戴西达
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：天津科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 一种快速显色定量检测微生物样品中棒酸的方法被引量：2
- 2012年
- 为满足从棒状链霉菌突变库中筛选棒酸高产株的需求,基于显色法原理设计了一种快速检测棒酸含量的方法.该方法的反应机制是β-内酰胺酶水解其黄色底物头孢硝噻吩(λmax=390nm),从而生成红色产物(λmax=486nm).由于棒酸是β-内酰胺酶不可逆抑制剂,在上述反应中棒酸含量的高低将影响底物和产物的量,因此可以通过测定底物和产物的比值(A390/A486)最终测定棒酸的含量.本实验证实,该方法对棒酸的灵敏度为50μg/L,最佳检测窗口为0.05～10mg/L,且该方法的检测结果与HPLC法相关性很好.通过筛选一个小规模棒状链霉菌突变株库,证实该显色法可以快速识别和评价棒酸高产突变株.因此该方法若用于工业实践中的大规模突变株筛选,将节省大量的时间与人力.另外,还利用该显色反应开发了平板检测法,直接根据颜色差异定性判断平板菌落棒酸产量高低.该显色法是一种快速、方便、可靠的棒酸产量检测方法,适用于高通量筛选棒酸高产株.
- 戴西达向四海李佳高强杨克迁
- 关键词：棒状链霉菌显色法Β-内酰胺酶
- 脲对棒状链霉菌棒酸合成的影响
- 2012年
- 【目的】棒酸(Clavulanic acid)是棒状链霉菌(Streptomyces clavuligerus)产生的β-内酰胺酶抑制剂,其合成过程中产生副产物脲,旨在探讨脲对棒酸合成的影响。【方法】通过发酵过程中脲和铵盐添加实验、阻断脲酶活性以及pH梯度实验研究脲对棒酸合成影响。【结果】脲添加实验结果表明:低浓度脲降低棒酸产量,当添加脲浓度达到20 mmol/L时,完全抑制棒酸合成。由于脲酶可以把脲水解为铵离子,导致铵离子浓度及pH提高,因此,通过阻断棒状链霉菌脲酶活性,可以更准确地反映脲对棒酸合成的影响。结果发现,脲酶敲除株发酵液中脲大量积累,浓度高达10 mmol/L,但棒酸产量没有明显降低,说明在该浓度下脲自身并不能抑制棒酸合成。添加脲降低野生菌棒酸产量,可能是脲被水解为铵离子或其引起的pH变化所致。而棒酸发酵液添加铵盐的结果显示铵离子对棒酸产量没有抑制作用;另外,pH梯度实验证实不同pH对棒酸产量影响较大。【结论】排除了脲和铵离子对棒酸合成的抑制作用,证实了脲酶水解脲导致pH提高是脲添加导致野生菌棒酸产量降低的真正原因,为进一步阐明棒酸合成调控机制提供了根据。
- 戴西达向四海赵友宝高强杨克迁
- 关键词：脲酶棒状链霉菌
- 脲对棒酸合成影响及棒酸高通量显色检测方法
- 棒酸(Clavulanic acid)是棒状链霉菌(Streptomyces clavuligerus)产生的p-内酰胺酶抑制剂,其合成过程中产生副产物脲。为了探讨脲对棒酸合成的影响,进行了添加脲的发酵实验,低浓度脲降低...
- 戴西达
- 关键词：脲酶显色法棒状链霉菌
