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张国林: 作品数：12 被引量：39H指数：4; 供职机构：山西农业大学动物科技学院更多>>; 发文基金：山西省科技攻关计划项目国家自然科学基金国家肉羊产业技术体系建设项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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β防御素104a在不同日龄雄性山羊睾丸与附睾中的定位及表达特性被引量：1: 2017年; [目的]为了研究不同发育阶段晋兰绒山羊睾丸及附睾中β防御素104a(goat Beta-Defensins 104a,gBD104a)表达的特性。[方法]采用免疫组化法对绒山羊公羊睾丸和附睾中的gBD104a进行表达定位。[结果]免疫组化染色结果显示:在山羊睾丸的支持细胞、精母细胞、生精细胞、精子细胞中检测到的gBD104a阳性信号非常弱,且在120日龄以前,随着日龄的增加,山羊睾丸的gBD104a表达量逐渐增加,之后则随着日龄的增加而逐渐降低;在山羊附睾的柱状上皮细胞、附睾管腔游离端的纤毛细胞、管腔液中检测到的gBD104a阳性信号较强。对免疫组化结果进行光密度值分析显示不同发育阶段附睾不同片段表达量顺序均是:附睾体>附睾头>附睾尾,且差异显著(P<0.05)。附睾体中gBD104a表达随着月龄的增加而增加,而附睾头中gBD104a表达则是在150日龄是达到高峰,随后日龄增加而降低;附睾尾gBD104a表达趋势与睾丸表达趋势的相似即:是在150日龄是达到高峰,随后日龄增加而降低。附睾精子免疫荧光结果显示,gBD104a定位在精子头部顶体、颈部和尾部主段。[结论]山羊睾丸和附睾中gBD104a表达具有时空特异性。附睾体可能是gBD104a与精子发生作用的部位。包裹在精子顶体部位的gBD104a可能与精子获能或顶体反应相关,其gBD104a功能需进一步深入研究。; 郭丽娜张国林任有蛇姜玉锁刘文忠张春香; 关键词：不同发育阶段免疫组化山羊

公山羊β防御素104a生物信息学分析及表达特性研究被引量：7: 2015年; 旨在预测山羊β防御素104a蛋白质特性,研究其在成年公山羊生殖组织及其他组织中的表达特性及其定位。采用在线软件对gBD104a基因(KJ508074.1)进行生物信息学分析,用QRT-PCR法检测gBD104amRNA在睾丸、附睾及其他组织中的表达情况,用免疫荧光技术对生殖组织和精子中的gBD104a进行定位。结果,(1)生物信息学分析结果表明gBD104a基因cDNA全长324bp,编码107个氨基酸,第1~19个氨基酸为信号肽,第27~55个氨基酸为潜在的β防御素构象区域,在C端有7个潜在的O糖基化位点;(2)QRT-PCR结果表明,gBD104a在附睾体中表达量最高,在附睾头、气管、皱胃、空肠、回肠等组织中表达量较高,其他组织中表达量均较低;(3)免疫组化定位结果显示,在附睾头和体部的假复层纤毛柱状上皮细胞检测到较强的gBD104a阳性信号,在附睾尾部的纤毛柱状上皮细胞也检测到较强的阳性信号。gBD104a包裹在精子头部顶体和中段线粒体表面。gBD104a是一种分泌型糖蛋白,在成年公山羊机体各组织中广泛表达,但主要表达在附睾体,是精子表面的主要成分。推测可能与精子运动、顶体反应和获能有关。需要进一步深入研究其功能。; 任有蛇张国林郭丽娜张春香郑亚琳张彩霞乔利英靳黎吕丽华刘文忠; 关键词：公山羊

基于高通量转录组测序的山羊睾丸和附睾头差异表达基因分析被引量：14: 2014年; 为探明山羊睾丸和附睾差异表达基因,挖掘与精子成熟和贮存密切相关的功能基因。采用Illumina HiSeqTM2000高通量转录组测序RNA-seq技术对3只成年种公羊睾丸和附睾头进行测序,将组装得到的Unigene比对到Nr、GO和KEGG数据库中注释,并进行差异表达基因聚类分析。结果显示,睾丸和附睾头Unigene总数分别为57 727个和51 395个,GO功能分类注释到生物过程、分子功能和细胞组成数据库中的分别有25 201、25 456和27 318个,其中差异表达基因数分别为9 150、9 172和10 003个;注释到KEGG通路中所有基因数23 222个,其中差异表达基因数8 219个,差异基因显著富集的信号通路:mRNA监视通路和mTOR信号通路;睾丸和附睾头中差异表达的基因共有24 592个,其中上调基因有8 420个,下调基因有16 172个。在附睾头中上调幅度最大的前3位:gDEFB124、gDEFB109和gDEFB108,下调幅度最大的前3位:GTSF1L、SRRM1和FNDC8。附睾头中表达量最高的前3位基因依次为Lcn5、gDEFB124和GPx5。睾丸中表达的基因数量大于附睾头中数量;β防御素家族、Lipocalin家族和GPx5可能在附睾头精子成熟、贮存和受精中发挥重要作用。; 张春香张国林郭丽娜赵辉任有蛇; 关键词：转录组差异表达基因睾丸公山羊

羊抗兔β防御素104a多克隆抗体及其制备方法和应用: 本发明公开了一种羊抗兔β防御素104a多克隆抗体及其制备方法和应用，该抗体可以用于山羊和绵羊的免疫组织化学、免疫荧光化学和Western？Blotting检测，用于免疫组织化学时浓度为1:100-500；用于细胞免疫荧光...; 张春香白元生任有蛇张国林李迪师周戈赵宇琼焦光月; 文献传递

Defb124基因在绵羊睾丸、附睾不同发育时期表达特性研究被引量：2: 2014年; 文章主要研究Defb124基因在绵羊睾丸、附睾不同发育时期的表达特性。采用QRT-PCR法对绵羊不同时期睾丸、附睾中Defb124 mRNA的表达进行绝对定量分析。结果表明:2、3、6、12月龄附睾头中Defb24的表达量分别为3.190×10-4、5.447×10-3、6.602×10-3、8.757×10-3ng/μL,在附睾尾中表达量分别为1.610×10-4、4.658×10-3、5.443×10-3、5.510×10-3ng/μL,在附睾体及睾丸中的表达量很少。说明Defb124 mRNA在绵羊不同发育时期睾丸、附睾中均有不同程度的表达,在附睾头中大量表达,且表现出明显的组织依赖性和时间依赖性。; 李振张国林郭丽娜张春香; 关键词：绵羊 QRT-PCR 睾丸附睾

绵羊ApoER2基因克隆及其干扰质粒对睾丸共培养细胞硒蛋白表达的影响被引量：1: 2014年; 本研究旨在克隆绵羊ApoER2基因,构建ApoER2-siRNA质粒载体,研究ApoER2基因沉默对睾丸共培养细胞SelP和PHGPx表达的影响。利用RT-PCR技术,克隆ApoER2序列,在此基础上构建4种pGPU6/GFP/Neo—ApoER2-siRNA质粒表达载体,利用脂质体将其转染到体外共培养绵羊睾丸细胞中,采用Real—time PCR和Western blotting方法,检测其抑制效应,并研究ApoER2基因沉默对Sel P和PHGPx mRNA表达的影响。本研究成功获得了长度为2 490 bp的绵羊睾丸ApoER2完整编码区序列,共编码892个氨基酸,绵羊ApoER2核苷酸序列与牛的同源性最高,相似性为97.7%。ApoER2-siRNA-1565和ApoER2-siRNA-2567位点重组质粒的干扰效果较好(P<0.01),选取ApoER2-siRNA-2567重组质粒,结果显示转染组Sel P和PHGPx表达量显著降低(P<0.01)。获得了绵羊ApoER2编码区序列和有效抑制该基因表达的2个质粒载体,ApoER2沉默可能影响了睾丸硒蛋白Sel P和PHGPx的表达,为进一步研究ApoER2转运硒机理提供了理论依据。; 张春香赵辉张国林郭丽娜任有蛇; 关键词：绵羊

绵羊GPx5基因克隆、生物信息学分析及表达特性的研究被引量：5: 2014年; 本研究旨在克隆绵羊硒非依赖性谷胱甘肽过氧化酶5(GPx5)基因,预测蛋白结构与功能,并研究其在睾丸和附睾头中的表达定位特点。采用5′RACE和RT-PCR克隆GPx5基因,用生物信息学分析预测GPx5结构、特性和功能,采用免疫组化和Western blotting方法进行表达定位研究。结果显示,绵羊GPx5的开放阅读框(ORF)660bp(GenBank:JQ 320282),GPx5编码219aa,分子量约25ku的碱性蛋白,第1~21个aa为潜在的信号肽,其三级结构域为αβ型,有11个可能磷酸化位点,有7种保守的特异性蛋白质激酶的结合位点;亚细胞定位预测显示GPx5存在于细胞外;其38~151aa属于谷胱甘肽过氧化酶家族保守结构域,其36~215aa类硫氧还蛋白超家族保守结构域。绵羊GPx5在附睾头的假复层柱状上皮细胞大量表达,附睾头上皮细胞和睾丸间质细胞少量表达,附睾头液和精浆中均有GPx5蛋白。绵羊GPx5是分泌型,具有谷胱甘肽过氧化酶活性和类硫氧还蛋白作用。GPx5可能是某信号转导通路的信号分子,但需进一步验证。; 张春香郭云雁白元生杨子森张国林焦光月任有蛇; 关键词：生物信息学分析绵羊

附睾特异谷胱甘肽过氧化物酶基因调控的研究进展被引量：1: 2013年; 附睾特异谷胱甘肽过氧化物酶(epididymal specific glutathione peroxidase,GPx5)可保护精子免受氧化应激,维持精子遗传信息的完整性,促进精子发育成熟,其重要生理功能在提高动物繁殖力上有着不可替代的作用,但其基因调控转录表达的机制尚不明确。现作者主要对基因表达特性、表达调控和转录调控等内容进行综述。; 张国林李振高晋生曹宁贤张春香; 关键词：附睾氧化应激基因调控

绵羊Txl-2基因CDS区克隆及其生物信息学分析被引量：1: 2014年; 本研究以绵羊睾丸组织为材料,利用RT-PCR技术获得绵羊硫氧还蛋白类蛋白2(Thioredoxin like protein 2,Txl-2)基因的CDS区序列,并对其进行生物信息学分析。结果表明,克隆得到的绵羊Txl-2基因CDS区为795 bp,编码264个氨基酸。生物信息学分析结果表明,Txl-2编码的蛋白无跨膜区、信号肽和N-糖基化位点,存在多个磷酸化位点;预测出了Txl-2蛋白的二级结构和三级结构;Clustel W方法对比绵羊Txl-2与绵羊、山羊预测序列同源性最高。; 秦雪张晓东张国林郭丽娜张春香任有蛇岳文斌; 关键词：绵羊生物信息学分析

山羊Lcn5的表达特点及其在繁殖器官中定位被引量：4: 2015年; 为探明附睾视黄酸结合蛋白5(Lcn 5)mRNA在公山羊体组织及不同月龄附睾中的表达特性,及其在睾丸、附睾和精子中的定位。采用实时荧光定量PCR方法检测18种组织和不同月龄附睾Lcn5mRNA表达规律;利用蛋白印迹技术对成年公羊睾丸和附睾Lcn 5蛋白表达进行定量分析;利用免疫组化技术对5月龄公羊睾丸和附睾Lcn 5进行定位,利用免疫荧光技术对精子Lcn 5进行定位。Lcn5mRNA在不同组织中均有表达,其中在性腺中的表达量最高,附睾头>附睾尾>附睾体>睾丸;在5月龄前附睾的Lcn5mRNA表达量随月龄逐渐升高,5月龄时达到最高,随后又逐渐降低。Western blotting结果显示,Lcn 5蛋白表达量:附睾头>附睾尾>附睾体>睾丸,支持了Lcn5mRNA定量的结果。免疫组化结果显示,5月龄山羊在附睾管壁的柱状细胞、纤毛细胞检测到较强Lcn 5蛋白表达的阳性信号,附睾尾管腔检测到较强的阳性信号。在睾丸各级生精细胞中也检测到了微弱阳性信号。Lcn 5蛋白包裹在精子头部顶体帽上。Lcn5在山羊附睾中高度表达,其表达具有时空特异性,推测其在精子成熟和维持正常生理功能方面发挥重要作用,其生物学功能需要进一步深入研究。; 任有蛇郭丽娜张春香张国林夏龙钢乔利英靳黎刘文忠; 关键词：睾丸附睾公山羊

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