张姝
- 作品数：3 被引量：30H指数：3
- 供职机构：北京市农林科学院农业生物技术研究中心更多>>
- 发文基金：北京市科委重大项目北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 基因重组大肠杆菌表达HrpNEcc蛋白的发酵条件及诱导条件优化被引量：13
- 2009年
- 对已构建好的表达HrpNEcc蛋白的工程菌BL21(DE3)/pET30a(+)hrpNEcc的摇瓶发酵条件及乳糖诱导进行优化,通过在7L发酵罐中放大发酵实验,以期提高蛋白产量并降低生产成本。在摇瓶中优化的发酵及诱导条件是:5%的接种量,TB培养基,菌体培养至对数生长前期,添加3g/L外源诱导剂乳糖时,HrpNEcc蛋白产量可达417.60mg/L,比不添加乳糖时提高了36.73%,比用IPTG诱导时提高了16.85%。7L发酵罐中发酵,获得菌体湿重达到57.24g/L(WCW),可溶性HrpNEcc蛋白产量占细胞总蛋白的50.2%,为3.29 g/L。
- 张姝王敏韩梅琳马荣才陈强高俊莲
- 关键词：重组大肠杆菌
- 低温沼气发酵微生物区系的筛选及其宏基因组文库构建被引量：12
- 2010年
- 从四川、浙江、山西、北京等地采集冬季产气良好户用沼气池及沼气工程中的沼液样品作为微生物接种源,在实验室条件下进行了500ml反应器的梯度降温模拟沼气发酵试验,筛选出5个在21℃、18℃和15℃等不同温度下均可正常产气的沼液样品Z-2、Z-3、Z-6、Z-8和Z-10,选取其中3个产气量较高的沼液样品Z-3、Z-6和Z-10作为接种源,进一步建立了2500ml反应器实验室模拟15℃低温沼气发酵系统,经过连续传代筛选获得一个在15℃低温下产气量较高且稳定的沼气发酵系统Z-6,产气率达到0.15m3/m3d。提取该系统内沼气发酵微生物宏基因组DNA,以pBluescriptSK(+)质粒为载体成功构建了约10000个克隆的沼气发酵微生物宏基因组质粒文库。随机分析文库中的克隆结果表明,该文库的外源片段平均长度约为5kb,文库总容量为48Mb,插入片段带型多样性较高。该文库的建立为沼气发酵过程中水解酶基因资源的挖掘利用奠定了基础。
- 成晓杰仇天雷王敏张姝蔡金国高俊莲
- 关键词：宏基因组文库
- 酵母提取物诱导重组大肠杆菌合成HrpNEcc蛋白的研究被引量：5
- 2009年
- 【目的】HrpNEcc蛋白是一种起细胞信号作用的蛋白激发子,通过激活植物遗传系统的多基因表达调控,诱导植物的广谱抗病性、驱虫性和抗逆性,促进植物生长发育,因此在农业生产中具有重要意义。在hrpNEcc重组大肠杆菌高密度发酵廉价诱导剂的筛选工作中,偶然发现不添加任何外源诱导剂的TB培养基对照处理也有HrpNEcc蛋白合成。本研究旨在找出引起对照处理中HrpNEcc蛋白合成的诱导因子,并研究诱导因子的来源和含量对HrpNEcc蛋白合成的影响。【方法】摇瓶发酵培养重组大肠杆菌,离心收集菌体,用考马斯亮蓝染色法测定菌体总蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白条带,并结合Bandscan软件计算出HrpNEcc蛋白含量。【结果】在不添加任何外源诱导剂的情况下,用TB培养基发酵生产重组大肠杆菌E.coliBL21(DE3)/pET30a(+)hrpNEcc,HrpNEcc蛋白最高产量可达301.45mg·L-1,比在IPTG诱导下,用LB培养基发酵生产的HrpNEcc蛋白产量提高72.43%。进一步研究证实,TB培养基中的酵母提取物(yeast extract)含有某些诱导因子能够诱导hrpNEcc基因表达合成HrpNEcc蛋白,并且hrpNEcc的表达水平随酵母提取物来源和浓度的不同而存在较大差异。【结论】在不添加任何外源诱导剂的情况下,高含量的酵母提取物诱导重组大肠杆菌hrpNEcc表达合成HrpNEcc蛋白,但其诱导机制还有待进一步研究。
- 张姝王敏韩梅琳陈强马荣才高俊莲
- 关键词：蛋白合成生物农药
