宋学文
- 作品数：10 被引量：23H指数：4
- 供职机构：天津医科大学天津市内分泌研究所更多>>
- 发文基金：卫生部科学研究基金天津市21世纪青年科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 谷氨酸脱羧酶表达型质粒的构建
- 1997年
- 采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）克隆了谷氨酸脱羧酶基因的ｃＤＮＡ，双脱氧末端终止法对其全部核苷酸序列予以确定后，将此编码５８５个氨基酸、全长１７５８ｂｐ的ｃＤＮＡ重组入ｐＧＥＸ表达型载体中，通过原位杂交筛选阳性重组质粒，并通过序列分析证实重组质粒接口处读码框架无误，为谷氨酸脱羧酶重组基因的表达及表达产物在临床诊断中的应用奠定了基础。
- 吴锐蔡军赵崇宋学文尹潍张镜宇
- 关键词：谷氨酸脱羧酶胰岛细胞自身抗原糖尿病
- 谷氨酸脱羧酶基因的体外表达
- 1998年
- 目的 为获得足量的、可供实验研究和临床应用的谷氨酸脱羧酶（ Ｇ Ａ Ｄ６５） 抗原。方法将 Ｇ Ａ Ｄ６５ 基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 正确地重组到表达型载体ｐ Ｇ Ｅ Ｘ３ Ｘ 中，并通过原核细胞进行诱导表达， Ｓ Ｄ Ｓ聚丙烯酰胺凝胶电泳测定表达产物分子量，间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法证实其免疫原性。结果 表达产物分子量约为６３ ．２３ Ｋ Ｄ，在误差允许范围（ ＜ ８ ％ ） 内，与 Ｇ Ａ Ｄ６５ 蛋白分子量相近，间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 显示表达产物与１ 型糖尿病病人血清发生明显的显色反应，证明其具有免疫原性。结论 运用基因工程技术获得的表达产物为重组 Ｇ Ａ Ｄ６５ 抗原。这一抗原的获得，将有助于１ 型糖尿病的预测、预防、鉴别诊断以及免疫治疗等方面的研究。
- 吴锐蔡军赵崇宋学文尹潍张镜宇
- 关键词：谷氨酸脱羧酶1型糖尿病抗原免疫原性体外表达蛋白分子
- 谷氨酸脱羧酶基因工程融合抗原在Ⅰ型糖尿病临床诊断中的应用被引量：5
- 1998年
- 目的运用基因工程技术获取具有免疫原性的谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ６５）重组蛋白，探讨其用于Ⅰ型糖尿病早期诊断的可行性。方法通过ＰＣＲ扩增获得ＧＡＤ６５全编码基因，经克隆及序列分析后在原核细胞中表达，鉴定表达产物的免疫原性，用表达产物初步检测３０例糖尿病病人血清中抗ＧＡＤ６５抗体。结果所获ＰＣＲ产物经序列分析确证为１７５８ｂｐ，编码５８５个氨基酸，并正确地重组到ｐＧＥＸ３Ｘ表达型质粒中，其在原核细胞中表达的融合蛋白具有免疫原性，并能应用于糖尿病病人血清中抗ＧＡＤ６５抗体的检测。结论利用具有免疫原性的ＧＡＤ６５基因重组蛋白，通过间接ＥＬＩＳＡ检测糖尿病病人血清中的相关抗体，是一种简便可行的Ⅰ型糖尿病早期诊断的方法。
- 吴锐蔡军赵崇宋学文尹潍张镜宇
- 关键词：糖尿病谷氨酸脱羧酶自身抗原IDDM
- 大鼠脑cDNA文库的构建被引量：4
- 1996年
- 采用简单高效的ｃＤＮＡ合成技术制备Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑ｃＤＮＡ基因文库，以纯化的ｐｏｌｙ（Ａ）＋－ＲＮＡ为模板，含ＮｏｔＩ切点的ｏｌｉｇｏ－（ｄＴ）１５为引物，在反转录酶的作用下，合成第一股单链ｃＤＮＡ；用Ｅ。ｃｏｌｉＲＮａｓｅＨ除去模板ＲＮＡ，并以Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ聚合酶Ｉ，Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ连接酶和Ｔ４ＤＮＡ聚合酶催化合成ｃＤＮＡ第二条链，即成为双链ｃＤＮＡ；此双股ｃＤＮＡ除０．５μｇ用于插入ｐＳＰＯＲＴＩ载体，转入Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α，建成ｃＤＮＡ文库外，其余保存在－２０℃，以此ｃＤＮＡ为模板，应用ＰＣＲ方法，先后克隆了谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ，１８００ｂＰ）、神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ，１３４０ｂＰ），甲状腺激素受体（Ｔ３－ｒｅｃｅｐｔｏｒ，１２３０ｂｐ）、胆囊收缩素（ＣＣＫ，３４５ｂｐ）的全编码基因．
- 宋学文赵崇周仁郭善一张镜宇
- 关键词：CDNA文库分子克隆
- 碘缺乏对大鼠神经元特异性烯醇化酶基因表达的影响被引量：6
- 1996年
- 以 NSE 的 cDNA 制备基因探针,用 Northern blot 方法检测 NSE mRNA 的相对含量,观察碘缺乏(甲低)对大鼠 NSE 基因表达的影响,结果表现1日龄和20日龄低碘甲低大鼠 NSE mRNA 含量均低于同龄正常大鼠,表明低碘甲低可于转录水平阻碍 NSE 的基因表达。
- 宋建良赵崇宋学文蔡军陈祖培张镜宇
- 关键词：烯醇化酶碘缺乏基因表达甲状腺机能减退
- 大鼠脑谷氨酸脱羧酶基因的cDNA克隆及序列分析被引量：4
- 1996年
- 胰岛β－细胞自身抗原蛋白之一是脑中谷氨酸脱羧酶（Ｇｌｕｔａｍｉｃａｃｉｄｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，ＧＡＤ，ＥＣ４．１．１．１５）同源物。以双链ｃＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ方法快速克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑ＧＡＤ基因的ｃＤＮＡ，将此包括编码５９３个氨基酸的全长ＤＮＡ片段重组入ｐＵＣ质粒并用双脱氧末端终止法测定了全部序列，证明其全长为１７７９ｂｐ．经比较发现Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑与Ｒｕｓｓｅｌｌ报导的大鼠脑ＧＡＤ基因序列，有一处碱基的差别，但并不涉及氨基酸的改变。同时还对用ＰＣＲ扩增长片段ＤＮＡ进行了方法学上的探讨。
- 宋学文赵崇邓彤蔡军何炜张镜宇
- 关键词：谷氨酸脱羧酶基因CDNA克隆
- 大鼠脑组织中胆囊收缩素基因表达与发育的关系被引量：1
- 2001年
- 研究CCK基因在不同日龄大鼠脑中转录水平上的表达。取出生后不同日龄Wistar大鼠脑组织 ,提取总RNA ,甲醛凝胶电泳 ,Northern印迹与α 32 P标记CCKcDNA的探针杂交 ,放射自显影后 ,经激光扫描测定自显影图中斑点光密度 ,以估量CCKmRNA表达的相对水平。结果表明 ,刚出生的大鼠脑中CCK的mRNA含量甚低 ,随着鼠龄增长 ,浓度增高 ,2 0日龄时CCKmRNA浓度急剧升高 ,40日龄CCKmRNA的水平稍降低。CCK基因在转录水平的表达与个体发育有关。
- 洪燕敏杨欣艳王学瑞宋学文吴锐郑红张镜宇
- 关键词：基因表达
- 人胰岛细胞瘤cDNA文库的构建被引量：1
- 1995年
- 采用一种简单高效的互补脱氧核糖核酸（ｃＤＮＡ）克隆技术制备人胰岛细胞瘤的ｃＤＮＡ文库。方法的主要过程如下：以人胰岛细胞瘤的Ｐｏｌｙ（Ａ）＋－ＲＮＡ为模板，以含ＮｏｔＩ切点的ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５为引物，在反转录酶作用下合成第一股单链ｃＤＮＡ；用Ｅ．ｃｏｌｉＲＮａｓｅＨ除去Ｐｏｌｙ（Ａ）＋－ＲＮＡ，并以Ｅ．Ｃｏｌｉ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｉ Ｅ．Ｃｏｌｉ ＤＮＡ Ｌｉｇａｓｅ和Ｔ_４ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ催化合成第二股即成为双链ｃＤＮＡ；加接ＳａｌＩ接头并经ＮｏｔＩ酶切后，将ｃＤＮＡ通过ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－５００ＨＲ柱使大小不同的片段分离，再以质粒ｐＳＰＯＲＴ１为载体与ｃＤＮＡ退火连接并转化至Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ，得到人胰岛细胞瘤的ｃＤＮＡ文库。克隆效率为１×１０６转化子／μｇｃＤＮＡ，有ｃＤＮＡ插入片段的转化子占９２％。
- 宋学文郭善一周仁赵崇张镜宇
- 关键词：胰岛细胞瘤胰岛肿瘤CDNA文库
- 大鼠脑α_1型甲状腺激素受体基因的cDNA克隆及序列分析被引量：1
- 1995年
- 使用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑α_１型甲状腺激素受体的ｃＤＮＡ，得到包含起始及终止密码子共１２３３ｂｐ、编码４０９个氨基酸的受体全长编码序列．酶切分析后，将此特异ＤＮＡ片段重组入质粒ｐＵＣ系统，得重组质粒ｐＴＲＡ．双脱氧末端终止法测定了全部核苷酸顺序，结果与文献报导的ＳＤ大鼠的结果一致，同时对长片段ＤＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ扩增进行了方法学的探讨。
- 赵崇宋学文张连英邓彤张镜宇
- 关键词：甲状腺激素受体分子克隆CDNA
- 大鼠脑前缩胆素原的cDNA克隆被引量：1
- 1996年
- 大鼠脑前缩胆素原的ｃＤＮＡ克隆宋学文，赵崇，邓彤，蔡芳，张镜宇（天津医科大学内分泌研究所，天津３０００７０）缩胆素（ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎ，ＣＣＫ）是一种脑肠肽激素，它不仅存在于小肠粘膜的分泌细胞，而且分布于中枢和外周神经系统［１，２］；在血...
- 宋学文赵崇邓彤蔡芳张镜宇
- 关键词：CDNA神经活动
