张宜娜
- 作品数：23 被引量：42H指数：4
- 供职机构：河南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省科技攻关计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学环境科学与工程生物学医药卫生更多>>
- 猪伪狂犬病灭活苗和弱毒苗联合免疫小鼠的免疫效果研究
- 2023年
- 为了优化猪伪狂犬病(PR)免疫程序,本研究将SPF级昆明雌鼠分为JZ-45组(单免灭活苗)、HB-98组(单免弱毒苗)、JZ-45/JZ-45组(两次均免灭活苗)、JZ-45/HB-98组(首免灭活苗,二免弱毒苗)、HB-98/JZ-45组(首免弱毒苗,二免灭活苗)、HB-98/HB-98组(两次均免弱毒苗)和对照组,共7组,采用猪伪狂犬病病毒(PRV)JZ-45分离株灭活苗和商品化HB-98弱毒苗,以上述相应组免疫物对小鼠免疫,在免疫后0、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d和42 d分别采血,分离血清利用间接ELISA和中和试验对小鼠血清PRV特异性和中和抗体水平进行检测;并在免疫后42 d利用PRV JZ-45株对小鼠攻毒(攻毒剂量:100 LD_(50),LD_(50)=10^(2.681)/0.1 mL,100μL/只),观察其临床症状,计算小鼠存活率,并对各组小鼠剖检观察各脏器剖检病变。取小鼠脑、脾脏制备病理切片,观察各组小鼠各组织的病变。结果显示:免疫组小鼠血清PRV抗体及中和抗体水平在0~42 d均呈持续上升趋势,且HB-98/JZ-45组小鼠血清PRV抗体水平在各时间点均高于其它组。攻毒结果显示:单免组小鼠存活率均为80%,其余免疫组小鼠均无明显临床症状,对照组小鼠全部死亡。组织病理切片结果显示:除HB-98/JZ-45免疫组小鼠脾脏、脑部无明显异常外,其他免疫组小鼠脾脏组织均有少量中性粒细胞浸润,对照组小鼠脾脏白髓灶性坏死,有大量中性粒细胞浸润,脑部组织出现炎性细胞浸润,胞质空泡化等。结果表明,在首次免疫HB-98弱毒苗的基础上加强免疫1次JZ-45灭活苗,可对小鼠获得更好的免疫保护效果。本实验比较了不同的免疫程序对小鼠免疫保护效果的差异,为后续PRV免疫程序的改进提供指导,也为更好地控制PR提供参考。
- 陈雨张晓晓苗信永崔志莹赵睿杰陈静张宜娜李新生张红英夏平安吴斌
- 关键词：猪伪狂犬病灭活苗弱毒苗免疫效果攻毒保护
- 免疫复合物在PRRSV-ADE作用中的研究
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PorcineReproductiveandRespiratorySyndromevirus，PRRSV)是能够引起猪繁殖与呼吸综合征(PorcineReproductiveandRespirat...
- 张宜娜
- 关键词：荧光定量PCR法
- 文献传递
- 猪伪狂犬病病毒流行毒株JZ-45的分离鉴定与变异分析
- 2022年
- 利用ST细胞从猪伪狂犬病(PR)阳性样品中分离到1株猪伪狂犬病病毒(PRV),并对其生物学特性进行鉴定,扩增该毒株gC、gE全基因,进行测序和遗传进化分析。结果显示:该毒株在ST细胞盲传2~3代后出现稳定且典型的细胞病变(CPE),经6轮空斑纯化后,测其TCID_(50)为10^(-6.58)/0.1 mL;接毒培养12 h后,间接免疫荧光方法检测,可在荧光显微镜下观察到特异性免疫荧光。将纯化后的病毒液接种小鼠,测其LD_(50)为10^(-2.68)/0.1 mL,组织病理切片分析显示死亡小鼠的心脏、肝脏、脾脏等各组织具有明显的病理损伤,将100个LD_(50)病毒液接种家兔,2 d后接种兔子出现PR典型症状;同源性对比结果显示gC基因与国内经典、变异毒株同源性分别为99.2%~99.7%和99.9%~100.0%,与国外经典株同源性为96.0%~96.2%;氨基酸序列与国外经典株相比,在63位氨基酸位点处有连续7个氨基酸插入(AAASTPA);gE基因与国内经典、变异毒株同源性分别为96.7%%~99.4%和99.7%~99.8%,与国外经典株同源性为95.3%~97.8%;氨基酸序列与国外经典株相比,在492位氨基酸位点处有2个氨基酸插入(DG);遗传进化分析显示,该毒株的gC、gE基因与国内变异株位于同一进化分支,将该毒株命名为JZ-45。本试验研究结果为河南省PRV的流行病学遗传进化分析以及防控提供参考。
- 苗信永孔令昊陈雨赵世杰崔志莹李闻徐朋丽陈静张宜娜李新生夏平安吴斌
- 关键词：猪伪狂犬病病毒GC基因GE基因生物学特性
- PRRSV HeN-3弱毒株不同途径感染仔猪诱导天然免疫因子差异性比较
- 2021年
- 为了比较猪繁殖与呼吸综合症病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)HeN-3弱毒株经滴鼻和注射两种途径感染仔猪后诱导天然免疫因子产生的差异,经滴鼻和注射两种途径感染仔猪后,前腔静脉采集凝血与抗凝血,通过ELISA Kit检测血清中IFN-α蛋白水平;通过荧光定量PCR方法检测血清中病毒拷贝数及外周血淋巴细胞的细胞因子IFN-α、TNF-α、IL-1β的相对表达量并分析其差异;43 d后剖检仔猪,收集仔猪的肝脏、脾脏、肾脏制作病理切片,观察组织损伤情况。结果显示,两种途径感染仔猪的健康状况与对照组基本一致;注射组在3 d,滴鼻组在7 d出现病毒血症,注射组比滴鼻组的病毒血症持续时间长且血清中病毒拷贝数更高;两种途径感染仔猪外周血淋巴细胞中IFN-α的相对表达量先抑制后显著上调,血液中IFN-α蛋白水平在3,11,15 d显著高于对照组;两种途径感染仔猪的天然免疫因子IL-1β、TNF-α相对表达显著上调,但持续时间较短;两种途径感染仔猪的肝脏、脾脏、肾脏等组织器官未有明显病理变化。结果表明,PRRSV HeN-3弱毒株以滴鼻和注射两种方式感染仔猪,都未出现临床症状和病理变化,均能诱导产生一定水平的IFN-α,引起的天然免疫因子变化趋势相似。
- 孙杨杨李闻赵士杰苗信永孔令昊崔志莹徐朋丽陈雨张改平陈静张宜娜夏平安
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病理损伤
- 免疫复合物对猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的PAM细胞因子转录的影响被引量：5
- 2012年
- 本试验通过研究免疫复合物影响猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在巨噬细胞内增殖的因素,来进一步探讨免疫复合物经FcγR介导的PRRSV感染机制。本研究将含200TCID50PRRSV病毒液与等体积的终浓度为1.30mg·mL-1的猪IgG-兔抗猪IgG复合物分别先后和同时接种于PAM细胞,分别于12、24、36、48h收集细胞液,同时设PRRSV感染对照组、免疫复合物对照组和健康细胞对照组,利用建立的相对荧光定量PCR和绝对荧光定量PCR方法分别检测巨噬细胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA转录水平及PRRSV的RNA水平,并进行定量分析,同时采用ELISA方法检测健康细胞中IFN-α的蛋白水平。结果显示,在感染后12～36h期间,免疫复合物能够抑制PRRSV诱导的IFN-α的mRNA水平,TNF-αmRNA水平在感染后12h被促进,而在24～36h期间被抑制。在感染后48h,免疫复合物能促进IFN-α和TNF-α的mRNA水平,而在12～48h期间均能抑制IL-10的mRNA水平,此外,免疫复合物在感染12、24和36h时间段内均能明显促进病毒的增殖,但在48h后不显著。健康细胞中IFN-α的蛋白水平在培养12～48h之内呈"降-升-降"的趋势。结果表明,IFN-α蛋白的表达与其mRNA的转录不同步。在PRRSV感染初期,免疫复合物能抑制PRRSV诱导的抗病毒因子的mRNA水平,病毒的复制被促进,而在感染后期,抗病毒因子达到一定的浓度后发挥抗病毒作用,在一定程度上抑制病毒的复制。而TNF-α的转录规律不明显,表明免疫复合物可能同时与激活型和抑制型FcγR结合来共同调节PRRSV诱导的细胞因子的转录。
- 张宜娜李珂周永辉张继希杨青原慕春龙郭国富夏平安崔保安
- 关键词：PRRSV免疫复合物IFN-Α
- 河南省猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5和NSP2基因的遗传多样性及系统发育分析被引量：1
- 2022年
- 为了调查猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)在河南省的流行情况及变异规律,试验对2018—2019年河南省39家猪场送检的175份猪肺脏、脾脏、肝脏和淋巴结等样本进行PRRSV的PCR检测,对阳性样本扩增ORF5和NSP2基因,并进行遗传进化分析、氨基酸序列比对,同时预测ORF5基因的N-糖基化位点。结果表明:PRRSV的阳性检出率为25.71%(45/175),从45份阳性样本中扩增得到16个ORF5和10个NSP2基因序列。基于ORF5基因推导氨基酸序列的系统发育分析,检出的PRRSV阳性样本中有16株属于基因2型,可进一步划分为4个谱系;这16株PRRSV毒株在跨膜区(TM)、主要中和表位(PNE)、诱饵表位和N-糖基化位点上存在差异,免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)在77~82 aa区域高度保守。基于NSP2基因推导氨基酸序列的系统发育分析,检出的PRRSV阳性样本中有10株均属于基因2型,可进一步划分为2个谱系,并且其中类NADC30 PRRSV毒株在322~432 aa、483 aa和504~522 aa处有不连续的氨基酸缺失。说明2018—2019年河南地区PRRSV优势毒株是类NADC30 PRRSV毒株,且ORF5和NSP2基因发生较大变异。
- 赵士杰李闻徐朋丽苗信永崔志莹陈雨周立坤夏平安张宜娜陈静
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5NSP2系统发育分析
- 一种ASFV双基因重组PRRSV活载体疫苗的制备方法
- 本发明公开了一种ASFV双基因重组PRRSV活载体疫苗的制备方法，属于生物工程技术领域，该ASFV双基因重组PRRSV活载体疫苗的制备方法包括下列步骤：ASFV P30和P72 cDNA的扩增；融合PCR引物的设计与合成...
- 夏平安陈静张宜娜李闻崔志莹陈雨徐朋丽赵士杰苗信永解金辉
- 文献传递
- 动物医学专业本科毕业实习量化考评体系初探
- 2021年
- 对于本科院校的动物医学专业学生要求更高的临床实践和创新实操能力,除了应该掌握扎实的基础理论知识,还应该具有综合的临床实践能力。因此,学校在人才培养过程中,毕业实习这一环节显得尤其重要。毕业实习是个人专业综合素质和实践能力的结合,培养学生解决实际临床问题的能力。为了保证高质量完成这一教学任务,本文就动物医学专业的本科毕业实习量化考评体系进行了初探,旨在保证实习效果,培养高质量、高素质的一流人才。
- 杨明凡张宜娜夏平安
- 关键词：量化考评动物医学专业
- 猪唾液酸黏附素氨基端结构域基因的克隆表达及其多克隆抗体制备被引量：4
- 2012年
- 本试验旨在克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域基因,进而构建原核表达载体并诱导表达重组蛋白,以制备多克隆抗体。试验中应用RT-PCR技术从健康仔猪肺巨噬细胞中克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-Sn150,成功表达了分子质量大小约为43.1ku的γ亚单位重组蛋白。将重组蛋白pET-Sn150免疫小鼠,制备获得鼠抗pET-Sn150重组蛋白多克隆抗体,将得到的重组蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western blotting试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的血清效价为1∶12800;Western blotting试验结果证明,制备的鼠抗pET-Sn150多克隆抗体可以与重组蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性。本试验克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域基因并成功表达,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。
- 张继希张志远张宜娜周永辉张祥郝一妹张元元夏平安崔保安
- 关键词：克隆原核表达多克隆抗体
- 猪FcγR ⅡB多种剪接异构体的基因克隆与序列分析
- 2011年
- 目的:研究猪FcγRⅡB受体基因选择性剪接的多样性。方法:根据GenBank中猪FcγRⅡB(swFcγRⅡB)cDNA基因序列(DQ026064),应用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,应用RT-PCR技术,从不同个体的猪肺泡巨噬细胞中扩增FcγRⅡB基因并进行测序分析,在GenBank中查找猪FcγRⅡBDNA序列(NW-001886241.1),并用相关软件分析其外显子组成。结果:共克隆出6个转录体,其中转录体2,4在信号肽部分都有一个丙氨酸的缺失。转录体5,6是两个新型的FcγRⅡB转录体,转录体5胞外区只有一个Ig结构域,转录体6是一个只含有一个Ig结构域的推导性可溶性Fc受体。结论:猪FcγRⅡB的表达因RNA选择性剪接方式不同而呈现出多样性。
- 张宜娜刘肖萍张志远段二珍张继希周永辉夏平安崔保安
- 关键词：FCΓR剪接异构体多样性
