜作为对照组。采用免疫组织化学法测定雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及Ki-67在子宫内膜中的表达。结果与对照组比较,PR及Ki-67在TAM组内膜腺上皮细胞呈明显高表达(0.46±0.05比0.35±0.06,P=0.028;15.41±4.83比9.05±5.52,P=0.009);ER在TAM组内膜腺上皮细胞虽然呈高表达,但差异无统计学意义(0.47±0.06比0.43±0.06,P=0.063)。结论绝经后乳腺癌妇女服用TAM后能够引起子宫内膜增生,TAM雌激素样作用与病理诊断和服用时间无关,这可能是子宫内膜息肉及内膜癌的发病机制之一。
- 高婉丽冯力民张铭张华孙海梅
- 关键词：他莫昔芬孕激素受体KI-67抗原
- 人脐血干细胞定向分化为多巴胺能神经元的实验研究被引量：9
- 2007年
- 目的探讨人脐血干细胞定向分化为多巴胺(DA)能神经元的最佳诱导条件。方法体外分离、原代培养人脐血干细胞,流式细胞仪检测其表面标志,分别以EGF+bFGF、ATRA、ATRA+EGF+bFGF、纹状体条件培养液、纹状体星形胶质细胞条件培养液对其进行诱导,倒置相差显微镜观察细胞形态的变化。应用免疫荧光染色技术检测DA能神经元标志物酪氨酸羟化酶(TH)的表达。结果比较各组对人脐血干细胞定向分化为DA能神经元的诱导作用,纹状体星形胶质细胞条件培养液>纹状体条件培养液>ATRA+EGF+bFGF组>ATRA组>EGF+bFGF组>对照组。结论纹状体组织对人脐血干细胞定向分化为DA能神经元的诱导作用优于其他各组,并且此作用可能主要源于纹状体的星形胶质细胞。
- 李荣平季凤清孙海梅王屹曾晓蓓赵春礼杨慧李雪梅贾晓芳
- 关键词：干细胞多巴胺能神经元纹状体免疫细胞化学人脐带血
- 白藜芦醇诱导人皮肤癌细胞系凋亡的可能信号通路被引量：2
- 2011年
- 目的探讨白藜芦醇(Res)诱导人皮肤癌细胞系(A431细胞)凋亡的可能信号分子,为临床相关疾病的治疗提供新的实验依据。方法培养的A431细胞分为:对照组(A组)、Res(B组)、Res加SP600125(C组)以及单纯SP600125组(D组)。免疫荧光染色、Western blot及相差显微镜观察等方法检测细胞形态和caspase-3、BAX、BCL-2、JNK以及P-JNK蛋白分布和含量。结果 Res处理后,A431细胞出现较典型的细胞凋亡形态特征,同时可见BAX/BCL-2比值升高,caspase-3蛋白表达增加,磷酸化(P-JNK蛋白)明显增加,且集聚在细胞核(由225 463±672增至289 469±3 729,P<0.05);经SP600125预处理后,上述改变明显减少(降至248 198±4 367,P<0.05),A431细胞的生长状态与对照组相似。结论 Res可能首先使JNK蛋白磷酸化,进入细胞核,发挥抑制BCL-2蛋白表达,上调BAX和caspase-3蛋白表达,进而引起细胞凋亡。
- 赵冬芝李小双孙海梅张国权闫继红周德山
- 关键词：白藜芦醇P-JNKJNKCASPASE-3
