李娟
- 作品数：60 被引量：140H指数：6
- 供职机构：泸州医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学理学更多>>
- 八肽胆囊收缩素对小鼠神经元蛋白质磷酸化的影响
- 2008年
- 目的:从蛋白质可逆磷酸化修饰的角度,对小鼠神经元在八肽胆囊收缩素(CCK8)刺激下的信号转导通路进行初步研究。方法:将培养的小鼠神经元分为对照组(加入无磷培养基)、实验组(加入CCK8)、拮抗剂组(分别加入CCKA受体拮抗剂L-364718和(或)CCKB受体拮抗剂L-365260)。采用双向电泳法观察CCK8和受体拮抗剂作用下蛋白质磷酸化水平的改变。结果:CCK8作用不同时间后,神经元蛋白质磷酸化状态发生明显改变,涉及的信号转导相关磷酸化蛋白质包括多种蛋白激酶、胞内信号分子、激素受体、转录因子等;动力学分析结果显示,主要的信号转导相关蛋白的磷酸化时间动力学曲线多数呈峰型;应用CCK受体拮抗剂作用后的结果表明,在皮质神经元中同时存在CCK的2种类型受体,其中B型受体介导的信号转导途径更复杂。结论:CCKA型、B型受体均可介导CCK8在神经元的信号转导,其中B型受体介导的信号途径可能包括肌醇磷脂信使系统、cAMP-PKA途径、MAPK途径和JNK途径等。
- 王丽何涛李娟刘晓燕段承刚谢华福宋杰
- 关键词：胆囊收缩素神经元信号转导拮抗剂小鼠
- GDNF基因修饰对骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的影响
- 胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因修饰的骨髓间充质干细胞移植治疗脑损伤是一种很有临床应用前景的方法。本实验采用密度梯度离心和贴壁培养相结合分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)并鉴定,分别用GDNF基因重组腺病...
- 杨朝鲜廖彦生李娟高小青
- 卵巢癌组织蛋白双向电泳分析技术的建立被引量：2
- 2005年
- 目的初步建立卵巢癌蛋白质组研究的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性。方法提取卵巢癌肿瘤组织中蛋白质,以固相pH梯度等电聚焦为第一向,对关键环节如样品处理、上样量分析和水化等进行一系列优化。进一步采用垂直SDS-PAGE进行第二相分离,银染显色、图像分析或软件分析电泳图谱。结果通过实验条件的反复筛选获得了较为满意的卵巢癌双向凝胶电泳图谱。结论本文初步建立了卵巢癌蛋白质组双向电泳分析方法,具有较好的分辨率和重复性,为进一步研究卵巢癌的差异表达及特异性分子标志物的筛选奠定了基础。
- 甘淋李娟段春燕林海蕤何涛
- 关键词：双向电泳卵巢癌双向电泳分析分析技术组织蛋白双向凝胶电泳技术固相PH梯度
- Op18:一个潜在的肝癌诊断标志物被引量：1
- 2011年
- 目的探讨人原癌基因蛋白18(Op18)在肝癌细胞和组织中的表达及临床意义。方法应用RT-PCR、Western blot和免疫组化染色法检测常见肝癌细胞和88对配对肝癌组织及癌旁组织中Op18的表达。结果 Hep3B、SMMC-7721、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3和HCCLM6等常见肝癌细胞株中均见Op18表达;配对肝癌及癌旁组织中,RT-PCR发现肝癌组织中Op18阳性率达68.75%(11/16),Western blot发现Op18的阳性率为56.25%(9/16),免疫组化检测发现肝癌组织中Op18的阳性率为65.28%(47/72),P<0.05;Op18的表达与肿瘤大小数目、临床分化、门脉侵犯和TMN分期相关(P<0.05)。结论 Op18可能是一个潜在的肝癌诊断标志物。
- 甘淋宋杰李娟刘晓燕郭坤刘银坤
- 关键词：肝肿瘤
- 培养神经元及肝细胞蛋白质样品制备方法的比较研究被引量：1
- 2004年
- 目的 :优化神经元和肝细胞蛋白样品的制备方法 ,以提高双向电泳分析结果的正确性和可靠性。方法 :采用不同的细胞裂解液在不同的裂解条件下提取培养神经元或肝细胞的全细胞蛋白质 ,考马斯亮蓝G - 2 5 0测定蛋白质含量 ,SDS -PAGE、双向电泳对蛋白质进行电泳分离。结果 :蛋白质含量测定及电泳图谱的对比分析可见 ,用酶消化法和机械收集法所得蛋白质样品含量均较直接裂解法低 ;蛋白质抽提液中还原剂及去污剂的不同选择对结果的影响较大。结论 :采用培养瓶中细胞直接裂解法较酶消化或机械收集法收集细胞再提取蛋白质更为有效 ,还原剂TBP有利于提高蛋白质双向电泳结果的质量 ,在去污剂的使用方面神经元裂解宜采用 4 %CHAPS ,而肝细胞裂解则宜采用 2 %TritonX - 10 0。
- 李娟甘淋何涛李洪
- 关键词：细胞裂解电泳蛋白质去污剂还原剂
- 八肽胆囊收缩素刺激神经元所致信号转导中磷蛋白的动力学变化研究
- 2006年
- 目的研究八肽胆囊收缩素(Octa-cholecystokinin,CCK8)刺激小鼠神经元所致信号转导中磷酸化蛋白的时间动力学特征。方法培养乳小鼠神经元,随机分为CCK8刺激组和对照组,32P-NaH2PO4标记后分别给予CCK8(10-7mol/L)和等量无磷培养基,作用不同时间后液氮终止反应,经双向电泳、放射自显影,获得磷酸化蛋白质的电泳图谱。利用PDQuest2D分析软件并结合Swiss-Prot蛋白质数据库对磷酸化蛋白质斑点进行分析并绘制出一些重要的磷酸化蛋白质磷酸化改变的时间动力学曲线。结果CCK8作用不同时间后,神经元蛋白质磷酸化水平出现明显改变,通过对双向电泳图谱中100多个蛋白质斑点的定性分析,初步确定了小鼠神经元CCK8信号转导相关磷酸化蛋白包括多种蛋白激酶、磷蛋白磷酸酶、胞内信号分子、多种受体、转录因子及核蛋白等。对其中11种重要的信号分子动力学分析结果显示:曲线多数呈峰型,且蛋白质分子磷酸化达到峰值时间和高磷酸化状态持续时间各不相同,而PKAα表现为较持续的激活状态,MK07、GBOα则呈现双峰型。结论CCK8在神经元的信号转导具有整合与复杂自适应控制的特征。
- 王丽何涛李娟谢华福宋杰甘淋
- 关键词：八肽胆囊收缩素神经元磷酸化修饰信号转导
- 八肽胆囊收缩素对新生小鼠大脑皮层神经元生长的影响被引量：5
- 2011年
- 目的:探讨八肽胆囊收缩素(octa-peptide cholecystokinin,CCK8)对体外培养的新生小鼠大脑皮层神经元生长的影响。方法:原代培养新生小鼠大脑皮层神经元,采用烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)免疫细胞化学染色法鉴定皮层神经元,培养24h的皮层神经元随机分为对照组和CCK8刺激组(终浓度为10-7mol/L),作用24h、48h、72h、96h后,倒置相差显微镜下行动态观察,MTT法检测细胞的生长活性并以OD值绘制生长曲线。结果:CCK8处理后,有突起的神经元数目增加,存活时间延长,同一时间点的细胞活性明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CCK8能促进皮层神经元的生长,延长其存活时间。
- 李娟王丽刘晓燕梅志强何涛
- 关键词：胆囊收缩素神经元
- miR-26a mimics转染人肝癌细胞株HepG2的表达蛋白质组分析被引量：4
- 2011年
- 目的:通过分析microRNA-26a(miR-26a)mimics转染对人肝癌细胞株HepG2表达蛋白质组的影响,以确定miR-26a与肝癌发生发展的相关性。方法:常规培养人肝癌细胞株HepG2,经miR-26a mimics转染48 h后进行细胞周期分析,并裂解转染72 h的HepG2细胞提取蛋白,双向电泳分离,匹配对比各蛋白斑点的表达量,筛选主要差异表达蛋白进行质谱鉴定。结果:HepG2细胞经miR-26a mimics转染后细胞增殖受到抑制;其蛋白2-DE图谱与对照组比较,差异表达超过2倍的蛋白斑点有11个。其中,有3个蛋白斑点为表达上调,有8个蛋白斑点为表达下调。质谱鉴定为:膜联蛋白A1、过氧化物酶4、增殖细胞核抗原、载脂蛋白A1、细胞色素C氧化酶5a、细胞周期蛋白E2、磷酸核糖焦磷酸激酶3、周期素依赖性蛋白激酶1和磷脂酰乙醇胺结合蛋白。结论:miR-26a可能通过影响上述蛋白分子的表达,直接或间接地调控HepG2肝癌细胞的增殖、分化和死亡,以发挥其抗癌作用。
- 刘友平李娟代荣阳段春燕陈绍坤严冬梅陈川宁李洪
- 关键词：MIMICS微小RNAHEPG2细胞蛋白质组
- 重组V2毒素延长中性粒细胞的功能性生命期限
- 2001年
- 目的 :揭示V毒素在溶血性尿毒症 (HUS)和其他与多源性大肠杆菌 (VTEC)相关疾病中的病理性损伤作用。方法 :运用流式细胞技术 ,荧光标记探针———BCECF AM和细胞色素C还原法测定超氧离子 (O- 2 )技术。结果 :重组V2毒素 (rVT2 )对中性粒细胞自发性凋亡有着显著性的抑制作用。被rVT2 延迟了凋亡的中性粒细胞仍然保留多种生物学活性 ,如 :细胞表面粘附分子的表达 (CD6 2L减少和CD11b CD18增加 ) ,粘附人脐带静脉血管内皮细胞 (HUVEC)以及产生超氧离子 (O-2 )。结论 :V2毒素延长中性粒细胞的功能性生命期限 ,会加重炎症局部的炎症反应 ,这可能是HUS和VTEC相关疾病的发生过程中 ,中性粒细胞介导的组织损伤的一个重要因素。
- 刘佳佳曾付兰谢华福段承刚甘琳李娟宋杰赤星透近滕启文
- 关键词：中性粒细胞溶血性尿毒症
- 曲古抑菌素A对结肠癌细胞HCT116的作用及机制
- 2012年
- 目的通过组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDACs)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人结肠癌细胞HCT116增殖与凋亡作用的研究,探讨TSA对结肠癌的作用机制。方法:应用四氮唑蓝(MTT)法、Hoechst染色法、Western blot法和光学显微镜观察经不同浓度TSA处理后的HCT116增殖、凋亡与相关蛋白的改变。结果:TSA可时间依赖性地抑制HCT116细胞生长,促进凋亡,但浓度依赖性不明显。与对照组相比,TSA作用时,脆性组氨酸三联体(FHIT)和Bax蛋白的表达均出现一定程度增加,而骨桥蛋白(OPN)的表达出现一定程度的降低,AKT蛋白表达变化不明显。结论:TSA可抑制结肠癌细胞HCT116增殖,促进其凋亡,其机制可能与上调FHIT和Bax的表达,下调OPN表达有关。
- 王丽刘晓燕李娟杨志惠
- 关键词：结肠癌脆性组氨酸三联体骨桥蛋白
