张彩琴
- 作品数：6 被引量：26H指数：3
- 供职机构：第四军医大学实验动物中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 裸鼠荷瘤实验中常见问题的解析和总结被引量：3
- 2012年
- 目的探讨裸鼠荷瘤过程中的出现的常见问题,提高裸鼠荷瘤的成功率。方法通过分析实验过程中影响裸鼠荷瘤的各种因素,寻求裸鼠荷瘤常见问题的解决方案。结果总结了在裸鼠荷瘤实验中的各种影响因素,并提出了合理的建议。结论裸鼠肿瘤模型的制备是研究肿瘤学、免疫学、药品与生物制品的安全性评价以及有效性筛选等研究课题的基础,本文为制备良好的裸小鼠肿瘤模型提供合理的建议。
- 赵勇伍静毛峰峰赵善明张彩琴白冰师长宏
- 关键词：裸鼠肿瘤
- 卡介苗Hsp16.3基因突变株对小鼠巨噬细胞RAW 264.7自噬的影响被引量：2
- 2016年
- 构建及鉴定卡介苗(BCG)Hsp16.3基因突变株,观察该突变株对小鼠巨噬细胞自噬功能的影响。通过聚合酶链反应(PCR)的方法扩增Hsp16.3基因两侧分子量分别为663 bp和684 bp的两个DNA片段,并将这两个目的片段分别插入p KO载体上相应的位点。通过硫酸卡那霉素筛选,利用双酶切以及测序的方法,获得阳性重组质粒p KO-Hsp16.3。将阳性重组质粒p KO-Hsp16.3电转入BCG感受态细胞中,经过硫酸卡那霉素和蔗糖两次筛选,得到BCG Hsp16.3基因突变株。将筛选培养的BCG Hsp16.3突变株用于小鼠巨噬细胞的感染实验,并通过Western Blot和细胞免疫荧光技术对自噬相关蛋白的表达水平的变化进行观察及分析。成功获得重组质粒p KO-Hsp16.3的阳性克隆;电转化该重组质粒,并经过硫酸卡那霉素筛选和蔗糖反筛选,成功得到BCG Hsp16.3基因突变株。通过Western Blot以及免疫荧光分析发现,BCG Hsp16.3基因的突变株促进了小鼠巨噬细胞自噬的发生。
- 杨丽师长宏赵勇张彩琴白冰
- 关键词：卡介苗自噬同源重组
- Rpf结构域及其突变体对MTB感染小鼠的免疫治疗作用
- 2013年
- 目的:观察复苏促生长因子Rpf结构域(Rpfd)及其突变体E54K(Rpfd1),E54A(Rpfd2)和E54K+D48A(Rpfd3)对MTB感染小鼠的免疫治疗作用。方法:表达、纯化Rpfd及其突变体Rpfd1,Rpfd2和Rpfd3。结核毒株H37R v从尾静脉感染BALB/c小鼠,剂量为1×105C F U。感染4w后,随机分为6组,在感染后4w、6w和8周分别腹部皮下注射含50μg/ml相应蛋白Rpfd、Rpfd1、Rpfd2、Rpfd3的生理盐水,同时设异烟肼(INH,54.25 mg/L)联合利福平(RFP,52.5 mg/L)治疗组。在感染后11w和13w,分别取一侧肺脏计数荷菌数。将各时间点的感染小鼠另一侧肺脏固定后进行组织学观察。结果:表达产物均可与抗-Rpf结构域单抗特异性结合,相对分子量约为32 kDa。感染后11w和13w,Rpfd、Rpfd1、Rpfd2治疗组肺部荷菌量明显少于Rpfd3治疗组和生理盐水组(P<0.05),但其对肺部MTB的控制未达到INH+RFP联合治疗的效果(P<0.05)。结论:MTB感染小鼠后,利用Rpfd蛋白进行免疫治疗,发现Rpfd及其突变体Rpfd1和Rpfd2蛋白能够显著的降低肺脏荷菌数,并且诱导淋巴细胞的增值。为利用Rpf结构域突变体制备MTB的免疫治疗疫苗提供了理论依据和实验基础。
- 尚淑琴赵勇赵善民张彩琴师长宏
- 关键词：结核分支杆菌突变体免疫治疗
- ESAT6和CFP10融合蛋白抑制巨噬细胞自噬体形成的实验研究
- 2011年
- 目的观察ESAT6和CFP10融合蛋白对感染MTB的巨噬细胞自噬体形成的抑制作用。方法雷帕霉素诱导小鼠巨噬细胞自噬体形成后,用MTB毒株H37Rv感染巨噬细胞,再用25μg/mL的ESAT6-CFP10融合蛋白作用于巨噬细胞,电镜观察自噬体相成的变化,计数MTB的菌落数。提取巨噬细胞总RNA和蛋白,以RT-PCR和免疫印迹方法检测自噬相关基因(atg)表达水平的变化。结果 ESAT6-CFP10融合蛋白后可抑制巨噬细胞中自噬体的形成,显著提高CFU指数(P<0.05),并导致atg分子表达水平下降,其中atg8表达量下降最为明显(P<0.05)。结论 ESAT6和CFP10融合蛋白可通过调控atg表达水平影响巨噬细胞自噬功能。
- 师长宏毛峰峰赵勇张海张彩琴白冰赵善民
- 关键词：结核分枝杆菌自噬ESAT6CFP10自噬相关基因
- 靶向性近红外荧光染料在肝癌模型研究中的应用被引量：10
- 2017年
- 目的探讨七甲川花菁近红外荧光(near-infrared fluorescence,NIRF)染料IR-783在肝癌模型影像研究中的应用,分析该染料靶向肿瘤细胞的分子机制。方法将标记荧光素酶的人肝癌细胞Hep G2皮下接种裸鼠,测试肿瘤发生部位生物发光(bioluminescence,BIL)信号与NIRF信号的相关性。采用肾包膜下移植的方式建立人肝癌裸鼠移植(patient-derived xenograft,PDX)模型,观察IR-783对肿瘤边界的识别能力;苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H&E staining)确认肿瘤发生的部位,免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)检测肝癌肿瘤组织中CEA、AFP、HIF1α和OATP3A1的表达;使用线粒体示踪剂(Mito Tracker)和溶酶体示踪剂(Lyso Tracker)确认NIRF染料在肝癌细胞中的结合部位;测试IR-783对正常肝细胞中混合培养的肝癌细胞鉴别能力。结果人肝癌裸鼠皮下移植瘤BIL与NIRF强度具有较好的相关性;NIRF染料IR-783能够清晰识别肾包膜移植肝癌肿瘤边缘;IHC染色显示肿瘤组织中CEA、AFP、HIF1α和OATP3A1均高表达;IR-783主要结合在肿瘤细胞的线粒体与溶酶体中;标记GFP的人肝癌细胞Hep G2能够被IR-783特异性识别。结论 IR-783是一种具有肿瘤靶向和成像特征的新型近红外荧光染料,其靶向性可能与肝癌组织中HIF1α和OATP3A1的高表达相关。
- 赵宁宁张彩琴赵勇谭邓旭师长宏
- 关键词：肝癌模型低氧诱导因子
- 结核分枝杆菌Hsp16.3蛋白影响小鼠巨噬细胞自噬形成的实验研究被引量：12
- 2011年
- 目的:观察热休克蛋白Hsp16.3对感染结核分枝杆菌(MTB)的巨噬细胞自噬体形成的作用。方法:以50 ng/μL雷帕霉素诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7自噬体形成后,用结核分枝杆菌毒株H37Rv感染巨噬细胞,再用Hsp16.3蛋白作用于巨噬细胞,电镜观察自噬体相成的变化,抗酸染色观察胞内细菌形态,计数MTB的菌落数。提取巨噬细胞总蛋白,Western blot方法检测自噬相关蛋白LC3表达水平的变化。结果:雷帕霉素诱导巨噬细胞形成自噬后感染结核分枝杆菌可使胞内细菌局限化,加入Hsp16.3蛋白可明显抑制了自噬体的形成,影响了结核分枝杆菌在巨噬细胞内的生存,显著增加了细菌的菌落形成单位,降低了自噬相关蛋白LC3的表达(P<0.05)。结论:Hsp16.3蛋白可能通过调节Atg8的表达水平抑制自噬体的形成。
- 师长宏江鹰赵勇毛峰峰张彩琴白冰张海
- 关键词：结核分枝杆菌自噬
