戴一凡
- 作品数：40 被引量：45H指数：4
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 机体保护多肽对大鼠重复给药毒性研究被引量：1
- 2019年
- 目的:检测机体保护多肽(HuBPP)对大鼠产生的毒性反应,为临床提供无毒性反应剂量,从而为临床更安全地用药以及不良反应的监控提供参考信息。方法:80只SD大鼠单次静脉和肌内注射给药以确认给药剂量。选择0.2 mg/kg、1 mg/kg和4 mg/kg为本次实验的低、中、高剂量,并设置溶媒对照组,每组30只大鼠,雌雄各半。连续肌内注射给药一个月,实验期间观察大鼠质量、摄食量等指标,给药末期和恢复期采血检测各临床指标,病理学检测各主要脏器毒性变化。结果:急性毒性实验表明,20 mg/kg给药剂量下,实验组与对照组相比各观察指标未发现明显改变。长期毒性实验结果表明,与对照组相比,各剂量组大鼠质量、摄食量、主要脏器指标均未发现明显毒性反应(P>0.05)。长期毒性实验给药结束后,高剂量组雌鼠MCHC高于溶媒对照组,MPV低于溶媒对照组(P<0.01和P<0.05);中剂量对照组雌鼠TG高于溶媒对照组,Na^+浓度低于溶媒对照组(P<0.05);雄鼠高、中剂量组活化部分凝血活酶时间显著低于溶媒对照组(P<0.05),高剂量组Cl^-浓度显著高于溶媒对照组(P<0.05)。恢复期结束后高剂量组雄鼠红细胞体积分布宽度值低于溶媒对照组(P<0.05),低剂量组雌鼠丙氨酸氨基转移酶、血糖、三酰甘油显著高于溶媒组(P<0.05～P<0.01),但均处于文献报道正常变化范围内;其他指标差异无统计学意义。结论:在本实验条件下,HuBPP对大鼠的相对安全剂量为4 mg/kg及其以下剂量。
- 阮苗苗岳鹏沈姣李楚刘晶戴一凡
- 关键词：单次给药重复给药毒性
- OSBPL2基因缺陷型巴马小型猪肥胖相关特征的分析被引量：1
- 2020年
- 目的:分析氧化固醇结合样蛋白2(oxysterol binding protein-like 2,OSBPL2)基因缺陷型巴马小型猪肥胖相关的表型特征和可能机制。方法:将3月龄野生型(wild type,WT)和OSBPL2缺陷型(mutant type,MT)巴马小型猪饲喂高脂饲料(high fat diet,HFD)。喂食9个月后检测体重、皮下脂肪厚度,HE染色观察肝脏脂肪变性,电镜观察肝脏组织亚细胞结构,检测血清甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶等生化指标,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肝脏脂肪合成分化相关基因的变化,Western blot及免疫组织化学法检测脂肪酸结合蛋白4(adipocyte fatty acid binding protein 4,FABP4)及酰基辅酶A氧化酶1(acylcoenzyme A oxidase 1,ACOX1)蛋白表达水平。结果:MT-HFD组体重、皮下脂肪厚度明显高于WT-HFD组(P<0.05);HE染色结果显示,MT-HFD组脂肪细胞显著增大(P<0.001);MT-HFD组肝脏脂肪空泡变性明显多于WT-HFD组。qRT-PCR、Western blot及免疫组织化学染色结果发现,MT-HFD组肝组织中FABP4蛋白含量明显增加,ACOX1蛋白明显减少;电镜结果显示MT-HFD组肝脏线粒体相关内质网膜长度变短。结论:OSBPL2缺陷引起巴马小型猪肥胖相关表型特征,可能与抑制脂肪酸β-氧化、影响能量代谢平衡及促进脂肪分化有关。
- 王天明曾华沙王盈杨海元姚俊鲁雅洁魏钦俊曹新戴一凡
- 关键词：基因敲除肥胖
- GGTA1/β4GalNT2双基因敲除的巴马小型猪PFFs细胞系的建立被引量：1
- 2019年
- 目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立巴马小型猪胚胎成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs)α-1,3-半乳糖基转移酶(α-1,3-galactosyltransferase,GGTA1)/β-1,4 N-乙酸氨基半乳糖转移酶(β-1,4 N-acetylgalactosaminyltransferase,β4GalNT2)双基因敲除细胞系,为构建α-1,3-半乳糖(α-1,3-galactose,α-Gal)和SD(a)抗原缺失的巴马小型猪模型奠定基础。方法分别选取猪GGTA1基因的第三外显子和β4GalNT2基因的第八外显子为敲除靶点,利用在线工具(http://crispr.mit.edu)设计并合成单导向RNA(single guide RNA,sgRNA),以含有Cas9基因的pX330质粒为骨架构建打靶载体,转染野生巴马小型猪的PFFs,用T7EN1酶切验证打靶载体敲除效率。将打靶载体与G418抗性质粒(tdTomato)共转染巴马小型猪PFFs,经药物筛选获得阳性单细胞克隆后测序鉴定基因型。结果成功构建靶向GGTA1和β4GalNT2基因的Cas9/sgRNA表达载体。转染PFFs后用药物筛选得到31个单克隆细胞系,其中5个为GGTA1/β4GalNT2双基因敲除的细胞系。结论Cas9/sgRNA表达载体可以高效编辑PFFs的GGTA1/β4GalNT2基因并获得了双基因敲除的单细胞克隆,为构建GGTA1/β4GalNT2敲除的巴马小型猪提供必需的实验材料。
- 厉小雪李楚任雪洋王盈杨海元戴一凡
- 关键词：巴马小型猪
- 利用CRISPR/Cas9技术构建ACE2基因修饰的猪胎儿成纤维细胞系
- 2022年
- 目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)基因编辑的长白猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast,PFF)细胞系,为构建新型冠状病毒即严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus type 2,SARS-CoV-2)不易感猪模型提供实验材料。方法:(1)利用生物信息学方法对大鼠和鸡的ACE2氨基酸序列进行比对,将大鼠ACE2与SARS-CoV-2 S蛋白相互作用的关键氨基酸残基替换为鸡ACE2的氨基酸残基,设计嵌合的ACE2基因并构建ACE2基因敲入供体。(2)设计并合成靶向猪ACE2基因的sgRNA,克隆到p X330载体上构建ACE2基因打靶载体。(3)将ACE2打靶载体和ACE2基因敲入供体以及Neomycin抗性质粒共转染至长白猪PFF细胞,筛选G418抗性单细胞克隆并进行测序鉴定。结果:根据氨基酸序列比对结果,将大鼠ACE2蛋白的第19、31、34、35、42、353、354位氨基酸残基替换为鸡ACE2的氨基酸残基,设计合成了嵌合的ACE2基因。G418抗性单细胞克隆基因型分析结果显示获得了阳性单细胞克隆。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源ACE2基因敲除、嵌合ACE2敲入的长白公猪PFF细胞系,为构建SARS-CoV-2不易感猪模型奠定了基础。
- 张成霖方斌刘晓蕊李琳王盈杨海元戴一凡
- 关键词：ACE2
- 稳定表达红色荧光蛋白的人胚胎干细胞系的建立被引量：1
- 2016年
- 目的 :建立可以稳定表达红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)系。方法:优化核转染方法后,将RFP表达载体p EF1α-Ds Red-Express2导入h ESCs中。利用碱性磷酸酶染色、RT-PCR、免疫荧光染色和类胚体形等方法,比较核转染前后h ESCs的干细胞特性。结果:核转染后h ESCs的碱性磷酸酶染色结果为阳性。核转染前后h ESCs的Oct4、Sox2、Klf4、Nanog基因的表达未出现明显差异。RFP-h ESCs具有三胚层分化潜能,并且可稳定传30代以上。结论:成功建立稳定表达红色荧光蛋白的h ESCs,干细胞特性不受RFP的影响,可用于后续的实验研究。
- 胡菲菲张纬欧阳琦王荣根李泽王冠王盈杨海元戴一凡
- 关键词：人胚胎干细胞红色荧光蛋白
- 五指山猪近交系内源性反转录病毒无传染性新品系培育与研发被引量：1
- 2022年
- 众所周知,人类开展异种移植研究由来已久,很多研究将猪器官作为器官衰竭患者的替代选择.该方法的临床应用目前主要受到猪内源性逆转录病毒(PERV)传播的风险、供体猪与人之间的分子不相容性导致移植物被排斥等挑战.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所以2头五指山猪(WZSP)为系祖,于20世纪90年代末开始近亲繁殖,历经25年成功培育出五指山猪近交系.在此基础上,北京盖兰德生物科技有限公司与中国人民解放军军事科学院军事医学研究院等单位协作,持续实施近亲繁殖32年获得F29,近交系数高达0.998;提出遗传选育PERV无传染性新品系的方法,育出近交系延伸成果"五指山猪近交系PERV无传染性新品系";提出近交系PERV无传染性猪-猴角膜内皮异种移植(DSAEK)技术系列新方法,提高移植存活达180 d以上,避免PERV人兽传染的风险;利用CRISPR/Cas9载体组合,研制的近交系PERV无传染性双敲基因(GGTA1/β4GalNT2)猪,降低了免疫排斥反应;通过制备近交系转人PCSK9基因猪,揭示其影响动脉粥样硬化发病机理.
- 冯书堂马玉媛牟玉莲潘志强戴一凡
- 关键词：五指山猪近交系数猪内源性逆转录病毒近亲繁殖器官衰竭
- 人/猪SERPING1同源性比较及猪SERPING1敲除细胞系的建立
- 2022年
- 目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立SERPING1-/-猪胎儿成纤维细胞(PFFs)系,为构建遗传性血管性水肿模型提供细胞实验材料。方法首先比较人/猪SERPING1氨基酸同源性。其次,分析猪SERPING1基因有效的编码区,据此选择第八外显子为敲除靶点,设计并合成靶向猪SERPING1的单导向RNA(sgRNA),连接到含有Cas9核酸内切酶的pX330载体上,构建SERPING1打靶载体pX330sgRNA,将其转染至猪胎儿成纤维细胞中,G418药物筛选阳性单克隆细胞。最后,用T7E1酶切实验检测靶点编辑情况,测序验证单克隆细胞基因型。结果生物信息学分析结果提示人/猪SERPING1蛋白氨基酸同源性较高,氨基酸比对相似性达到65.87%。成功构建打靶SERPING1的载体,并转染到细胞,药物筛选获得SERPING1基因敲除的单克隆细胞,测序确认了突变的基因型。结论人/猪SERPING1蛋白同源性较高,适合用于构建遗传性血管性水肿模型。构建的Cas9/sgRNA表达载体实现了SERPING1基因编辑,获得基因敲除的单细胞克隆,为后续SERPING1-/-猪模型的构建提供了必需的实验材料。
- 王蒙朱晓晗刘晓蕊李琳王盈杨海元戴一凡
- 肌肉组织特异性表达Follistatin以提高牛瘦肉率的转基因载体
- 本发明公开了一种肌肉组织特异性表达Follistatin以提高牛瘦肉率的转基因载体，所述转基因载体含有小鼠的肌酸激酶(muscle creatine kinase，MCK)增强子、2.7kb牛的α-骨骼肌肌动蛋白基因的启...
- 戴一凡陈凌懿
- 文献传递
- 五指山猪近交系内源性反转录病毒无传染性新品系培育与研发
- 冯书堂马玉媛牟玉莲潘志强戴一凡
- 1培育五指山猪近交系并揭示其分子遗传基础及特异性现象项目组以2头五指山猪为系祖，历经近30年培育的近交系猪为材料，继续近亲交配获得世界首例F29小型猪近交系（0.998），列为国家畜禽遗传资源异地保种场（C1101001...
- 关键词：
- 关键词：哺乳动物品种选育
- CRISPR/Cas9载体组合在制备基因敲除猪的血液制品中的应用
- 本发明公开了CRISPR/Cas9载体组合在制备基因敲除猪的血液制品中的应用，所述基因敲除猪为敲除了GGTA1基因、CMAH基因和β4GalNT2基因的猪，所述CRISPR/Cas9载体组合包括GGTA1‑CRISPR/...
- 戴一凡杨海元王盈
- 文献传递
