曹丽艳
- 作品数：27 被引量：41H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项甘肃省科技重大专项计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生天文地球更多>>
- 弓形虫GJS株表面抗原1基因的原核细胞表达及其抗原性分析
- 曹丽艳张德林张燕丽芦赟蔡志杰王艳华赵晋军
- 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA抗体检测方法的建立被引量：5
- 2022年
- 为建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的阻断ELISA方法,本研究利用原核表达的ASFV p30重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体。以重组p30蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的p30单克隆抗体作为检测抗体,经条件优化,建立了一种检测ASFV抗体的阻断ELISA方法。ROC曲线分析显示,该方法最佳阻断率临界值为16.63%。该方法与CSFV、FMDV-O/A、PRRSV、PEDV、SVA的阳性血清均无交叉反应;最低能检出1∶128稀释的阳性血清;批内和批间变异系数(CV)均<10%。用本方法与商品化试剂盒平行检测208份血清样品,Kappa值为0.96,表明具有高度一致性。上述结果表明,本研究建立的阻断ELISA方法具有较高的特异性和敏感性,可用于血清ASFV抗体的检测,为ASFV流行病学调查及猪群疫情监控提供技术支持。
- 周改静罗俊聪石正旺万颖杨波曹丽艳宋锐田宏郑海学
- 关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体阻断ELISA
- 弓形虫GJS株表面抗原1基因的克隆、表达及鉴定
- 弓形虫（Toxoplasma gondii）为专性细胞内寄生原虫，能引起人兽共患弓形虫病，严重危害人类健康和畜牧业发展。弓形虫表面抗原1（surface antigen1，SAG1）是位于弓形虫速殖子表面的特异性蛋白，也...
- 曹丽艳
- 关键词：弓形虫基因克隆免疫原性真核表达质粒
- 文献传递
- 刚地弓形虫代谢分泌抗原对山羊IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-4表达水平的影响被引量：3
- 2009年
- 为了探索刚地弓形虫代谢分泌抗原(E/SA)对山羊的免疫保护机制,将山羊随机分为6组,即E/SA组、E/SA+CpG组(未乳化)、E/SA+CpG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CpG组、对照组,每组3只,分别于免疫前、免疫后第2周、免疫后第4周、感染后第1周及感染后第2周采集山羊血清,用ELISA法检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4的表达水平。结果显示,各免疫组免疫后IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4的含量分别为175.40～215.60、89.95～253.80、230.40～301.50、39.20～54.20pg/mL,而免疫前分别为14.00～18.75、30.91～42.20、10.75～18.30、20.40～24.60pg/mL,对照组分别为16.50～36.56、37.75～58.20、11.50～21.75、21.61～27.60pg/mL,免疫组在免疫后体内IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4的含量明显升高,均显著高于对照组(P<0.05)。表明,E/SA可引起IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4水平的升高,说明E/SA免疫后可引起山羊较强的细胞免疫和体液免疫应答。
- 芦赟张燕丽曹丽艳王艳华苟惠天付宝权李文卉张德林
- 关键词：刚地弓形虫干扰素-Γ白细胞介素-2白细胞介素-4
- 弓形虫代谢分泌抗原对猪T细胞亚群的影响被引量：1
- 2009年
- 为了研究弓形虫代谢分泌抗原对仔猪T细胞亚群及抗体的影响,将仔猪随机分为6组,每组5只,分别为E/SA组、E/SA+CPG(未乳化)组、E/SA+CPG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CPG组及对照组。分别于免疫前、免疫后第2周、免疫后第4周、感染后第1周及感染后第2周采集仔猪外周血,用流式细胞仪对各试验组外周血中CD4+及CD8+T淋巴细胞亚群的动态变化规律进行检测,用IHA对抗弓形虫抗体水平做检测。结果显示,弓形虫代谢分泌抗原免疫仔猪后第4周,免疫组外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞水平和特异性抗体效价与对照组相比均有大幅度升高;感染后第1周,免疫组CD4+T细胞水平及CD4+/CD8+比值较感染前有不同程度降低,感染后第2周,免疫组CD4+T细胞水平及CD4+/CD8+比值上升至免疫后水平,CD8+水平下降,感染后特异性抗体效价进一步升高。表明,弓形虫代谢分泌抗原能够提高仔猪外周血CD4+及CD8+T淋巴细胞水平和特异性抗体水平。
- 蔡志杰王艳华付宝权李文卉芦赟张燕丽曹丽艳张德林
- 关键词：弓形虫T细胞亚群抗体水平
- 猪瘟病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用被引量：7
- 2022年
- 为建立一种简便、快捷、特异、敏感的猪瘟病毒(CSFV)E2抗体的胶体金检测方法,本研究将E2蛋白用胶体金颗粒标记,作为金标抗原,将E2蛋白及其单克隆抗体包被在硝酸纤维素膜(NC)上,分别作为检测线(T线)和质控线(C线),组装成检测猪瘟E2蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条。结果显示,该试纸条可在5~10 min完成检测,检测健康猪血清、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、口蹄疫A型病毒(FMDV-A)、口蹄疫O型病毒(FMDV-O)、塞内卡病毒(SVA)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)的阳性血清均无交叉反应;检测CSFV阳性血清的灵敏度可达1∶64(ELISA效价为1∶128);通过对田间101份猪血清样品进行检测,并与商品化猪瘟病毒抗体检测试剂盒的检测结果比较,两者的kappa值为0.92,为高度一致;试纸条在常温(18~25℃)和4℃条件下可分别稳定保存6个月和9个月。上述结果表明,本研究制备的试纸条具有较高的敏感性和特异性,且具有检测快速、操作简便、结果容易判断等特点,因此,对猪瘟现场检测有实际应用价值。
- 万颖罗俊聪石正旺麻园王丽娟杨波宋锐周改静曹丽艳田宏郑海学
- 关键词：猪瘟病毒胶体金试纸条抗体检测方法
- 猪急性腹泻综合征冠状病毒膜蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
- 2022年
- 为了制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)抗膜蛋白(M)多克隆抗体,本研究以SADSCoV GDS04分离株cDNA为模板扩增M基因片段,并将其克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,构建重组质粒p GEX-6p-1-M。测序正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,所获得的重组蛋白主要以包涵体形式存在,采用切胶纯化方式进行蛋白纯化。纯化后的M蛋白混合弗氏佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠,经过4次免疫,获得鼠抗M蛋白的多克隆抗体。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹试验(Western-blot)及间接免疫荧光试验(IFA)验证鼠抗M多克隆抗体的反应原性。ELISA结果显示,抗体效价能达到1∶12 800。Western-blot结果显示,制备的多克隆抗体可以识别重组M蛋白和SADS-CoV感染Huh7细胞表达的M蛋白。IFA结果显示,制备的多克隆抗体可以特异性识别SADS-CoV。以上结果表明,重组的M蛋白不仅具有良好的免疫原性,还具有良好的反应性,为后续SADS-CoV诊断方法的建立及M蛋白生物学功能的研究奠定了基础。
- 段月月孔祥雨袁聪索学鹏王琦郑海学曹丽艳
- 关键词：M蛋白原核表达多克隆抗体
- 弓形虫GJS株表面抗原1基因的克隆及真核表达质粒的构建
- 曹丽艳赵晋军张燕丽芦赟王艳华苟惠天付宝权张德林
- 猪流行性腹泻病毒N蛋白阻断ELISA抗体检测方法的建立及初步应用被引量：5
- 2022年
- 旨在建立一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白阻断ELISA抗体检测方法。本研究将纯化的N蛋白作为包被抗原,通过棋盘滴定法优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV抗体的阻断ELISA方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性试验。对140份临床血清样品进行检测,并将检测结果与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒试剂盒进行比较。结果显示,建立的阻断ELISA方法的抗原最佳包被浓度为625 ng·mL^(-1),血清最佳稀释比例为1∶1;酶标抗体的最佳工作浓度为1∶5000;检测健康猪血清以及猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和传染性胃肠炎病毒(TGEV)等常见猪病病原的阳性血清,均无交叉反应;PEDV阳性血清的灵敏度为1∶16,与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒(效价1∶32)的敏感性相当;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,说明具有良好的重复性和稳定性;对140份临床血清样品的检测并与商品化试剂盒检测结果进行比较,两者的kappa值为0.87,为高度一致。综上表明,本研究建立的阻断ELISA抗体检测方法可以应用于PEDV的防控、流行病学调查以及疫苗免疫后抗体水平的监测。
- 万颖周改静麻园石正旺肖书奇罗俊聪宋锐曹丽艳杨波王丽娟田宏郑海学
- 关键词：猪流行性腹泻病毒N蛋白抗体检测阻断ELISA
- 刚地弓形虫GJS株微线体蛋白3基因真核表达质粒的构建及在BHK-21细胞中的表达被引量：9
- 2009年
- 采用PCR技术从刚地弓形虫GJS株基因组DNA中扩增微线体蛋白3(MIC3)基因,并克隆到pMD18-T载体,经PCR、酶切及测序鉴定后,阳性重组质粒酶切并亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)后进行PCR、酶切及测序鉴定。将重组质粒转染BHK-21细胞。间接免疫荧光染色证明,质粒DNA成功转染到细胞中并得以表达。Western-blot分析证实,细胞裂解液及上清样品中有1条约39.2 ku的条带,可被山羊抗刚地弓形虫超免疫血清所识别,大小与预测值相符。表明,真核表达质粒pcDNA3-MIC3中的MIC3基因在BHK-21细胞中获得表达且表达产物具有抗原性。
- 张燕丽曹丽艳芦赟苟惠天王艳华付宝权李文卉张德林
- 关键词：刚地弓形虫基因克隆真核表达
