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骨组织中细胞外间隙液流对骨骼细胞的作用被引量：4: 2005年; 李洪鹏许建中; 关键词：流体剪切应力成骨细胞

动力性三维培养大尺寸组织工程骨的方法学研究被引量：1: 2004年; 目的:大段的骨缺损需要在体外构建大尺寸的组织工程骨,需要解决如何保证支架材料内部的种子细胞充分的物质交换及保持种子细胞正常生理功能等问题。对组织工程骨体外构建技术进行综述,寻求适合构建大尺寸组织工程骨的方法。资料来源:检索时间为1991-01/2004-09。检索词为组织工程、生物反应器、细胞培养、支架材料等。检索手段包括电子检索和手工检索等。检索范围:Medline、中国期刊网CNKI数字图书馆(中国期刊全文数据库)、中文期刊数据库(VIP)及sciencedirect数字图书馆中期刊35种。选择关于组织工程骨体外构建的120篇相关文献进行分析、总结。资料选择:对资料进行初审,选取包括组织工程骨的随机对照临床试验(RCT)研究相关文献,筛除明显不随机临床试验的研究文献。数据提炼:排除重复的同一研究和Meta分析研究,符合本研究标准21篇。资料综合:对各种组织工程骨的体外构建的技术方法进行比较分析,并了解其在实验及临床应用中的效果。现有的各种体外构建组织工程骨的方法中,动力性三维培养在提供有利于种子细胞生长的微环境,优化种子细胞在支架材料内部的分布等方面有较大的优势,但各种利用动力性三维培养的实验中,其构建的组织工程骨的尺寸都还比较小,无法满足临床大尺寸骨缺损修复对组织工程骨的要求。; 李洪鹏许建中; 关键词：生物医学工程细胞培养生物反应器

体外培养人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的流体剪切应力参数被引量：1: 2005年; 目的:流体剪切力是骨骼组织中骨骼细胞所感受到的主要应力刺激,可促进骨骼细胞的增殖、分化及保持细胞正常的生理功能。应用流体剪切力刺激体外培养的人骨髓间充质干细胞,观察其向成骨细胞分化的可行性。方法:实验于2004-04/12在第三军医大学西南医院完成,骨髓来源于正常志愿献髓者。进行人骨髓间充质干细胞的分离培养,实验组应用平行平板流动腔对自愿捐献的人骨髓间充质干细胞给予强度为0.3Pa的流体剪切力刺激30min,对照组不加此干预,两组物理环境相同。应用流式细胞仪检测细胞周期,应用透射电镜观察细胞超微结构,检测细胞内碱性磷酸酶含量。评估其向成骨细胞分化和具备功能的特征。放免法检测培养上清液骨钙素含量。评估其是否向成骨细胞成熟晚期分化。并与静态培养对照组作对比。结果:①实验组经流体剪切力作用后,细胞胞体变大,突起较多,多角形细胞较对照组增多;透射电镜观察可见细胞胞浆丰富、核浆比例小,有较多的内质网,高尔基体发达,核仁明显,呈成熟细胞表现。②实验组细胞S期(DNA合成期)比例较对照组明显增高[(13.53±1.47)%,(7.56±2.54)%,P<0.01]。③实验组细胞内碱性磷酸酶含量第9天开始增高,且随时间延长,增高速度加快。④第12天及第24天检测的上清液骨钙素含量两组无明显差别(t=0.263,-0.406,P>0.05)。结论:本实验发现强度为0.3Pa作用30min的流体剪切力可以使人骨髓间充质干细胞早期的细胞内碱性磷酸酶含量增高,细胞开始向成骨细胞分化,但未能促使晚期的骨钙素表达升高,说明此强度的流体剪切力不能成功促进人骨髓间充质干细胞最终实现向成骨方向分化。需要继续探索能够促进人骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的流体剪切力的更有效的参数。; 李洪鹏许建中周强罗飞宋晋刚; 关键词：干细胞流体剪切力碱性磷酸酶骨钙素成骨细胞

双相接种法体外构建组织工程骨被引量：9: 2005年; 目的观察双相接种法构建组织工程骨的效果。方法取健康志愿者骨髓,密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞并进行体外扩增、诱导分化,然后应用双相接种技术与脱钙骨基质(DBM)复合构建组织工程骨,并与静置接种方法进行比较,计算接种效率、测定碱性磷酸酶活性,并用倒置显微镜、扫描电镜观察。结果与静置接种法相比,双相接种法不仅获得近100%的接种效率,而且在体外培养过程中,组织块中细胞的碱性磷酸酶活性均高于静置接种法,后者在第14天时碱性磷酸酶活性与前者第5天的水平相当。扫描电镜见双相接种法构建的组织块切面较平坦,孔隙较小,细胞包埋在胶原中,而静置接种法构建的组织块可见细胞,细胞外基质较少。结论双相接种法是一种高效的组织工程骨构建方法,有利于提高接种效率和促进组织工程骨的体外成熟。; 吕仁发周强许建中张劲松王序全李洪鹏; 关键词：胶原凝胶骨髓间充质干细胞

平行平板流动腔在研究人骨髓间充质干细胞流体力学方面的应用被引量：1: 2005年; 目的探讨改良制作的平行平板流动腔在对人骨髓间充质干细胞流体力学方面的应用。方法利用改良制作的平行平板流动腔对人骨髓间充质干细胞进行流体剪切力刺激,观察细胞形态学变化及超微结构。结果经强度为3dyne/cm2的流体剪切力作用30min作用后,细胞形态发生变化,透射电镜观察提示细胞成熟。结论平行平板流动腔可以作为研究人骨髓间充质干细胞流体力学方面的模型,人骨髓间充质干细胞经流体剪切力作用后,细胞形态发生变化,显示细胞成熟。; 李洪鹏许建中周强罗飞宋晋刚; 关键词：流体剪切应力骨髓间充质干细胞

不同频率脉冲电磁场促人骨髓间充质干细胞增殖的实验研究被引量：9: 2004年; 目的探求脉冲电磁场(pulsedelectromagneticfields,PEMF)促进人骨髓间充质干细胞(humanmesenchymalstemcells,hMHCs)增殖的适合频率。方法选用场强1.1mT,频率分别为5、25、50、75、100、150Hz的PEMF刺激hMSCs,30min/d,光镜观察细胞形态,MTT法和流式细胞技术检测细胞增殖水平及生长周期。结果各频率组PEMF刺激均能促进MSCs增殖;频率不同,促增殖的效应不一,其中50Hz频段效果最为显著,生长曲线比对照组明显前移,S期细胞百分比(28.89±0.25)%较对照组(13.57±0.55)%增高107%。结论频率是PEMF促进hMSCs增殖的重要影响因素之一,50Hz为促进hMSCs增殖的适合频率。; 宋晋刚许建中周强罗飞李洪鹏; 关键词：脉冲电磁场间充质干细胞增殖

不同频率脉冲电磁场诱导人骨髓间充质干细胞成骨分化的研究被引量：31: 2005年; 目的探讨脉冲电磁场(PEMF)诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化的适合频率. 方法选用场强1.1 mT,频率分别为5,25,50,75,100和150 Hz的PEMF作用于MSCs,每日30 min,连续作用21 d,光镜下观察细胞形态变化,电镜下观察细胞超微结构,酶化学法和放免技术检测细胞的碱性磷酸酶(ALP)含量和骨钙素(OC)表达情况. 结果不同频率PEMF作用组均能诱导MSCs向成骨细胞分化;从5～50 Hz频段,PEMF的成骨诱导作用随着频率的增加而增强;从50～150 Hz频段,PEMF的成骨诱导作用随着频率的增加而减弱. 结论频率是PEMF诱导MSCs成骨分化的重要影响因素之一,50 Hz可能为诱导MSCs体外成骨分化的适合频率.; 宋晋刚许建中周强罗飞李洪鹏; 关键词：成骨分化成骨诱导人骨髓间充质干细胞脉冲电磁场镜下观察

流体剪切应力对人骨髓间充质干细胞增值及细胞周期的影响被引量：10: 2005年; 目的观察流体剪切应力对人骨髓间充质干细胞增值及细胞周期的影响。方法人骨髓间充质干细胞受强度为3 dyne/cm2的流体剪切力刺激30 m in,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测细胞的增殖能力和细胞周期。结果流体剪切力作用后,细胞增殖能力提高,细胞活性增强。S期细胞百分比(13.53±1.47)%较对照组细胞的S期百分比(7.45±2.65)%约增高近181.6%。结论流体剪切力对人骨髓间充质干细胞具有提高细胞增殖能力及增强细胞活性的作用。; 李洪鹏许建中周强罗飞宋晋刚何清义尹芝华; 关键词：间充质干细胞流体剪切力细胞周期

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李洪鹏

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