张国明
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 玉米两种硫氧还蛋白的重组表达、纯化和定点突变
- 硫氧还蛋白（Thioredoxin，Trx）广泛存在各种生物体中，具有二硫键异构酶活性，是细胞氧化还原信号的主要传递者，在蛋白质翻译后修饰起重要作用。高等植物含有Trx种类最为丰富，分别存在细胞质、线粒体和叶绿体中，其中...
- 张国明
- 关键词：玉米硫氧还蛋白定点突变基因克隆
- 文献传递
- 重组玉米f型和m型硫氧还蛋白的功能确定及其靶向蛋白的捕获被引量：1
- 2010年
- RT-PCR从玉米幼叶总RNA中克隆f型和m型硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)的编码基因,分别将两种类型Trx活性中心的第二个保守Cys残基定点突变成Ser残基和Ala残基。在大肠杆菌分别重组表达和纯化了含组氨酸标签的Trx及其突变体蛋白,SDS-PAGE显示纯化的蛋白显示一条主带,蛋白分子量分别估计为f型Trx为18kDa,m型Trx为14kDa;纯化的含有SUMO标签融合Trx,用SUMO专一性SUMO水解酶Ulp除去SUMO,等点聚焦电泳显示m型和f型Trx的等电点分别为4.6和5.9。m型Trx比f型Trx有更强的还原胰岛素能力,而突变体蛋白几乎没有还原能力。用Cys残基专一性标记化合物AMS标记Trx,显示野生型Trx有氧化还原态,而突变体蛋白仅有还原态。SDS-PAGE电泳显示固定化的f型Trx突变体比m型Trx突变体捕获的玉米幼叶靶蛋白更具有多样性。
- 冯爱花张国明亓振国范军
- 关键词：玉米定点突变功能分析
