朱冰冰
- 作品数：9 被引量：25H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：上海市教育委员会重点学科基金国家自然科学基金上海市卫生局重点学科基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蛋白酶体抑制剂抑制肾间质成纤维细胞细胞外基质表达及其机制被引量：5
- 2008年
- 目的:本研究旨在观察蛋白酶体抑制剂MG132对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激下的大鼠肾间质成纤维细胞的细胞外基质表达的影响并初步探讨其机制。方法:体外培养大鼠肾间质成纤维细胞(NRK/49F),利用实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)分别观察MG132不同浓度直接刺激细胞和对TGF-β1(5ng/ml)诱导下产生的结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连结蛋白(FN)和III型胶原(ColIII)mRNA表达的影响。应用相同浓度的MG132(2.5μmol/L)预处理后,再加以TGF-β1分别刺激不同时间(0h,6h,12h,24h),同样用Realtime PCR检测上述因子的mRNA水平。利用Western blot观察MG132对TGF-β1诱导的FN和Smads蛋白表达的影响。ELISA方法观察MG132对TGF-β1诱导的FN蛋白分泌的影响。结果:MG132直接作用NRK/49F细胞即可明显降低CTGF、α-SMA和FN、ColIII的mRNA表达水平,随着MG132浓度(0.5、1、2.5、5μmol/L)增大,CTGF的mRNA表达均下降,分别为对照组的65%、46%、17%和20%;α-SMA的mRNA表达均下降,分别为对照组的10%、7%、4%和3%;FN的mRNA表达均下降,分别为对照组的54%、42%、25%和24%;ColIII的mRNA表达均下降,分别为对照组的30%、12%、5%和1%(均为P<0.05)。5ng/mlTGF-β1分别使CTGF、α-SMA和FN、ColIII mRNA表达增加为对照组的6.91、2.11、1.38和3.60倍(P<0.05),用MG132不同浓度(0.5、1、2.5、5μmol/L)预处理后,CTGF mRNA均下降,分别为对照组的3.30、2.84、1.06和0.74倍,α-SMA mRNA均下降,分别为对照组的0.50、0.31、0.28和0.19倍,FN mRNA均下降,分别为对照组的0.80、0.67、0.55和0.37倍,ColIII mRNA均下降,分别为对照组的0.57、0.35、0.28和0.05倍。MG132在各时间点均能使TGF-β1所引起的纤维化相关因子的mRNA表达水平下调。5ng/mlTGF-β1以时间依赖方式诱导p-Smad2、p-Smad3磷酸化增加,1h达到高峰。MG132预处理组p-Smad2、p-Smad 3及FN蛋白表达量与TGF-β1刺激组相比显著下降,各组Smad2/3蛋白表达无显著变�
- 韩琳陈慧朱冰冰靳远萌王伟铭陈楠
- 关键词：蛋白酶体抑制剂转化生长因子Β细胞外基质SMAD
- 蛋白酶体抑制剂对肾间质成纤维细胞增殖、凋亡及其相关蛋白的影响
- 2009年
- 目的探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导下的大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）增殖、凋亡及其相关蛋白的影响。方法用5μg／L的TGF-β1作用于NRK-49F。不同浓度（0-5μmol／L）MG-132预处理NRK-49F细胞后，MTT法检测细胞增殖；应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率；DNA凝胶电泳法观察细胞的凋亡情况；Western印迹检测p53、p27、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的变化。结果TGF-β1（5μg／L）可促进NRK-49F细胞增殖，而MG-132（0．25-5μmol／L）呈剂量依赖性地抑制这种效应，使细胞生长停滞在G1期。TGF-β1（5μg／L）单独不能诱导NRK-49F的凋亡（3．880％±0．365％比4．723％±1．582％），而MG-132（0．10、0．25、0．50、0．75、1．00、2．50μmol／L）预处理可呈剂量依赖性地促进细胞凋亡（调亡率分别为8．8％、18．7％、22．8％、31．3％、37．7％、38．9％）。MG-132（2．5μmol／L）＋TGF-β1组及MG-132（2．5μmol／L）组在DNA电泳中呈典型的梯状条带现象。Western印迹结果显示，MG-132可剂量依赖性地激活TGF-β1诱导的细胞周期及凋亡相关蛋白p53蛋白表达，促进caspase-3的活性片段产生，Bcl-2表达下调，并能使Bax和p21表达上调，但对p27没有明显的影响。结论MG-132可抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞增殖，并促其凋亡。该作用可能与MG-132对细胞周期及凋亡相关蛋白p53、p21、caspase-3、Bcl-2和Bax的调节有关，提示泛素蛋白酶体抑制剂可能成为将来防治。肾间质纤维化的一个潜在的治疗手段。
- 朱冰冰靳远萌韩琳陈慧王伟铭陈楠
- 关键词：转化生长因子Β1成纤维细胞细胞增殖蛋白酶体抑制剂
- TGF-β_1对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响被引量：7
- 2008年
- 目的观察转化生长因子β1（TGF-β1）对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响，探讨其在肾间质炎症进展中的作用。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞系（HK-2），用不同浓度（0～10ng／mL）TGF—β1刺激24h或用5ng／mLTGF—β1刺激不同时间（0～48h），荧光定量PCR技术和ELISA方法分别检测趋化因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白介素-8（IL-8）、正常T细胞活化后表达和分泌调节蛋白（RANTES）的mRNA和蛋白表达的变化。结果TGF—β1能诱导HK-2细胞MCP—1．IL-8、RANTES的表达上调，且呈剂量和时间依赖效应。2ng／mLTGF—β1作用24h即可诱导MCP—1和IL-8mRNA明显升高，5ng／mLTGF—β1作用时达高峰。MCP—1和IL-8蛋白分泌分别于刺激后36h和24h达高峰。2ng／mL和5ng／mLTGF—β1均可诱导RANTESmRNA明显升高，2h时RANTESmRNA表达开始升高，24h达高峰；RANTES蛋白基础分泌水平极低，TGF—β1作用24h时RANTES蛋白分泌开始升高，36h达高峰。结论TGF—β1诱导能明显上调趋化因子MCP-1、IL-8和RANTES的mRNA表达和蛋白分泌。因此，有效干预TGF—β1诱导的趋化因子的表达可能成为减轻肾间质炎症的途径之一。
- 章慧娣王伟铭靳远萌朱冰冰陈楠
- 关键词：转化生长因子Β1肾小管上皮细胞趋化因子
- SUMO化反应在肾脏疾病中的作用探索
- 2007年
- 小泛素相关修饰物(SUMO)与靶蛋白的共价结合是一种真核基因表达的翻译后加工形式。SU-MO化能够使蛋白质更加稳定,进而调节许多关键的细胞活动,如核运输、信号传递、凋亡、细胞周期调控以及基因表达的调控等。此外SUMO化还可通过过氧化物酶体增殖物激活受体-γ、核转录因子-κB及转化生长因子-β依赖的途径参与抗炎和致纤维化过程,本文就这一机制可能在肾脏疾病中发挥的作用作一综述。
- 朱冰冰王伟铭陈楠
- 关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体-Γ核转录因子-ΚB
- 蛋白酶体抑制剂对肾间质成纤维细胞凋亡和增殖的影响被引量：7
- 2007年
- 目的：探讨泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）及其在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导下的细胞凋亡和增殖情况，并初步探索其机制。方法：采用5ng／ml的TGF-β1作用于NRK-49F，不同浓度（0～5μM）的蛋白酶体抑制剂MG-132预处理NRK-49F细胞，应用MTT法检测其增殖情况，LDH法检测细胞毒性，应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率，Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态学变化，Westernblot检测p-IKβ1IKB蛋白的变化。结果：TGF-Bl（5ng／m1）能促进NRK-49F的增殖（0．661±0．04猫0．495±0．06），MG-132（O．25—5μM）呈剂量依赖型抑制这种效应；MG-132（0．1—5μM）对NRK-49F有一定的细胞毒性作用，在0．5μM时达高峰；TGF-β1单独不能促使NRK-49F的凋亡[（3．8±0．4）％摊（4．7±1．6）％]，但加用MG．132（0．1—2．5μM）干预后呈剂量依赖关系促进细胞凋亡，MG-132单独也有促进细胞凋亡作用；MG-132（0～1斗M）作用于TGF-β1诱导的NRK-49F后，其S期比例呈剂量依赖关系显著减少，G1期细胞比例增加；Hoechst33258染色显示MG．132（0．5μM）＋TGF-β1组及MG-132组细胞核均出现核固缩、核碎裂、凋亡小体等凋亡特异形态学改变；Westernblot结果显示，TGF-β1及MG-132（2．5μM）＋TGF-β1均能以时间依赖方式诱导p-IKB、IKB蛋白表达增加，且MG-132能上调TGF-β1诱导下的p-Iκβ, IκB蛋白表达。结论：泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对正常及病理状态下的NRK-49F都有促凋亡作用，并可能通过G1期阻滞过程来抑制其增殖作用。其机制可能与MG-132阻断IKB蛋白的泛素化降解有关。
- 朱冰冰靳远萌章慧娣王伟铭陈楠
- 关键词：蛋白酶体抑制剂转化生长因子Β肾间质成纤维细胞凋亡
- 白细胞介素1β对肾小管上皮细胞过氧化物酶体增殖蛋白激活性受体γ及辅调节因子表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨白细胞介素1β（1L-1β）介导的炎性反应中过氧化物酶体增殖蛋白激活性受体γ（PPAR-γ）及其辅调节因子的表达变化，分析其相互作用机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞（HK-2），应用IL-1β作用于HK-2细胞，收集细胞总mRNA、胞核蛋白和细胞培养上清液。应用实时定量PCR、Western印迹法、ELISA法、凝胶电泳迁移率实验（EMSA）法分别从mRNA水平、蛋白质水平、DNA结合活性水平检测PPARγ及其辅调节因子（包括辅激活因子和辅抑制因子）和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的表达变化。结果不同浓度的IL-1β（0～20μg／L）刺激24h后，PPARγ、辅激活因子SRC-1、SRC-2和PGC-1 mRNA表达水平均呈总体下调趋势（P〈0．05），同时辅抑制因子NCoR呈显著上调趋势（P〈0．05）。以10μg／L作为IL-1β最佳刺激浓度，SRC-2和PGC-1的mRNA水平在刺激1h后就分别显著下调了57％（P〈0．01）和48％（P〈0．01）；SRC-1的mRNA水平在刺激2h后显著下调了43％（P〈0．05），而PPARγ在刺激4h时下调了55％（P〈0．01）；NCoR在刺激8h后出现显著上调（为对照组的2．17倍，P〈0．05），之后又缓慢下降，至24h仍高于对照组，但差异无统计学意义。Western印迹结果显示，PPARγ的蛋白表达在IL-1β（10μg／L）刺激4h后出现显著下降。ELISA结果显示MCP-1的分泌水平呈持续增高，8h后达到最高值[（160．56±2．8）ng／L，P〈0．011，至24h仍为（50．82±1．25）ng／L（P〈0．01）。EMSA结果显示PPARγ的DNA结合活性呈总体减弱趋势，至24h达到最低值，而NF—κB的DNA结合活性均呈总体增强趋势，至24h达到高峰。结论在肾脏炎性反应进程中，IL-1β诱导的NF—κB炎性通路激活可引起PPARγ及辅激活因子的表达下调，MCP-1和辅抑制因子的表达上调。不仅PPARγ，其辅调节因子也积极参与肾脏炎性反应。
- 靳远萌陈慧朱冰冰韩琳王伟铭陈楠
- 关键词：白细胞介素1PPARΓ单核细胞化学吸引蛋白质1
- PPARγ活化对TGF-β_1诱导肾小管上皮细胞趋化因子表达的干预作用被引量：1
- 2008年
- 目的:观察PPARγ活化对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响,探讨其在肾脏纤维化中的干预作用。方法:体外培养肾小管上皮细胞HK-2,LDH法检测15d-PGJ2和TGL对HK-2的细胞毒性,应用不同浓度的15d-PGJ2和TGL作用于TGF-β1诱导下的HK-2细胞,应用实时荧光定量PCR技术和ELISA方法检测趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-8(IL-8)表达的变化。结果:5μmol/L15d-PGJ2和2.5μmol/LTGL不影响HK-2细胞MCP-1和IL-8mRNA基础表达和蛋白分泌。TGF-β1作用24h时,2.5μmol/L和5μmol/L15d-PGJ2及2.5μmol/LTGL均能有效干预TGF-β1诱导的MCP-1mRNA表达和蛋白的分泌(P<0.05)。IL-8的表达与MCP-1相似,2.5μmol/L和5μmol/L15d-PGJ2能显著抑制TGF-β1诱导的IL-8表达,TGF-β1诱导24h时2.5μmol/LTGL能显著抑制IL-8mRNA表达(P<0.05)。结论:PPARγ激动剂15d-PGJ2和TGL作用均能有效干预TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞趋化因子MCP-1和IL-8的表达,可能具有有效干预肾间质炎症作用。
- 章慧娣靳远萌朱冰冰王伟铭陈楠
- 关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体Γ转化生长因子-Β1肾小管上皮细胞趋化因子
- 转化生长因子β1诱导肾小管上皮细胞趋化因子的表达被引量：3
- 2008年
- 近年来研究表明，肾间质损害的主要参与者炎性细胞在趋化因子招募下开始浸润至肾间质并进一步活化，因此趋化因子的表达与肾脏疾病，尤其是与肾小管间质病变的关系受到众多研究者的关注。本研究将观察人近端肾小管上皮细胞（HK-2）在转化生长因子β1（TGF-β1）作用下单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、白介素8（IL-8）和正常T细胞活化后表达和分泌调节蛋白（RANTES）的分泌变化，以探讨TGF-β1对趋化因子表达的调节作用。
- 章慧娣王伟铭靳远萌朱冰冰陈楠
- 关键词：转化生长因子Β1肾小管间质病变人近端肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白肾间质损害
- 肿瘤坏死因子α对肾小管上皮细胞PPARγ及辅调节因子表达的影响被引量：2
- 2007年
- 目的：探讨在肿瘤坏死因子α（TNF-α）介导的炎症反应中PPARγ及其辅调节因子,包括辅激活因子SRC/p160家族（steroid receptor coactivators/p16family,包括SRC-1、SRC-2、SRC-3）、PGC-1（PPARγcoactivator-1）以及辅抑制因子NCoR（Nuclear receptor corepressor）和单核细胞趋化因子（monocyte chemotactic protein,MCP-1）的表达水平变化,分析其中相互作用机制。方法：体外培养人肾小管上皮细胞（HK-2）。用TNF-α分别在不同浓度和不同时间点刺激HK-2细胞,收集细胞总mRNA和胞核蛋白。应用Real-time QPCR法和Western蛋白印迹法分别从mRNA水平和蛋白质水平检测PPARγ及其辅调节因子和单核细胞趋化因子（MCP-1）的表达变化。结果：在不同浓度的TNF-α（0~20ng/ml）刺激24h后,PPARγ、SRC-1、SRC-2、SRC-3和PGC-1均呈总体下调趋势（P〈0.05）,同时NCoR和MCP-1呈显著上调（P〈0.05和P〈0.01）。选择10ng/ml TNF-α为最适刺激浓度,作用不同的时间（0~16h）。发现PPARγ、SRC-1和SRC-2的mRNA在刺激2h后出现显著下调（P〈0.05）,分别是37%、35%和41%（P〈0.05）;而SRC-3和PGC-1mRNA水平仅在刺激1h后就出现显著下调（P〈0.05）,分别是53%和46%（P〈0.05）;NCoR则在刺激16h后出现显著上调（约为对照组的2.16倍,P〈0.01）,之后又缓慢下降;MCP-1在刺激0.5h时出现明显上调（为对照组的2.74倍,P〈0.05）,4h时达到高峰（为对照组的11倍,P〈0.01）。West-ern蛋白印迹法观察到PPARγ和SRC-2在10ng/ml TNF-α刺激4h和2h后出现明显下降。结论：TNF-α可不同程度的抑制HK-2细胞PPARγ及几种辅激活因子（SRC-1、SRC-2、SRC-3、PGC-1）的表达,同时上调辅抑制因子（NCoR）和炎症介质MCP-1的表达。提示PPARγ及其辅调节因子积极参与炎症反应,并且可能在炎症过程中对PPARγ的表达发挥共同的调节作用。
- 靳远萌朱冰冰章慧娣王伟铭陈楠
- 关键词：肿瘤坏死因子单核细胞趋化因子
