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易小萍: 作品数：35 被引量：60H指数：5; 供职机构：华东理工大学生物工程学院生物反应器工程国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项国家重大科学仪器设备开发专项更多>>; 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>

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促红细胞生成素糖基化的等电聚焦电泳分析被引量：1: 2012年; 目的建立一种用于促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)糖基化分析的更灵敏、更稳定的检测方法。方法比较固相pH梯度与载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳在灵敏度及EPO糖基化分析上的差异,并考察固相pH梯度等电聚焦电泳条带分布与唾液酸含量的关系。结果固相pH梯度等电聚焦电泳的灵敏度和分辨率明显高于载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳,可以更为客观地反映EPO的糖基化不均一性。固相pH梯度等电聚焦电泳的条带分布与唾液酸含量的测定结果基本一致。结论固相pH梯度等电聚焦电泳是一种更为理想的糖基化分析方法,可以有效分析EPO及其他重组蛋白药物的糖基化程度。; 潘婷琪易小萍孙祥明张元兴; 关键词：促红细胞生成素糖基化

过量表达XBP1对于重组CHO细胞中HBsAg分泌的影响被引量：1: 2010年; 考察了过量表达CHO细胞的内源性XBP1(X-box binding protein 1)对于重组CHO细胞中乙肝表面抗原(HBsAg)分泌的影响。结果表明:XBP1无法改善DMSO作用下CHO细胞中HBsAg的分泌,但能促进DTT作用下的HBsAg的分泌。进一步研究发现,细胞在DTT作用下形成了内质网分泌压力,而在DMSO作用下,没有形成内质网分泌压力。由此推断在内质网成为分泌限制部位的情况下,XBP1能够促进HBsAg的分泌;而DMSO通过促进二硫键的形成促进了HBsAg在内质网中的分泌,使得分泌限制部位发生在分泌过程中的其他细胞器。; 赵建兵易小萍张元兴孙祥明; 关键词：HBSAG CHO细胞二硫键

人胚胎肾(HEK)293细胞无血清培养基: 本发明涉及一种用于人胚胎肾(HEK)293细胞培养的无血清培养基，其是在现有基础培养基的基础上添加了转铁蛋白、胰岛素、Primatone、类脂混合物、氨基酸、无机盐和维生素等物质构成。该培养基能使(HEK)293细胞旺盛...; 易小萍陈春艳张元兴孙祥明; 文献传递

适于重组CHO细胞培养的无血清培养基的制备被引量：8: 2011年; 目的制备适于重组CHO细胞培养的无血清培养基(Serum-free medium,SFM)。方法在本室制备的无血清、低蛋白培养基SFMC的基础上,开发支持重组CHO-K1细胞生长的无动物源、无蛋白培养基(Protein-free midium,PFM,以柠檬酸铁、硫酸锌和酵母水解物替换SFMC中的转铁蛋白、胰岛素和动物组织水解物)及化学成分确定的培养基(Chemically definedmedium,CDM,以PFM培养基为基础,通过调整和优化氨基酸的浓度和其他部分营养物质浓度制备),评价各种无血清培养基的适应性、稳定性以及冻存、复苏性能,并分别在125 ml摇瓶和1.4 L生物反应器中进行培养。结果 CHO-K1细胞在PFM和CDM中生长良好,经125 ml摇瓶培养,最高细胞密度分别为9.3×106和7.3×106个/ml,最大细胞密度与SFMC培养基相比,分别提高了107%和62%。经1.4 L搅拌式生物反应器流加培养,PFM培养基的最高细胞密度可达9.8×106个/ml,培养216 h时,细胞活性仍维持在80%,重组蛋白表达量达110.5 mg/L;采用CDM培养基经流加培养,CHO-K1细胞最大密度可达9.5×106个/ml,但细胞培养时间较PFM培养基短。结论在SFMC培养基的基础上,成功开发出培养效果更优的PFM和CDM培养基。; 张大鹤易小萍张元兴孙祥明; 关键词：CHO细胞

鸡乳酸脱氢酶A基因突变对DF-1细胞能量代谢和法氏囊病毒增殖的影响: 2023年; 通过启动子优化构建了适用于DF-1细胞的CRISPR载体;随后通过同时共转靶向GgLDHA的2条sgRNAs,获得了13株GgLDHA基因突变型细胞株,其蛋白表达水平和酶活出现不同程度的下降。通过对突变克隆细胞株生长、葡萄糖和乳酸代谢、能量代谢以及IBDV增殖研究发现,乳酸对葡萄糖得率从2.1显著下降为1.6,腺苷三磷酸(ATP)合成速率明显提高,相比对照细胞最高提高了57%,突变细胞株的能量代谢效率获得了有效改善。突变型细胞株的IBDV滴度较野生型均有明显增加,相比对照最大提高了5倍。通过定向突变GgLDHA基因,明显降低了DF-1细胞的乳酸积累,有效改善了细胞的能量代谢,并显著促进了IBDV病毒的增殖,为提高IBDV病毒疫苗的生产能力提供了一种新思路。; 李祥超易小萍; 关键词：能量代谢糖酵解 IBDV

动物细胞培养过程PAT和在线生物检测技术被引量：3: 2018年; 利用动物细胞反应器大规模培养生产疫苗和抗体是现代生物医药产业的重要组成部分,这些产品在疾病管控、治疗重大疾病当中的作用是不可替代的。在过去的几十年中,动物细胞大规模培养技术已取得了长足的进步,相关产品的产量显著提高。现代生物制药对产品质量和一致性提出了更高的要求。越来越多的过程研究工作致力于提高产品质量和一致性。而一致的工艺性能和Qb D需要充分利用过程分析技术(process analytical technology,PAT)。对动物细胞培养过程的PAT应用、过程检测的类型、过程在线检测传感器和在线检测技术进行了较系统的介绍。; 易小萍; 关键词：动物细胞培养在线传感器在线检测

MDCK细胞微载体悬浮培养放大工艺研究被引量：8: 2012年; MDCK细胞对各种流感病毒具有高度敏感性,广泛应用于流感病毒的分离和疫苗制备。通过探索培养基中促进细胞贴壁的关键组分,并筛选水解物,开发了适合MDCK细胞生长的低血清培养基。发现钙、镁离子是细胞贴壁不可缺少的物质,麦麸水解物可以部分代替培养基中的血清。利用该低血清培养基,经过消化转移将MDCK细胞从5 L反应器放大至25 L反应器,微载体上细胞贴附均匀、生长旺盛,25 L反应器中培养48 h细胞密度可达30.5×105cells/ml。研究结果为工业规模反应器微载体悬浮培养MDCK细胞生产流感病毒奠定了基础。; 龚迪易小萍张元兴; 关键词：MDCK细胞微载体

表达重组蛋白的CHO-GS细胞的无血清培养被引量：5: 2005年; 采用DOEHLERT和HADAMARD统计方法建立了一个适于重组CHO-GS细胞生长和外源蛋白表达的无谷氨酰胺无血清培养基SFMB.对多种硫酸多聚糖进行了考察,选取低分子量硫酸葡聚糖,添加浓度为25 mg/L,可以避免细胞结团.用SFMB在方瓶中培养重组CHO-GS细胞,细胞生长优于含10%小牛血清的无谷氨酰胺DMEM/F12培养,最大细胞密度提高了40.7%,外源蛋白的表达水平也得到提高.在100 ml转瓶中分批培养,最大细胞密度和蛋白表达分别达到1.5×106 cells/ml和0.48 mg/L.; 张芳张立易小萍孙祥明张元兴; 关键词：重组蛋白 HADAMARD 细胞密度 CHO 牛血清

EGFP-PDGFRβ融合基因表达载体的构建及其转染COS-7细胞条件的优化: 2008年; 目的构建EGFP-PDGFRβ融合基因表达载体,并优化PEI介导基因转染COS-7细胞的条件。方法PCR扩增EGFP和PDGFRβ基因,依次连接至pcDNA3.1(+)质粒中,构建融合基因表达载体H-E-P-pcDNA3.1(+),经PEI介导转染COS-7细胞,并对转染条件进行优化。结果融合基因表达载体经酶切及测序证明构建正确。经PEI介导转染COS-7细胞的最佳条件为:DNA浓度2μg/ml,N/P比值15.5,在无血清条件下转染。此条件适用于滚瓶培养细胞的转染。结论已成功构建了EGFP-PDGFRβ融合基因表达载体,并优化了经PEI介导转染COS-7细胞的条件。; 任培君易小萍张元兴; 关键词：EGFP基因 COS-7细胞转染

重组CHO-GS细胞降低氨毒副作用的代谢研究被引量：3: 2006年; 在重组CHOGS细胞无血清批培养过程中,由于GS系统的引入,使氨对细胞的毒副作用显著降低,从而引起细胞生长和代谢途径发生变化。当起始氨浓度为1.42mmolL时,细胞最高密度可达到15.6×105cellsmL,随着氨浓度的增加,尽管细胞生长受到一定的抑制,但在氨浓度为12.65mmolL时,细胞密度仍可达到8.9×105cellsmL。当起始氨浓度从0.36mmolL增加到12.65mmolL时,细胞对葡萄糖的得率系数和乳酸对葡萄糖的得率系数降低,己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)酶活分别提高了43%、140%和25%,表明细胞对葡萄糖的利用增加,糖代谢更倾向于高能量生成途径。在谷氨酰胺代谢途径中,氨促进了谷丙转氨酶(GPT)酶活,谷氨酸到α酮戊二酸的转化逐渐倾向于谷丙转氨途径,谷氨酸脱氢酶(GDH)酶活降低,脱氨途径相应受到抑制。此外,氨浓度的增加使细胞群体处于G0G1期的比例逐渐升高,当氨浓度为12.65mmolL时,重组蛋白比生产速率比氨浓度为0.36mmolL时提高了2.1倍。; 张芳易小萍孙祥明张元兴; 关键词：重组CHO细胞谷氨酰胺合成酶无血清培养代谢

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