李冠雪
- 作品数：27 被引量：79H指数：6
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学自动化与计算机技术更多>>
- 依据组胺及白三烯临床及实验相结合的变应性鼻炎个体化治疗策略探讨
- 文忠沈聪香李冠雪张鑫雨王会刚陈芳
- 脂肪来源间充质干细胞(ADSC)调控变应性鼻炎模型鼠T细胞免疫状态的研究
- 目的 探讨体外分离培养小鼠ADSC,并在构建变应性鼻炎模型鼠的基础上进一步探讨ADSC对模型鼠辅助性T细胞、Treg细胞的调节作用及其机制.方法 采用胶原酶消化联合贴壁筛选法分离提取小鼠ADSC;OVA联合明矾构建变应性...
- 文忠申聪香李冠雪张沈华杨柯柯
- NLRs模式识别受体在变应性鼻炎患者发病中的作用和意义被引量：5
- 2015年
- 目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域(NLRs)样模式识别受体家族Nod1、Nod2及Nalp3在变应性鼻炎(AR)患者发病中的作用和意义。方法:分别采用Real-Time RT-PCR、免疫组织化学及Western blot检测Nod1、Nod2、Nalp3蛋白在AR患者下鼻甲组织中的表达,以鼻中隔偏曲(NSD)患者下鼻甲黏膜作为对照,分别通过Western blot检测观察AR患者舌下脱敏治疗6个月后外周血单个核细胞中Nod1的改变,通过ELISA检测观察外周血IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ的变化。结果:3种Nods样受体在AR及NSD组鼻黏膜组织中均有表达,且主要表达于鼻黏膜上皮细胞、腺体上皮、炎性细胞(如浆细胞、嗜酸粒细胞)。但在AR组中Nod1mRNA及蛋白表达均低于NSD组(P<0.05),Nalp3mRNA及蛋白表达均高于NSD组(P<0.05);2组中Nod2mRNA、蛋白比较差异无统计学意义。脱敏治疗后6个月,Nod1表达改变与外周血IL-10的改变呈负相关(r=-0.88,P<0.05);Nod1表达改变与外周血IL-6的改变呈正相关(r=0.57,P>0.05)。结论:1Nod1、Nod2及Nalp3在2组组织中均有表达,但AR组Nod1表达低于NSD组,Nalp3高于NSD组,说明Nod1、Nalp3可能参与AR的发病。2舌下脱敏治疗6个月后,Nod1表达降低,其表达降低与外周血IL-10的改变呈负相关,提示Nod1可能通过调控IL-10变化参与舌下脱敏治疗机制。
- 张沈华刘艳慧申聪香李冠雪杨柯柯史欣文忠
- NLRs模式识别受体在变应性鼻炎患者鼻粘膜中的表达和意义
- 目的 探讨NLRs样模式识别受体(PRR) Nod1、Nod2、Nalp3在变应性鼻炎患者鼻粘膜中的作用及意义.方法 分别采用Real-Time RT-PCR、免疫组织化学及western-blot检测Nod1、Nod2...
- 文忠张沈华申聪香李冠雪杨柯柯史欣
- Lenti-TK介导间充质干细胞对鼻咽癌CD133^+干细胞的靶向迁移及杀伤作用被引量：2
- 2013年
- 目的:观察慢病毒-胸苷激酶(lentivirus-thymidine kinase,Lenti-TK)/间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对鼻咽癌CD133+干细胞的靶向迁移及杀伤作用。方法:构建包含TK基因的重组慢病毒表达载体Lenti-TK,感染MSC后得到Lenti-TK-MSC,RT-PCR及Western blotting检测Lenti-TK-MSC中HA-TK的表达。免疫磁珠法从鼻咽癌5-8F细胞中分选CD133+细胞;Transwell小室迁移实验检测Lenti-TK-MSC对CD133+5-8F细胞的趋向性;Lenti-TK-MSC联合更昔洛韦(ganciclovir,Lenti-TK-MSC/GCV)与CD133+5-8F细胞共培养,CCK-8试剂盒检测其对细胞的杀伤作用和旁观者效应。结果:成功构建重组慢病毒载体Lenti-TK,其滴度为1×108UT/ml,Lenti-TK(MOI=50)感染MSC 72 h时,感染效率达(95.1±0.1)%。Lenti-TK-MSC迁移至CD133+5-8F细胞组的细胞数明显多于CD133-5-8F细胞组、未分选5-8F细胞组[(83.0±8.7)vs(29.6±5.3)、(38.3±5.2),P=0.000]。Lenti-TK-MSC/GCV处理组与单独GCV处理组、Lenti-TK-MSC/GCV条件培养液(即Lenti-TK-MSC加入1 mg/L GCV培养48 h的培养上清)处理组相比,CD133+5-8F细胞的存活率明显降低[(37.2±2.3)%vs(98.5±3.1)%、(83.8±3.4)%,P=0.000]。Lenti-TK-MSC数量达到混合细胞总数(Lenti-TK-MSC和CD133+5-8F细胞)的20%时,CD133+5-8F细胞存活率为(68.2±2.3)%,表现出明显的旁观者杀伤效应。结论:Lenti-TK感染后MSC对鼻咽癌CD133+5-8F细胞具有靶向迁移及杀伤作用。
- 李冠雪申聪香文忠钟品能杨柯柯张沈华
- 关键词：鼻咽癌间充质干细胞旁观者效应
- 脂肪来源间充质干细胞调控变应性鼻炎小鼠T细胞免疫状态的研究被引量：10
- 2016年
- 目的 探讨脂肪来源间充质干细胞（adipose—derivedstemceils，ADSC）对变应性鼻炎（allergicrhinitis，AR）小鼠辅助性T细胞（Th）、调节性T细胞（Treg）的调节作用及其机制。方法取Balb／c小鼠60只，采用随机数字表法随机分为6组（分组表示为：致敏／激发／处理），分别为实验组1（OVA／OVA／高剂量ADSC）、实验组2（OVA／OVA／低剂量ADSC）、实验组3（0VA／OVA／磷酸盐缓冲液PBS）、实验组4（OVA／OVA／0）、对照组1（PBS／PBS／0）和对照组2（O／O／0）。常规分离提取小鼠ADSC，卵清蛋白（ovalbumin，OVA）联合氢氧化铝构建AR小鼠模型，尾静脉注射CM-Dil标记的ADSC（高剂量组：3×10^6；低剂量组：1×10^6）连续3d，48h后处死，酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）检测血清中自细胞介素（interleukin，IL）4、IL-6、IL-10和叮干扰素（Y interferon，IFN-y）的水平，反转录聚合酶链反应（reversetranscriptasepolymerasechainreaction，RT—PCR）检测脾脏中上述各细胞因子mRNA的表达，荧光显微镜下观察ADSC在AR模型鼠鼻黏膜中的迁移分布，鼻黏膜HE染色观察嗜酸粒细胞浸润情况。以SPSS13．0软件进行统计学处理。结果成功分离培养并鉴定小鼠ADSC。AR模型小鼠症状学评分与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。实验组1与实验组4相比，血清IL4、IL-6水平下调[组1：（17．95±7．78）、（27．51±5．93）pg／ml；组4：（56．82±9．12）、（70．034-7．22）pg／m1]，IFN-1、IL-10水平上调[组1：（367．74±、13．79）、（417．10±72．40）p∥ml；组4：（199．464-11．25）、（122．50±15．57）pgZml]，差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。实验组1与实验组2相比，血清IL-4、IL．6水平下调[组1：（17．95±7．78）、（27．51±5．93）pg／ml；组2：（41．57±12．27）、（56．21±9．23）pg／m1]，IFN-1、IL-10水平上调[组1�
- 李冠雪刘艳慧申聪香文忠张沈华杨柯柯
- 关键词：调节性T细胞
- 脂肪来源间充质干细胞(ADSC)调控变应性鼻炎模型鼠T细胞免疫状态的研究
- 背景:
变应性鼻炎(allergic rhinitis，AR)是一种呈全球蔓延的鼻腔过敏性疾病，最新根据变应性鼻炎评分(Score for Allergic Rhinitic，SFAR)标准其发病率为31.6％，严...
- 李冠雪
- 关键词：变应性鼻炎免疫平衡调节性T细胞特异性免疫治疗动物模型
- PinX1基因对鼻咽癌细胞顺铂化疗敏感性的影响及其机制被引量：2
- 2015年
- 目的 探讨PinX1基因对鼻咽癌细胞顺铂化疗敏感性的影响及其机制.方法 采用慢病毒构建的pCDH-CMV-PinX1-copGFP质粒载体转染鼻咽癌细胞,构建含PinX1基因载体的鼻咽癌Lenti-PinX1-5-8F细胞,同时构建Lenti-Ctrl-5-8F细胞（将不含PinX1基因的空载体转染5-8F细胞获得）及5-8F细胞作对照.将上述鼻咽癌细胞依实验分为4组：实验组为Lenti-PinX1-5-8F细胞＋顺铂组（含PinX1基因的Lenti-PinX1-5-8F细胞中加入顺铂药物）,对照组为Lenti-PinX1-5-8F细胞组（含PinX1基因）、顺铂药物组（5-8F细胞中加入顺铂）及5-8F细胞组.分别采用荧光定量PCR、流式细胞术、四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、小室技术、Western印迹法及药物敏感试验检测PinX1基因表达、端粒酶活性、鼻咽癌增殖抑制、与顺铂抗癌的协同作用及肺耐药相关蛋白（LRP）及B细胞淋巴瘤基因-2（Bcl-2）基因的表达,观察PinX1基因在鼻咽癌细胞中对顺铂化疗敏感性的影响及其机制.结果 Lenti-PinX1-5-8F细胞中端粒酶活性相对量均显著低于Lenti-Ctrl-5-8F细胞、5-8F细胞（0.146±0.004比0.967 ±0.016、1.000±0.034,均P＜0.01）.16 μg/ml的顺铂与PinX1基因联合能显著增强端粒酶活性下调后对鼻咽癌细胞的抑制作用.Lenti-PinX1-5-8F细胞＋顺铂组的细胞增殖指数均显著低于Lenti-PinX1-5-8F细胞组、顺铂药物组、5-8F细胞组[（14.39±3.66）％比（32.97±3.00）％、（31.18±4.24）％、（47.19±4.19）％,均P＜0.01].Lenti-PinX1-5-8F细胞中LRP、Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.64±0.14、0.57 ±0.12,均显著低于Lenti-Ctrl-5-8F细胞的0.84±0.19、0.81±0.16和5-8F细胞的0.83±0.35、0.78±0.27（均P＜0.01）.结论 PinX1基因能增强顺铂对鼻咽癌细胞的化疗敏感性,其作用有可能是通过下调鼻咽癌细胞端粒酶活性、抑制Bcl-2和LRP基因而实现的.
- 申聪香刘艳慧文忠杨柯柯李冠雪张沈华张鑫雨
- 关键词：鼻咽肿瘤化疗端粒酶
- 缺氧调控端粒酶活性及抑制鼻咽癌细胞增殖实验研究
- 2015年
- 目的探讨缺氧及siRNA沉默缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）后对鼻咽癌细胞中端粒酶催化亚单位（telomerase catalytic subunit,hTERT）、细胞周期和化疗耐药的影响。方法采用三气培养箱对鼻咽癌细胞5-8F和CNE2进行缺氧处理（1%O2）,蛋白质印迹法检测不同乏氧时相（0~72h）HIF-1α和hTERT蛋白的表达。将HIF-1α基因特异性siRNA分别转染鼻咽癌细胞株5-8F和CNE2,筛选出沉默效率最高的siRNA,实验分为未处理组（常氧）、未处理组（缺氧）、Negative-siRNA（缺氧）和HIF-1α-siRNA（缺氧）,荧光定量PCR及蛋白质印迹检测瞬时转染后hTERT及HIF-1α的表达。流式细胞术（flow cytometry,FCM）分析缺氧或沉默HIF-1α后对细胞周期的影响。MTT法检测缺氧或沉默HIF-1α后,鼻咽癌细胞对顺铂（DDP）和5-氟尿嘧啶（5-FU）的化疗敏感性。结果缺氧处理0~72h后鼻咽癌5-8F细胞HIF-1α（F=37.147,P〈0.001）和hTERT（F=70.069,P〈0.001）蛋白的表达上调,差异有统计学意义。HIF-1α-siRNA对5-8F细胞瞬时转染率〉98%。HIF-1α-siRNA组hTERT mRNA表达量为0.37±0.05,显著低于未处理组（缺氧）的1.00±0.00和Negative-siRNA（缺氧）的0.95±0.01,F=360.339,P〈0.001;hTERT蛋白表达量为（0.27±0.05）,显著低于未处理组（缺氧）0.54±0.00和Negative-siRNA组（缺氧）0.53±0.01,F=24.010,P〈0.001。未处理组（缺氧）G0/G1期细胞比例明显增加（45.63±2.01）%,显著高于未处理组（常氧）的（26.75±1.28）%,P〈0.001。5-8F细胞未处理组（常氧）对5-FU的IC50分别为（17.30±3.31）μg/mL,未处理组（缺氧）为（32.04±12.75）μg/mL,Negative-siRNA组为（33.90±0.87）μg/mL,HIF-1α-siRNA组为（13.72±2.36）μg/mL,F=3.704,P〈0.001。5-8F细胞缺氧组对DDP的化疗敏感性也降低,沉默HIF-1α后,5-8F细胞对DDP的化疗敏感性明显提高。除细胞周期外,CNE2与5-8F的结果均一致。结论缺氧促使鼻咽癌细胞发生G1/S阻滞及
- 史欣刘艳慧申聪香文忠李冠雪付新洒
- 关键词：鼻咽肿瘤缺氧诱导因子端粒酶逆转耐药
- 变应性鼻炎患者主要鼻部症状与体内组胺及白三烯D4含量的相关性研究被引量：9
- 2016年
- 目的:探讨变应性鼻炎(AR)患者主要鼻部症状与血清和鼻分泌物中组胺及白三烯D4(LTD4)含量的相关性,为AR的个体化治疗开辟新领域。方法:选取2014-01-2015-06期间收治的108例AR患者,按主要鼻部症状评分(喷嚏、流涕等)分成组胺症状组(喷嚏组)及白三烯症状组(鼻塞组),采用ELISA法测定AR患者血清和鼻分泌物中组胺和LTD4含量,分析症状与组胺及LTD4水平的相关性。结果:AR患者喷嚏积分为5.58±2.59,与血清和鼻分泌物中的组胺含量均呈正相关(r=0.79、0.78,均P<0.05),但与LTD4无明显相关性。鼻塞积分为5.34±2.36,与血清和鼻分泌物中的LTD4含量均呈正相关(r=0.74、0.72,均P<0.05),与组胺无明显相关性。血清中组胺及LTD4含量为(8.39±4.07)ng/ml和(0.356±0.155)ng/ml,分别与鼻分泌物中二者含量[(5.06±2.47)ng/ml及(0.215±0.092)ng/ml]呈正相关(r=0.99、0.98,均P<0.01)。结论:AR患者血清和鼻分泌物中的组胺水平升高与喷嚏组症状呈现高度一致性变化,血清和鼻分泌物中LTD4的含量升高与鼻塞组症状呈现高度一致性变化。
- 张鑫雨申聪香文忠李冠雪王会刚陈芳
- 关键词：组胺白三烯
