徐丹
- 作品数：17 被引量：27H指数：3
- 供职机构：昆明医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：云南省国际合作项目云南省教育厅科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 黄芪抗脑衰老作用的研究被引量：3
- 2008年
- 目的研究黄芪对快速衰老鼠脑中12个衰老相关基因表达的影响。方法雄性SAM-P/8老年鼠,随机分为对照组和黄芪组,黄芪组每日腹腔注射黄芪注射液,14d后取材,RT-PCR检测。结果黄芪组与对照组比较。Gabarb3、MAPKK4和Sortilin在鼠脑额叶和海马中表达下调,CalcineurinB、MAP2和P35仅在鼠脑海马中表达下调,RAB6A在鼠脑额叶中表达下调,Calmodulin、MAP1B、RAP2A、SCN2B和Synapsin的表达在黄芪组和对照组之间比较没有统计学差异。结论黄芪可下调上述7种基因在衰老鼠脑中的表达发挥抗衰老作用,通过抑制这些基因产物对脑的消极作用抗衰老。
- 郝春光徐丹习杨彦彬刘佳杨金伟戴萍于建春王廷华
- 关键词：脑老化
- 人胎脑NT-4基因的体外构建
- 2008年
- 目的体外构建人神经生长因子-4(neurotrophin-4,NT-4)与质粒载体pEGFP-N1(卡那霉素抗性)的重组体,为后续的转基因移植治疗脊髓损伤创造条件.方法用Trizol法提取人胎脑组织总RNA,经RT-PCR扩增,EorRⅠ和BamHⅠ核酸内切酶酶切电泳纯化获得人神经营养因子-4(NT-4)DNA.用含质粒载体pEGFP-N1DNA的大肠杆菌接种经划板,挑选菌落、振荡培养,并用碱裂解法提取质粒载体pEGFP-N1DNA,经酶切、电泳纯化后,通过连接、转化感受态细胞,DNA小量提取法获得NT-4目的基因与质粒载体pEGFP-N1DNA的重组体,经DNA测序证实.结果用上述方法成功获得NT-4-pEGFP-N1重组体.结论此方法是一种体外构建人胎脑NT-4基因的成熟、稳定而有效的方法,可为后续的神经干细胞转染NT-4基因移植治疗神经系统损伤创造条件.
- 李劲涛朱兴宝徐丹王廷华张华堂刘佳
- 关键词：人胎脑神经营养因子-4基因构建体外
- pcDNA3-hNGFb真核表达载体的构建及其表达
- 2008年
- 目的构建人神经生长因子β(NGF-β)基因真核表达载体并观察其在L929细胞内的表达。方法以RT-PCR从人脑组织总RNA中扩增NGF-βcDNA,将其克隆到真核表达载体pcD-NA3中,经酶切鉴定和序列分析后,以Lipofectamine2000介导转染L929细胞,应用免疫细胞化学和western blot鉴定NGF-β在细胞内的表达。结果RT-PCR产物为750bp的特异片段,重组质粒pcDNA3-hNGFb酶切后产生750bp和5.2kb的片段,DNA测序证实750bp片段的碱基序列与人NGF-βcDNA完全一致。将其转染L929细胞后,免疫细胞化学、western blot结果表明NGF-β及其前体proNGF-β能在真核细胞中正确表达。结论成功构建了重组真核表达质粒pcDNA3-hNGFb,为后续的研究奠定基础。
- 邓兴力杨智勇董坚王廷华徐丹冯忠堂
- 关键词：神经生长因子真核表达重组质粒转染
- 日光性角化病、鳞状细胞癌中TGF-β/Smad信号通路因子及相关因子表达变化的研究
- 目的探讨TGF-β/Smad信号通路和相关因子在日光性角化病(AK)与鳞状细胞癌(SCC)中的表达变化,初步阐明AK与SCC中TGF-β/Smad信号通路的作用及可能机制。方法选取病理证实的AK石蜡块24例,SCC石蜡块...
- 徐丹龙庭凤柴燕杰涂颖顾华何黎
- SAMP8小鼠在不同发育阶段海马和额叶中人类同源衰老相关基因的表达被引量：1
- 2007年
- 目的探讨13个与人类同源的衰老相关基因在不同月龄快速老化小鼠海马和额叶中的表达及变化,从中筛选出与脑老化最相关的基因。方法采用SAMP8快速老化小鼠,以同月龄SAMR1为对照,运用RT-PCR技术,观察SAMP8幼年组2周龄、成年组8月龄、老年组13月龄海马和额叶中13个同源衰老相关基因的表达及变化。结果13个基因在各组小鼠海马和额叶中均有表达。SCN2b基因在快速老化小鼠额叶的表达在幼年组与成年组和老年组之间比较有统计学意义(P<0.05),其它基因的表达无统计学意义。结论被调查的13个基因可能参与维持海马和额叶的生理功能,SCN2b在额叶衰老进程中可能发挥作用。
- 徐丹习杨彦彬刘佳李力燕戴萍王廷华
- 关键词：RT-PCR
- 大鼠脑源性神经营养因子基因克隆及其真核表达载体的构建
- 2008年
- 目的克隆大鼠脑源性神经营养因子(BDNF)基因的表达序列,构建大鼠BDNF基因真核表达载体。方法以RT-PCR从大鼠脑组织总RNA中扩增BDNF cDNA,将其克隆到真核表达载体pcDNA3中构建重组质粒pcDNA3-BN,以限制酶酶切鉴定和DNA序列分析鉴定重组质粒。结果RT-PCR产物为783bp特异片段,重组质粒酶切后产生783bp和5.2kb的片段,DNA测序证实783bp片段的碱基序列与大鼠BDNF基因序列完全一致。结论成功克隆大鼠BDNF基因表达序列并构建了BDNF基因真核表达载体pcDNA3-BN。
- 邓兴力杨智勇董坚王廷华徐丹冯忠堂
- 关键词：脑源性神经营养因子基因真核表达重组质粒
- 脑源性神经营养因子转基因成纤维细胞的构建与检测
- 2011年
- 目的:构建大鼠脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因修饰的成纤维细胞(fibroblasts FBs)。方法:真核表达载体pcDNA3/BDNF由昆明医学院神经科学研究所提供。FBs取自胎鼠。pcDNA3/BDNF重组质粒载体以阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导转染FB,并统计转染率。应用BDNF抗体进行免疫细胞化学和Western Blot检测以鉴定BDNF在细胞内的表达。并在体外培养条件下,应用经转染FBs和未转染FBs的培养液上清培养肾上腺嗜铬细胞瘤(pc12)细胞,验证BDNF的生物活性。结果:胎鼠成纤维细胞体外培养生长状况良好。FBs转染率为(52.14±3.31)%。免疫细胞化学和Western Blot结果表明BDNF在FBs中过表达,转染组与未转染组相比BDNF阳性细胞更多,染色更深,BDNF表达量明显增多,且具有促进PC12细胞生长的活性。结论:上述结果表明,大鼠源性BDNF基因修饰的FBs构建成功。
- 孟步亮李力燕徐丹刘佳王廷华
- 关键词：脑源性神经生长因子成纤维细胞转染
- 神经营养素3基因克隆及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2008年
- 目的克隆大鼠神经营养素-3(NT-3)基因的表达序列,构建大鼠NT-3基因真核表达载体。方法应用RT-PCR从大鼠脑组织总RNA中扩增NT-3基因cDNA,将其克隆到真核表达载体pcDNA3中构建重组质粒pcDNA3-N3,用限制酶酶切鉴定和DNA序列分析鉴定重组质粒。结果RT-PCR产物为822bp的特异片段,重组质粒酶切后产生822bp和5.2kb片段,DNA测序证实822bp片段的碱基序列与大鼠NT-3cDNA序列完全一致。结论成功克隆大鼠NT-3基因表达序列并构建了NT-3基因真核表达载体pcDNA3-N3。
- 邓兴力杨智勇冯忠堂董坚王廷华徐丹
- 关键词：真核表达重组质粒
- BDNF前体蛋白在成年恒河猴中枢神经系统中的分布被引量：6
- 2007年
- 采用免疫组织化学方法探讨脑源性神经营养因子前体蛋白(proBDNF)在成年恒河猴中枢神经系统(CNS)内的定位分布。结果显示:不同染色强度的proBDNF免疫阳性反应产物广泛分布于大脑皮质、海马、丘脑、小脑、中脑、脑桥、延髓和脊髓。神经元和胶质细胞的核染色明显,胞浆淡染,突起无染色。本研究结果表明在CNS的各个部位均存在proBDNF,提示proBDNF在猴的CNS广泛发挥作用。通过与文献报道的proBDNF在大鼠CNS的分布比较,发现proBDNF在不同物种之间的表达模式和作用可能存在差异;而与BDNF在成年猴脑中的分布进行比较,发现proBDNF在猴小脑的Purkinje细胞层及动眼神经核单独表达,提示proBDNF在这些部位可能发挥重要作用。本研究结果为探讨proBDNF在成年猴的分布及作用提供了重要的形态学资料。
- 徐丹李力燕张洪钿王廷华
- 关键词：免疫组织化学中枢神经系统
- 海洛因依赖与多巴胺D_2受体基因TaqⅠ A多态性的关联研究被引量：8
- 2006年
- 目的探讨海洛因依赖和多巴胺D2受体基因的关系.方法应用聚合酶链反应技术检测209例海洛因依赖者和109名正常对照多巴胺D2受体基因TaqⅠA多态性.结果海洛因依赖者和对照组之间的上述的基因型和等位基因频率的差异无显著性(P>0.05).结论多巴胺D2受体基因TaqⅠA多态性与海洛因依赖无关联.
- 徐振波徐丹张杰林勇陈晓刚陈林
- 关键词：海洛因依赖多态性
